GB23200.113-2018 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定
1 范围
本标准规定了植物源性食品中208种农药及其代谢物(参见附录A）残留量的气相色谱-质谱联用测定方法。
本标准适用于植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定。
2 规范性引用文件
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GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样用乙腈提取，提取液经固相萃取或分散固相萃取净化，植物油试样经凝胶渗透色谱净化，气相色谱 -质谱联用仪检测，内标法或外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 乙腈（CH3CN,CAS 号：75-05-8）。
4.1.2 乙酸乙酯（CH3COOC2H5,CAS 号：141-78-6）：色谱纯。
4.1.3 甲苯（C7H8,CAS 号：108-88-3）：色谱纯。
4.1.4 环己烷 (C6H12,CAS 号：110-82-7）：色谱纯。
4.1.5 氯化钠 (NaCl,CAS 号：7647-14-5)。
4.1.6 醋酸钠（CH3COONa,CAS 号：6131-90-4）。
4.1.7 醋酸（CH3COOH,CAS 号：55896-93-0）。
4.1.8 硫酸镁（MgSO4,CAS 号：7487-88-9）。
4.1.9 柠檬酸钠（Na3C6H5O7,CAS 号：6132-04-3）。
4.1.10 柠檬酸氢二钠（C6H6Na2O7,CAS 号：6132-05-4）。
4.2 溶液配制
4.2.1 乙腈-醋酸溶液（99+1）：量取 10 mL 醋酸加入 990mL 乙腈中，混匀。
4.2.2 乙腈-甲苯溶液（3+1）：量取 100 mL 甲苯加入 300 mL 乙腈中，混匀。
4.2.3GPC 流动相：环己烷-乙酸乙酯溶液（1+1）：量取 500 mL 环己烷加入 500 mL 乙酸乙酯中，混匀。
4.3 标准品
环氧七氯B内标和 208种农药及其代谢物标准品，参见附录 A，纯度≥95%。
4.4 标准溶液配制
4.4.1 标准储备溶液(1000 mg/L)：准确称取 10mg(精确至 0.1mg）各农药标准品，根据标准品的溶解性和测定的需要选丙酮或正己烷等溶剂溶解并定容至 10mL，避光-18 ℃保存，有效期 1 年。
4.4.2 混合标准溶液(混合标准溶液 A 和 B）：按照农药的性质和保留时间，将 208 种农药及其代谢物分成A、B 两个组。吸取一定量的农药标准储备溶液于 250mL 容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。混合标准溶液避光 0℃～4℃保存，有效期 1 个月。
4.4.3 内标溶液：准确称取 10 mg 环氧七氯 B（精确至 0.1 mg）用乙酸乙酯溶解后转移至 10mL 容量瓶中，定容混匀为内标储备液。内标储备溶液用乙酸乙酯稀释至 5 mg/L 为内标溶液。
4.4.4 基质混合标准工作溶液：空白基质溶液氮气吹干，加入 20 μL 内标溶液，加入 1 mL 相应质量浓度的混合标准溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）。基质混合标准工作溶液应现用现配。注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。
4.5 材料
4.5.1 固相萃取柱：石墨化炭黑-氨基复合柱，500 mg/500 mg，容积 6 mL。
4.5.2 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40～60 μm。
4.5.3 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40～60 μm。
4.5.4 石墨化炭黑（GCB）：40～120 μm。
4.5.5 陶瓷均质子：2cm（长）×1 cm（外径）。
4.5.6 微孔滤膜(有机相)：13mm×0.22 μm。
5 仪器
5.1 气相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电子轰击源(EI）。
5.2 凝胶渗透色谱仪或装置：配有 25mm（内径）×500mm，内装 Bio-Beads SX-3 填料或相当的净化柱。
5.3 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。
5.4 高速匀浆机：转速不低于 15 000 r/min。
5.5 离心机：转速不低于 4 200 r/min。
5.6 组织捣碎机。
5.7 旋转蒸发仪。
5.8 氮吹仪：可控温。
5.9 涡旋震荡器。
6 试样制备
6.1 试样制备
蔬菜和水果的取样量按照 GB/T 8855 的规定执行，食用菌样品随机取样 1 kg。样品取样部位按照 GB 2763 的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放入聚乙烯瓶中。
取谷类样品 500 g，粉碎后使其全部可通过 425 μm 的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各 500 g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。
6.2 试样储存将试样按照测试和备用分别存放。于-18 ℃条件下保存。
7 分析步骤
7.1 QuEChERS 前处理
7.1.1 蔬菜、水果和食用菌 称取 10 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 塑料离心管中，加入 10 mL 乙腈、4 g 硫酸镁、1 g 氯化 钠、1 g 柠檬酸钠、0.5 g 柠檬酸氢二钠及 1 颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈振荡 1 min 后 4 200 r/min 离心 5 min。吸取 6 mL 上清液加到内含 900 mg 硫酸镁及 150 mg PSA 的 15 mL 塑料离心管中；对于颜色较深的试样，15 mL 塑料离心管中加入885 mg 硫酸镁、150 mg PSA 及 15 mg GCB，涡旋混匀 1 min。 4 200 r/min 离心 5 min，准确吸取 2 mL 上清液于 10 mL 试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入 20 μL 的内标溶液，加入 1 mL 乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.1.2 谷物、油料和坚果
称取 5 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 塑料离心管中，加 10mL 水涡旋混匀，静置 30min。加入 15 mL 乙腈-醋酸溶液（4.2.1）、6 g 无水硫酸镁、1.5 g 醋酸钠及 1 颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡 1 min 后 4200 r/min 离心 5 min。吸取 8 mL 上清液加到内含1200 mg硫酸镁、400 mg PSA 及 400mg C18 的 15 mL 塑料离心管中，涡旋混匀 1 min。4200 r/min 离心 5 min，准确吸取 2 mL 上清液于 10 mL 试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入20 μL的内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6）， 用于测定。
7.1.3 茶叶和香辛料
称取 2 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 塑料离心管中，加 10 mL 水涡旋混匀，静置 30 min。加入 15 mL 乙腈-醋酸溶液（4.2.1）、6 g 无水硫酸镁、1.5 g 醋酸钠及 1 颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡 1 min 后 4200 r/min 离心 5 min。吸取 8 mL 上清液加到内含 1200 mg 硫酸镁、400 mg PSA、400mg C18 及 200 mg GCB 的 15 mL 塑料离心管中，涡旋混匀 1 min。4200 r/min 离心 5 min，准确吸取 2 mL 上清液于 10 mL 试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入 20 μL 的内标溶液，加入 1 mL 乙酸乙酯复溶， 过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
注：上述处理中净化前的上清液吸取量可根据需要调整，净化材料（无水硫酸镁、PSA、C18、GCB）用量按比例增减。
7.2 固相萃取前处理
7.2.1 提取
7.2.1.1 蔬菜、水果和食用菌
称取20g试样（精确至0.01 g）于100 mL塑料离心管中，加入40 mL乙腈，用高速匀浆机15000r/min匀浆2 min，加入5 g～7 g 氯化钠剧烈震荡数次，4 200 r/min离心5 min。准确吸取10 mL上清液于100 mL 茄型瓶中。40 ℃水浴旋转蒸发至1 mL左右，氮气吹至近干，待净化。
7.2.1.2 谷物、油料、坚果、茶叶和香辛料
称取5 g试样（精确至0.01 g）于100 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入20 mL 乙腈，用高速匀浆机15000 r/min匀浆2 min，加入5 g～7 g 氯化钠剧烈震荡数次，4200 r/min离心5 min。准确吸取5 mL上清液于 100 mL茄型瓶中，40 ℃水浴旋转蒸发至 1 mL左右，氮气吹至近干，待净化。
7.2.2 净化
用 5 mL 乙腈-甲苯溶液（4.2.2）预洗固相萃取柱（4.5.1），弃去流出液。下接 150 mL 鸡心瓶，放入固定架上。将上述待净化试样用 3mL 乙腈-甲苯溶液（4.2.2）洗涤至固相萃取柱中，再用 2 mL 乙腈甲苯溶液（4.2.2）洗涤，并将洗涤液移入柱中，重复两次。在柱上加上 50 mL 贮液器，用 25 mL 乙腈-甲苯溶液淋洗小柱，收集上述所有流出液于 150 mL 鸡心瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至近干。加入 50 μL 内标溶液，加入 2.5 mL 乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.3 GPC 前处理
称取 1g 食用油试样（精确至 0.01 g）于 10 mL 样品瓶中，加入 GPC 流动相（4.2.3）7 mL 混匀，将试样溶液置于 GPC 仪上净化，上样体积为 5 mL，流速为 5 mL/min，收集 1000s～2700s 时间段的洗脱液。将流出液浓缩至 5mL，准确吸取 4mL 于 10 mL 玻璃离心管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入 20 μL 的内标溶液，加入 1 mL 乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.4 测定
7.4.1 仪器参考条件
a) 色谱柱：14%腈丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱；30m×0.25mm×0.25μm，或相当者；
b) 色谱柱温度：40℃保持 1 min，然后以 40℃/min 程序升温至 120℃，再以 5℃/min 升温至 240℃，再 以 12 ℃/min 升温至 300℃，保持 6 min；
c) 载气：氦气，纯度≥99.999%，流速 1.0 mL/min；
d) 进样口温度：280℃；
e) 进样量：1μL；
f) 进样方式：不分流进样；
g) 电子轰击源：70eV；
h) 离子源温度：280℃；
i) 传输线温度：280℃；
j) 溶剂延迟：3 min；
k) 多反应监测：每种农药分别选择一对定量离子，一对定性离子。每组所有需要检测离子对按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和碰撞电压，参见附录 B。
7.4.2 标准工作曲线
精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用乙酸乙酯释成质量浓度为0.005 mg/L、0.01 mg/L、 0.05mg/L、0.1mg/L和0.5mg/L的标准工作溶液。空白基质溶液氮气吹干，加入20 μL内标溶液，分别加入1 mL上述标准工作溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）配制成系列基质混合标准工作溶液，供气相色谱质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标、农药标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。
