GB 23200.37-2016 食品安全国家标准
食品中烯啶虫胺、呋虫胺等20种农药残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本标准规定了食品中烯啶虫胺，呋虫胺，螺环菌胺，丁苯吗啉，杀螨隆-甲脒，十三吗啉，叶菌唑，杀螨隆-脲，密灭汀，泰妙菌素，多杀霉素A，多杀霉素D，氨基阿维菌素，甲氨基阿维菌素1，甲氨基阿维菌素2，烯丙酰草胺，驱虫磷，烯唑醇，阿维菌素，甲基甲酸胺阿维菌素农药残留量液相色谱-质谱/质谱测定方法和制样方法。
本标准适用于进出口大米、糙米、玉米、大麦和小麦中以上20种农药残留量的检测和确证，其它食品可参照执行。
2 规范性引用文件
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GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样用乙腈水溶液提取，先用正己烷液液分配，再用石墨碳和N-丙基乙二胺固相萃取柱（PSA）净化，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。
4 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 正己烷（C6H14）。
4.1.2 甲苯（C7H8）。
4.1.3 甲醇（CH4O）。
4.1.4 乙腈（C2H3N）。
4.1.5 甲酸（CH2O2）。
4.1.6 氯化钠（NaCl）：分析纯。
4.1.7 七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）：分析纯。
4.2 溶液配制
4.2.1 乙腈-甲苯溶液（3 + 1，V/V）：取300 mL乙腈，加入100 mL甲苯，摇匀备用。
4.3 标准品
4.3.1 农药标准品：烯啶虫胺（Nitenpyram，CAS No.：150824-47-8），呋虫胺（Dinotefuran，CAS No.：165252-70-0），螺环菌胺（Spiroxamine，CAS No.：118134-30-8），丁苯吗啉（Fenpropimorph，CAS No.：67564-91-4），杀螨隆-甲脒（Diafenthiuron-methanimidamide，CAS No.：136337-81-9），十三吗啉（Tridemorph，CAS No.：81412-43-3），叶菌唑（Metconazole，CAS No.：125116-23-6），杀螨隆-脲（Diafenthiuron-urea，CAS No.：136337-67-2），多杀霉素A（Spinosyn A，CAS No.：131929-60-7），多杀霉素D（Spinosyn D，CAS No.：131929-63-0），烯丙酰草胺（Dichlormid，CAS No.：37764-25-3），驱虫磷（Naphthalophos，CAS No.：1491-41-4），烯唑醇（Diniconazole，CAS No.：83657-24-3）纯度均≥97%；密灭汀（Milbemectin，CAS No.：51596-10-2），泰妙菌素（Tiamulin-fumarate，CAS No.：55297-96-6），氨基阿维菌素（Emamectin-amino），甲氨基阿维菌素1（Emamectin -methyl amino 1），甲氨基阿维菌素2（Emamectin -methyl amino 2），阿维菌素（Abamectin，CAS No.：71751-41-2），甲基甲酸胺阿维菌素（Emamectin-N-methyl formyl amino）纯度均≥80%。
4.4 标准溶液配制
4.4.1 标准储备溶液：分别准确称取适量的农药标准品，用丙酮配成浓度为100 μg/mL的标准储备液。标准储备液在0 ℃～4 ℃条件下贮存，每12个月配制一次。
4.4.2 混合标准储备溶液：分别吸取适量的密灭汀，泰妙菌素，多杀霉素A，多杀霉素D，氨基阿维菌素，甲氨基阿维菌素1，甲氨基阿维菌素2，烯丙酰草胺，驱虫磷，烯唑醇，阿维菌素，甲基甲酸胺阿维菌素12种农药的标准储备液配成混合标准储备溶液，为 A组农药，混合标准储备溶液的浓度为10 μg/mL；分别吸取适量的烯啶虫胺，呋虫胺，螺环菌胺，丁苯吗啉，杀螨隆-甲脒，十三吗啉，叶菌唑，杀螨隆-脲的8种混合标准储备溶液配成混合标准储备溶液，为 B组农药，混合标准储备溶液的浓度也为10 μg/mL。标准储备溶液在0 ℃～4 ℃条件下贮存，每6个月配制一次。
4.4.3 混合标准工作溶液：将A组和B组农药的混合标准储备溶液分别用乙腈稀释成适当浓度的标准工作液。在0 ℃～4 ℃条件下贮存。每3个月配制一次。
5 仪器与设备
5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.2 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。
5.3 旋转蒸发仪。
5.4 振荡器。
5.5 离心机：5 000 r/min。
5.6 固相萃取柱：石墨碳/N-丙基乙二胺（PSA），6 mL，500mg/500mg，或相当者。
5.7 具塞磨口三角烧瓶：300 mL。
5.8 离心管：50 mL，塑料。
5.9 滤膜：0.45 μm，有机相。
6 试样制备与保存
取大米、糙米、玉米、大麦和小麦等有代表性样品约500 g，取样部位按GB 2763附录A执行，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。4℃以下保存。
7 分析步骤
7.1 提取
称取试样20 g（精确至0.1 g）于300 mL具塞磨口三角烧瓶中，加入30 mL水，放置30 min。加入80 mL乙腈，振荡30 min，取上清液30 mL置于50 mL塑料离心管中，加3 g硫酸镁、2 g氯化钠和10 mL正己烷，振荡5 min，以3 000 r/min离心5 min，准确移取中间层（乙腈层）10 mL，供净化。
7.2 净化
石墨碳/乙二胺基丙基固相萃取柱用10 mL乙腈甲苯溶液预淋洗，将7.1中移取的10 mL乙腈溶液上样至固相萃取柱（SPE）上，收集流出液。用30 mL乙腈甲苯溶液洗脱，收集洗脱液，合并收集溶液，于40℃水浴减压浓缩至干，用1 mL甲醇溶解残渣，过膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱参考条件
a） 色谱柱：C18，5 μm，150×2.1 mm（内径），或相当者；
b） 流动相：流动相A是乙腈，B是0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序见表1；
c） 流速：300 μL/ min；
d） 进样量：A组30 μL；B组20 μL。
表1 梯度洗脱程序
7.3.2 质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式：多反应监测（MRM）；
d）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节个参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件见附录A。
7.3.3 色谱测定与确证
根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的混合标准工作液进行色谱分析。混合标准工作液和待测液中A组和B组农药的响应值均应在仪器线性响应范围内。对A组混合标准工作液和样液，B组混合标准工作液和样液等体积进样测定。在上述液相色谱-质谱/质谱条件进行测定，A组农药保留时间约为（min）：密灭汀1.8，泰妙菌素 4.5，多杀霉素A 8.0，多杀霉素D 8.5，氨基阿维菌素 8.9，甲氨基阿维菌1 9.0，甲氨基阿维菌2 9.3，烯丙酰草胺 10.5，驱虫磷 11.7，烯唑醇 13.5，阿维菌素 16.0，甲基甲酸胺阿维菌素 16.2；B组农药保留时间约为（min）：烯啶虫胺 2.0，呋虫胺 2.5，螺环菌胺 8.1，丁苯吗啉 8.1，杀螨隆-甲脒 9.5，十三吗啉 9.7，叶菌唑 13.0，杀螨隆-脲 14.6。标准溶液的二级质谱多反应监测质量色谱图见附录B。
按照上述液相色谱-质谱/质谱条件进行样品测定，若检测样品的色谱峰保留时间与标准品一致，且与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
7.4 空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。
8 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中各种农药的含量，计算结果需将空白值扣除。
式中： X —— 试样中农药的含量，微克每千克，μg/kg；
c —— 标准工作液中农药的浓度，单位为纳克每毫升，ng/mL；
A —— 样品溶液中农药的峰面积；
AS —— 标准工作溶液中农药的峰面积；
V —— 样液最终定容体积，单位为毫升，mL；
m—— 最终样液所代表的试样量，单位为克，g；
注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9 精密度
9.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10 定量限和回收率
10.1 定量限
本方法的定量限均为5 μg/kg。
10.2 回收率
添加回收率参见附录C。
