GB 23200.12-2016 食品安全国家标准
食用菌中440种农药及相关化学品残留量的测定
液相色谱-质谱法
前言
本标准代替GB/T 23202-2008 《食用菌中440种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》。
本标准与GB/T 23202-2008相比，主要变化如下：
—标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；
—标准范围中增加“其它食用菌可参照执行"。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
—GB/T 23202-2008。
1 范围
本标准规定了滑子菇、金针菇、黑木耳和香菇中440种农药及相关化学品（参见附录A）残留量液相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于滑子菇、金针菇、黑木耳和香菇中440种农药及相关化学品的定性鉴别，364种农药及相关化学品的定量测定，其它食用菌可参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改dan）适用于本文件。
GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，固相萃取柱净化，用乙腈-甲苯溶液（3+1）洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱纯。
4.1.2丙酮（CH3COCH3，67-64-1）：色谱纯。
4.1.3甲苯（C7H8，108-88-3）：色谱纯。
4.1.4异辛烷（C8H18，540-84-1）：色谱纯。
4.1.5二氯甲烷（CH2Cl2，75-09-2）：色谱纯。
4.1.6正己烷（C6H14，110-54-3）：色谱纯。
4.1.7甲醇（CH3OH，67-56-1/170082-17-4）：色谱纯。
4.1.8氯化钠（NaCl，7647-14-5）：优级纯。
4.1.9无水硫酸钠（Na2SO4，7757-82-6）：分析纯。650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。
4.2溶液配制
4.2.1乙腈-甲苯溶液（3+1）：取300 mL乙腈，加入100 mL甲苯，摇匀备用。
4.2.2甲酸溶液（0.1%）：取1000 mL水，加入1 mL甲酸，摇匀备用。
4.2.3乙酸铵溶液（5mmol/L）：称取0.385 g乙酸铵，溶于1000 mL水溶液中，摇匀备用。
4.2.4乙腈-水溶液（3+2）：取300 mL乙腈，加入200 mL水，摇匀备用。
4.3 标准品
农药及相关化学品标准物质：纯度≥95%，参见附录A。
4.4 标准溶液配制
4.4.1 标准储备溶液
分别称取5mg~10mg（精确至0.1mg）农药及相关化学品各标准物分别于10mL容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇、正己烷、丙酮、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度（溶剂选择参见附录A）。标准储备溶液避光4℃保存，保存期为一年。
4.4.2混合标准溶液（混合标准溶液A、B、C、D、E、F和G）
按照农药及相关化学品的保留时间，将440种农药及相关化学品分成A、B、C、D、E、F和G七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对440种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录A。
依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光4℃保存，保存期为一个月。
4.4.3基质混合标准工作溶液
农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液A、B、C、D、E、F和G，用于做标准工作曲线。基质混合标准工作溶液应现用现配。
4.5 材料
4.5.1固相萃取柱：Sep-Pak CarbonNH2，6mL，1g或相当者。
4.5.2微孔过滤膜（尼龙）：13mm×0.2μm。
5 仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
5.2分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。
5.3离心管：80mL。
5.4移液器：1 mL和10 mL。
5.5鸡心瓶：100 mL。
5.6高速组织匀浆机：最di转速不低于15000 r/min。
5.7离心机：不低于4 500r/min。
5.8旋转蒸发器。
5.9氮气吹干仪。
5.10样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。
6 试样制备
食用菌样品取样部位按GB 2763附录A执行，将样品切碎混匀均一化制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。将试样于-18℃冷冻保存。
7 分析步骤
7.1 提取
称取20g试样（精确至0.01g）于80mL离心管中，加入40mL乙腈，15000 r/min匀浆提取1min，加入5g氯化钠，再匀浆提取1min，4200 r/min离心5min，取上清液20mL（相当于10g试样量），40℃水浴旋转浓缩至1mL左右，待净化。
7.2净化
在Sep-Pak CarbonNH2固相萃取柱中加入约2 cm高无水硫酸钠，置于下接废液瓶的固相萃取装置上。加样前先用4mL乙腈-甲苯溶液预洗柱，当液面到达无水硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上中，并更换鸡心瓶接收。用2mL乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶，将洗涤液并入萃取柱中，重复此操作3次。将残留样液转移于萃取柱中。在固相萃取柱顶端连接50mL贮液器，用25mL乙腈-甲苯溶液洗脱农药及相关化学品，合并于100mL鸡心瓶中，40℃水浴旋转浓缩至0.5mL左右。于45℃下氮气吹干，用1mL乙腈-水溶液溶解残渣，经0.2μm微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱仪测定。同时取不含农药及相关化学品的食用菌样品，按7.1和7.2步骤制备样品空白提取液，用于配制基质混合标准工作溶液。
7.3 测定
7.3.1A、B、C、D、E、F组液相色谱-串联质谱参考条件
色谱柱：
a) ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100 mm ×2.1mm（内径）或相当者；
b) 流动相及梯度洗脱条件见表1；
c) 柱温：40 ℃；
d) 进样量：10 μL；
e) 电离源模式：电喷雾离子化；
f) 电离源极性：正模式；
g) 雾化气：氮气；
h) 雾化气压力：0.28 MPa；
i) 离子喷雾电压：4000 V；
j) 干燥气温度：350 ℃；
k) 干燥气流速：10 L/min；
l) 监测离子对，碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。
7.3.2 G组液相色谱-串联质谱参考条件
a）色谱柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100 mm ×2.1mm（内径）或相当者；
b) 流动相及梯度洗脱条件见表2；
c) 柱温：40 ℃；
d) 进样量：10 μL；
e) 电离源模式：电喷雾离子化；
f) 电离源极性：负模式；
g) 雾化气：氮气；
h) 雾化气压力：0.28 MPa；
i) 离子喷雾电压：4000 V；
j) 干燥气温度：350 ℃；
k) 干燥气流速：10 L/min；
l) 监测离子对，碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。
7.3.3定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度＞50％，允许±20％偏差；相对丰度＞20％至50％，允许±25％偏差；相对丰度＞10％至20％，允许±30％偏差；相对丰度≤10％，允许±50％偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。
7.3.4 定量测定
本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。440种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图参见附录C。
7.4平行试验
按以上步骤对同一试样进行平行试验。
7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
8 结果计算和表述
液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式（1）计算：
式中：
Xi——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
ci——从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品溶液所代表试样的重量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9 精密度
9.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E 的要求。
10 定量限和回收率
10.1 定量限
本方法的定量限见附录A。
10.2 回收率
当添加水平为LOQ、4×LOQ时,添加回收率参见附录F。
