第四法 农药多残留量测定法（质谱法）
—、定性测定方法
本法系用气相色谱-串联质谱法与液相色谱-串联质谱法对中药中农药残留的快速定性筛查，发现残留农药，便于农药定量测定。实验室应建立必要的质控手段，保证定性结果准确。
1.气相色谱-串联质谱法
色谱条件 以（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25µm）。进样口温度240℃，不分流进样。载气为高纯氦气（He）。进样口为恒压模式，柱前压力为146kPa（可依据表2中农药保留时间调整柱前压力）。程序升温：初始温度70℃，保持2分钟，先以每分钟25℃升温至150℃，再以每分钟3℃升温至200℃，最后以每分钟8℃升温至280℃，保持10分钟。
质谱条件 以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电子轰击源（EI），离子源温度280℃。碰撞气为氮气或氩气，流速1.5ml/min。质谱传输接口温度280℃。质谱监测模式为多反应监测（MRM），各化合物参考保留时间、监测离子对、碰撞电压（CE）与检出限参考值见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。
等等
定性用混合对照品溶液的制备 取本法“二、定量测定方法"中的基质混合对照品溶液作为定性用混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本法“二、定量测定方法"中的供试品溶液，即得。
测定法 分别精密吸取供试品溶液和定性用混合对照品溶液各1µl，注入气相色谱-串联质谱仪，按保留时间与定性离子相对丰度比对88种农药进行定性测定。
结果判断 供试品色谱中如检出与对照品保留时间相同的色谱峰，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的2对监测离子对均出现，供试品溶液的监测离子对峰面积比与浓度相当的对照品溶液的监测离子对峰面积比进行比较时，相对偏差不超过下列规定的范围，则可判定样品中存在该农药：相对比例＞50%，允许±20%偏差；相对比例20%~50%，允许±25%偏差；相对比例10%~20%，允许±30%偏差；相对比例≤10%，允许±50%偏差。
2.液相色谱-串联质谱法
色谱条件 以十八烷基硅烷键合核壳硅胶为填充剂（柱长15cm，内径为3mm，粒径为2.7µm）；以0.05%甲酸溶液（含10mmol/L甲酸铵）为流动相A，以0.05%甲酸的甲醇溶液（含10mmol/L甲酸铵）为流动相B，按下表3进行梯度洗脱；柱温为25℃，流速为0.4ml/min。
质谱条件 以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电喷雾（ESI）离子源，依据表4选择正离子或负离子扫描模式。监测模式为多反应监测（MRM），各化合物保留时间、监测离子对、碰撞电压（CE）和检出限的参考值见表4。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。
等等。
注：1.表中化合物22、125与210为内标。
2.部分化合物含有多个异构体，表中提供了多个异构体峰的参考保留时间。
3.表中218~221化合物使用负离子扫描模式测定，其余化合物采用正离子扫描模式测定。
4.鉴于中药材基质的复杂性，为便于方法使用，部分化合物提供了多个监测离子对。依情况选择2个监测离子对用于测定。
5.标记“*"的化合物使用本法定量测定时回收率低于60%，适用于该化合物定性测定或依【附注】（3）推荐的方法定量测定。
6.标记“#"的化合物为气相色谱-串联质谱法与液相色谱-串联质谱法均有定性定量方法的化合物。一般情况下优先选择在表2或表4中字体被加粗的化合物所对应的测定方法，测定存在干扰时可选用另一测定方法。
定性用混合对照品溶液的制备与供试品溶液的制备 均同本法“一、定性测定方法"中气相色谱-串联质谱法项下。
测定法 分别精密吸取供试品溶液和定性用混合对照品溶液各1~10µl（根据检测要求与仪器灵敏度可适当调整进样量），注入液相色谱-串联质谱仪，按保留时间与定性离子相对丰度比对523种农药残留量进行定性测定。
结果判断 供试品色谱中如检出与对照品保留时间相同的色谱峰，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的2对监测离子对均出现，供试品溶液的监测离子对峰面积比与浓度相当的对照品溶液的监测离子对峰面积比进行比较时，相对偏差不超过下列规定的范围，则可判定样品中存在该农药：相对比例＞50%，允许±20%偏差；相对比例20%~50%，允许±25%偏差；相对比例10%~20%，允许±30%偏差；相对比例＜10%，允许±50%偏差。
二、定量测定方法
本法系用气相色谱-串联质谱法与液相色谱-串联质谱法对中药中农药残留的定量测定方法。实验室应建立必要的质控手段，保证定量结果准确。
1.气相色谱-串联质谱法
色谱条件与质谱条件 均同本法“一、定性测定方法"中气相色谱-串联质谱法项下。
对照品贮备溶液的制备 精密称取表2与表4中农药对照品适量，根据各农药溶解性加乙腈或甲苯分别制成每1ml含1000µg的溶液，即得（可根据具体农药的灵敏度适当调整贮备液配制的浓度）。
内标贮备溶液的制备 取氘代莠去津、氘代二嗪农和氘代bei硫磷对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1ml各含1000µg的混合溶液，即得。
混合对照品溶液的制备 精密量取上述各对照品贮备液适量，用含0.05%醋酸的乙腈分别制成每1L含100µg和1000µg的两种溶液，即得。
内标溶液的制备 精密量取内标贮备溶液适量，加乙腈制成每1ml含6µg的溶液，即得。
基质混合对照品溶液的制备 取空白基质样品3g，一式6份，同供试品溶液的制备方法处理至“置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml"，分别加入混合对照品溶液（100µg/L）50µl、100µl，混合对照品溶液（1000µg/L）50µl、100µl、200µl、400µgl，加乙腈定容至1ml，涡旋混匀，用微孔滤膜滤过（0.22µm），取续滤液，即得浓度分别为5µg/L、10µg/L、50µg/L、100µg/L、200µg/L与400µg/L的系列基质混合对照品溶液。
供试品溶液的制备 药材或饮片 取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml与内标溶液100µl，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末（4：1）7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（4000r/min）5分钟，取上清液9ml，置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管［无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺（PSA）300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化炭黑90mg］中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化*，离心（4000r/min）5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml，加乙腈定容至1ml，涡旋混匀，用微孔滤膜（0.22µm）滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取供试品溶液和基质混合对照品溶液各1µl，注入气相色谱-串联质谱仪，按内标标准曲线法计算供试品中88种农药残留量。
2.液相色谱-串联质谱法
色谱条件、质谱条件 均同本法“一、定性测定方法"中液相色谱-串联质谱法项下。
对照品贮备溶液的制备、内标贮备溶液的制备、混合对照品溶液的制备、内标溶液的制备、基质混合对照品工作溶液的制备与供试品溶液的制备 均同本法“二、定量测定方法"中气相色谱-串联质谱法项下。
测定法 分别精密吸取供试品溶液和基质混合对照品溶液各1～10µl（根据检测要求与仪器灵敏度可适当调整进样量），注入液相色谱-串联质谱仪，按内标标准曲线法计算供试品中523种农药残留量。
【附注】（1）依据各品种项下规定的监测农药种类并参考相关农药xian量规定配制对照品溶液。
（2）本法使用基质匹配标准曲线法定量，空白基质样品为经检测不含待测农药残留的同品种样品。特殊情况下，可用标准加入法对检出的农药定量。
（3）加样回收率应在70%~120%之间。在满足重复性的情况下，部分农药回收率可放宽至60%~130%。特殊情况下，可用标准加入法对回收率超出规定范围的农药定量，或在重复性满足的情况下使用回收率校正定量结果。
（4）进行样品测定时，如果检出色谱峰的保留时间与对照品一致，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的2对监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致（相对比例＞50%，允许±20%偏差；相对比例＞20%~50%，允许±25%偏差；相对比例＞10%~20%，允许±30%偏差；相对比例≤10%，允许±50%偏差），则可判断样品中存在该农药。如果不能确证，选用其他监测离子对重新进样确证或选用其他检测方式的分析仪器来确证，如选用高分辨率质谱等确证手段。
（5）使用本法测定时，气相色谱-串联质谱法测定的农药，推荐选择氘代bei硫磷作为内标；液相色谱-串联质谱法测定的农药，推荐选择氘代莠去津作为内标。特殊情况下，也可选用本法推荐的其他内标。
（6）本法提供的监测离子对测定条件为推荐条件，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作适当调整；在样品基质有测定干扰的情况下，可选用其他监测离子对测定。
（7）对于特定农药或供试品，分散固相萃取净化管中净化材料的比例可作适当调整（如对含色素较少的药材或饮片，可降低分散固相萃取净化管中石墨化炭黑的用量；测定极性较大的农药时，可降低分散固相萃取净化管中硅胶的用量），但须做加样回收试验等必要的方法学考察以确保结果准确。
（8）依据各品种项下规定的农药xian量要求，在检测灵敏度满足的情况下，可对供试品溶液进行合理稀释。如省去本法氮吹浓缩步骤，取分散固相萃取净化管上清液直接测定。
（9）部分药材性质特殊，使用本法时，供试品取样量可适当调整，但一般不低于0.5g。
（10）在进行气相色谱-串联质谱法测定时，为进一步优化方法效能，供试品溶液最终定容的溶剂可由乙腈经溶剂替换为甲苯（经氮吹至近干，加入甲苯1ml溶解即可）；在进行液相色谱-串联质谱法测定时，为进一步优化方法效能或部分农药色谱峰峰形，供试品溶液最终定容的溶剂可由乙腈替换为与初始流动相匹配的含水溶液。
（11）对于中成药农药残留量测定而言，可参照本法依样品的具体情况与检测要求经方法验证后取样测定
