第五法 药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法
1.气相色谱-串联质谱法
色谱条件 用（50%苯基）-甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25µm）。进样口温度250℃，不分流进样。载气为高纯氦气（He）。进样口为恒压模式，柱前压力为146kPa。程序升温：初始温度60℃，保持1分钟，以30℃/min升至120℃，再以每分钟10℃的速率升温至160℃，再以每分钟2℃的速率升温至230℃，最后以每分钟15℃的速率升温至300℃，保持6分钟。
质谱条件 以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电子轰击源（EI），离子源温度250℃。碰撞气为氮气或氩气。质谱传输接口温度250℃。质谱监测模式为多反应监测（MRM），各化合物参考保留时间、监测离子对、碰撞电压（CE）见表6。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。
2.高效液相色谱-串联质谱法
色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长10cm，内径为2.1mm，粒径为2.6µm）；以0.1%甲酸溶液（含5mmol/L甲酸铵）为流动相A，以乙腈-0.1%甲酸溶液（含5mmol/L甲酸铵）（95：5）为流动相B，按下表5进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml，柱温为40℃。
质谱条件 以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电喷雾（ESI）离子源，正离子扫描模式。监测模式为多反应监测（MRM），各化合物参考保留时间、监测离子对、碰撞电压（CE）见表7。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。
3.对照溶液的制备
3.1混合对照品溶液的制备 精密量取禁用农药混合对照品溶液（已标示各相关农药品种的浓度）1ml，置20ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1ml含l.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1ml含0.1µg的溶液。
3.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
3.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0ml（6份），置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6ml，分别加入混合对照品溶液10µl、20µl、50µl、100µl、150µl、200µl，加乙腈稀释至1ml，涡旋混匀，即得。
4.供试品溶液的制备
4.1直接提取法
取供试品粉末（过三号筛）5g，精密称定，加氯化钠1g，立即摇散，再加入乙腈50ml，匀浆处理2分钟（转速不低于每分钟12000转），离心（每分钟4000转），分取上清液，沉淀再加乙腈50ml，匀浆处理1分钟，离心，合并两次提取的上清液，减压浓缩至约3~5ml，放冷，用乙腈稀释至10.0ml，摇匀，即得。
4.2快速样品处理法（QuEChERS）法
取供试品粉末（过三号筛）3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末（4：1）7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（每分钟4000转）5分钟，取上清液9ml，置预先装有净化材料的分散固相萃取净化管［无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化碳黑90mg］中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化*，离心（每分钟4000转）5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml，加乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。
4.3固相萃取法
固相萃取净化方式包括以下三种
方式一：量取直接提取法制备的供试品溶液3~5ml，置于装有分散型净化材料的净化管［无水硫酸镁1200mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶100mg］中，涡旋使充分混匀，再置震荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化*，离心，取上清液，即得。
方式二：量取直接提取法制备的供试品溶液3~5ml，通过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱（200mg，6ml）净化，收集全部净化液，混匀，即得。
方式三：量取直接提取法制备的供试品溶液2ml，加在装有石墨化碳黑氨基复合固相萃取小柱（500mg/500mg，6ml）［临用前用乙腈-甲苯混合溶液（3：1）10ml预洗］，用乙腈-甲苯混合溶液（3：1）20ml洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至近干，用乙腈转移并稀释至2.0ml，混匀，即得。
5.测定法
气相色谱-串联质谱法 分别精密吸取上述的基质混合对照溶液和供试品溶液各1ml，精密加入内标溶液0.3ml，混匀，滤过，取续滤液。分别精密吸取上述两种溶液各1µl，注入气相色谱串联质谱仪，按内标标准曲线法计算，即得。
高效液相色谱-串联质谱法 分别精密吸取上述的基质混合对照溶液和供试品溶液各1ml，精密加入水0.3ml，混匀，滤过，取续滤液。分别精密吸取上述两种溶液各1~5µl，注入液相色谱-串联质谱仪，按外标标准曲线法计算，即得。
【附注】
（1）根据待测样品基质特点和方法确认结果，选择一种最适宜的供试品溶液制备方法。
（2）本法使用基质匹配标准曲线法定量，空白基质样品为经检测不含待测农药残留的同品种样品。
（3）本法提供的监测离子对测定条件为推荐条件，各实验室可根据样品基质干扰情况和所配置仪器的具体情况对作适当调整，并确定定量离子对。每个监测指标选择不少于2个监测离子对。
（4）进行样品测定时，如果检出色谱峰的保留时间与对照品一致，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的2个监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致(相对比例＞50%，允许±20%偏差：相对比例＞20%~50%，允许±25%偏差：相对比例＞10%~20%，允许±30%偏差；相对比例≤10%，允许±50%偏差)，则可判断样品中存在该农药。如果不能确证，选用其他监测离子对重新进样确证或选用其他检测方式的分析仪器来确证，如选用高分辨率质谱等确证手段。
（5）加样回收率应在70%~120%之间。在满足重复性要求的情况下，部分农药回收率可放宽至60%~130%。
