GB 23200.110-2018 植物源性食品中氯吡脲残留量的测定

GB 23200.110-2018 食品安全国家标准

植物源性食品中氯吡脲残留量的测定

液相色谱-质谱联用法

1范围

本标准规定了植物源性食品中氯吡脲残留量液相色谱质谱/联用（HPLC-MS/MS）的测定方法。

本标准适用于植物源性食品中氯吡脲残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改dan）适用于本文件。

GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样中的氯吡脲用乙腈提取，分散固相萃取净化，液相色谱质谱联用法测定，外标法定量。

4试剂与材料

除非另有说明在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1甲酸（HCOOH，CAS号：64- 18- 6）：色谱纯。

4.1.2乙腈（CH₃CN，CAS 号：75 - 05 - 8）：色谱纯。

4.1.3无水硫酸镁（Mg₂SO₄，CAS号：7487 - 88-9）。

4.1.4氯化钠（NaCl，CAS 号：12125- 02 - 9）。

4.2溶液配制

甲酸溶液（1+ 499 ，体积比）：准确吸取1 mL甲酸加入499 mL水，混匀，然后将其置于超声波中超声15 min，备用。

4.3 标准品

氯吡脲标准品（C₁₂H₁₀CIN₃O，CAS号：68157- 60 - 8）：纯度≥99.0%。

4.4标准溶液配制

4.4.1氯吡脲标准储备溶液（100 mg/ L） ：准确称取10 mg（精确到0. 1 mg）氯吡豚标准品于50 mL烧杯中，用乙腈溶解并转移至100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，-18℃冷冻避光保存，有效期6个月。

4.4.2氯吡脲标准工作溶液（ 10 mg/ L） ：准确吸取1 mL标准储备溶液，加到10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀。4℃下保存，有效期1个月。

4.5材料

4.5.1  N -丙基乙二胺（PSA），40μm ~60μm。

4.5.2  石墨化炭黑（GCB），38μm~120μm。

4.5.3  十八烷基键合硅胶（C₁₈），50μm。

4.5.4 滤膜：0. 22μm，有机系。.

5仪器和设备

5.1液相色谱质谱联用仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2 分析天平，感量0.01g和0.0001g.

5.3离心机，转速不低于8000 r/ min.

5.4涡旋振荡 器。

6试样的制备

蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，取样部位按GB 2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品.可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。

取谷类样品500 g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各500 g，粉碎后充分混匀，放人聚乙烯瓶或袋中。

植物油类搅拌均匀。

试样于-18℃及以下温度条件下保存。

7分析步骤

7.1提取

7.1.1蔬菜、水果、食用菌、植物油

称取10 g（精确到0.01 g）试样于50 mL的离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋振荡提取3 min；蔬菜、水果、食用菌向离心管中加入4 g无水硫酸镁和1 g氯化钠，植物油向离心管中加入5g氯化钠，涡旋1 min；然后4 000 r/ min离心5 min，取1. 5 mL上清液待净化。

7.1.2 谷物、油料、坚果

称取5 g（精确到0.01 g）试样于50 mL的离心管中，加入10mL水，涡旋30s使试样完quan润湿；然后加入10mL乙腈，涡旋振荡提取3 min；向离心管中加入5g氯化钠，涡旋1 min；4 000 r/ min离心5 min，取1.5 mL上清液待净化。

7.1.3茶叶、香辛料

称取2 R（精确到0.01 g）试样于50 mL的离心管中，加入10 ml水、涡旋30s使试样完quan润湿；然后加入10 mL乙睛，涡旋振荡提取3 min；向离心管中加入5 g氧化钠，涡旋1 min；4 000 r/ min离心5 min，取1.5 mL上清液待净化。

7.2 净化

7.2. 1蔬菜、水果、食用菌、植物油

将1.5mL蔬菜（色素含量高的蔬菜如韭菜除外）或水果样品上清液放入装有50mgPSA和150mg无水硫酸镁的2 mL离心管中；将1.5 mL色索含量高的蔬菜样品上清液放入装有40 mg PSA、15 mg GCB和150 mg无水硫酸镁的2 mL离心管中；将1.5 mL食用菌或植物油样品上清液放入装有50 mg C₁₈和150mg无水硫酸镁的2mL离心管中；涡旋30s，5000r/min离心5min，取上清液过有机系滤膜，供HPLC- MS/ MS检测。

7.2.2谷物、油料、坚果

将1.5mL上清液放入装有50mg C₁₈和150mg无水硫酸镁的2mL离心管中；涡旋30s，5000r/ min离心5 min，取上清液过有机系滤膜，供HPLC- MS/ MS检测。

7.2 3茶叶、香辛料

将1.5mL上清液放入装有50 mg PSA、20 mg GCB和150 mg无水硫酸镁的2 mL离心管中；涡旋30s，5000r/min离心5min.取上清液过有机系滤膜，供HPLC-MS/MS检测。

7.3 仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a） 色谱柱：C18柱 100 mmX2.1 mm（内径），1.7 μm或相应类型色谱柱；

b） 柱温：45℃ ；

c） 流动相：A 为乙腈，B为0. 2%甲酸溶液；

d） 进样量：5 μL；

c） 流速：0. 3 mL/ min；

f） 流动相及梯度洗脱条件：见表 1。

表1流动相及梯度洗脱条件（V_A+V_B）

7.3.2质谱参考 条件

a） 离子源类型：ESI；

b） 毛细管电压：3 kV；

c） 锥孔气；氮气，50L/h；

d） 离子源温度：120C；

e） 干燥气：氮气，流速600 L/h，温度350 ℃；

f） 碰撞气：氩气 ，0.16 mL/ min；

g） 扫描方式： 正离子扫描；

h） 检测方式： 多反应监测（MRM） ，监测条件见表2。

表2多反应监测（MRM）的条件

7.4标准工作曲线

准确吸取适量氯吡脲标准工作溶液（4.4.2），用空白基质提取液稀释，配制成质量浓度为0.002mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L系列基质标准溶液，供液相色谱-质谱联用仪测定。以测得峰面积为纵坐标、对应的标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，求出回归方程和相关系数。

7.5 定性及定量

7.5.1保留时间

被测试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准溶液该组分色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。

7.5.2定量离子、定性离子及子离子丰度比

在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定量和定性离子应出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范田，则可判断样品中存在氧吡脉。

表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

单位为百分率

7.6 测定

将基质标准溶液和待测溶液分别注入液相色谱-质谱联用仪中，从保留时间和定性离子定性，样品中氯吡脲质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线最高点的则应稀释后再进行分析。采用外标法定量

7.7空白试验

除不加试样外，按照7.1~7.6的规定进行平行操作。

8结果计算

试样中氯吡脲残留显用质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算。

式中：

ω——试样中氯吡脲残留量，单位为毫克每千克（mg/ kg）；

A——样品溶液中氯吡脲峰面积；

ρ——标准溶液氯吡脲质量浓度，单位为毫克每升（g/L）；

V——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

A_S——农药标准溶液中氯吡脲峰面积；

m——试样的质量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字。当结果大于1 mg/kg时，保留3位有效数字。

9精密度

9.1在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差值不超过重复性限（r） ，重复性限（r）的数据为：

a） 含量为0. 01 mg/kg时，重复性限（）为0. 0030，

b） 含量为0. 05 mg/ kg时，重复性限（r）为0.012；

c） 含量为0. 5 mg/ kg时，重复性限（r）为0.11。

10其他

本方法定量限为0.01 mg/ kg。

11图谱

0.01 mg/ L氯吡脲标准溶液总离子流色谱图见图1。