GB 23200.121-2021 食品安全国家标准
植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定
液相色谱—质谱联用法
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件系国内shou次发布。
1范围
本文件规定了植物源性食品中331种农药及其代谢物（见附录A）残留量的液相色谱质谱联用测定方法。
本文件适用于植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ke少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB2763- 2021 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样用乙睛提取，提取液经分散固相萃取净化，液相色谱质谱联用仪检测，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明。在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）
4.1.2 乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯
4.1.3 甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯
4.1.4 氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。
4.1.5 乙酸钠（CH3COONa，CAS号：127-09-3）。
4.1.6 乙酸（CH3C0OH，CAS号：64-19-7）。
4.1.7 无水硫酸镁（MgSO4，CAS号：7487-88-9）。
4.1.8柠檬酸钠二水合物（C6H5 Na3O7•2H20，CAS号：6132-04-3）。
4.1.9柠檬酸二钠盐倍半水合物（C6H5Na2O7•1.5H2O，CAS号：6132-05-4）。
4.1.10甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。
4.1.11甲酸铵（HCO0NH4，CAS号：540-69-2）。
4.2 溶液配制
4.2.1乙腈-乙酸溶液（99+1， 体积比） ；量取10 mL，乙酸加入990 mL乙腈中，混匀。
4.2.2甲酸铵-甲酸水溶液（2 mmol/L）：称取0.126 1 g甲酸铵，用0.01%甲酸水溶液溶解并稀释至1 000 mL，摇匀。
4.2.3甲酸铵甲酸甲醇溶液（2 mmol/L）：称取0.126 1 g甲酸铵，用0.01%甲酸甲醉溶液溶解并稀释至1 000 mL，摇匀。
4.3标准品
331种农药及其代谢物标准品，见附录B，纯度≥95%。
4.4标准溶液配制
4.4. 1标准储备溶液（1 000 mg/L） ：准确称取约10 mg（精确至0.1 mg）各农药标准品，根据标准品的溶解性和测定的需要选甲醇或乙腈（4.1. 2）等溶剂溶解并分别定容至10 mL，避光-18℃及以下条件保存，有效期1年。
4.4.2混合标准储备溶液（20mg/L~50mg/L）：吸取一定量的农药标准储备溶液于容量瓶中用乙腈（4. 1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。
4.4.3混合标准溶液（5 mg/L） ：吸取一定量的混合标准储备溶液（4.2.2）于容量瓶中，用乙腈（4.1. 2）定容至刻度，避光-18℃及以下条件保存，有效期1个月。
4.5材料
4.5.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径40μm~60μm。
4.5.2十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径40μm~60μm。
4.5.3石墨化炭黑（GCB） ：粒径40μm~ 120μm。
4.5.4陶瓷均质子：2 cm（长）X1 cm（外径），或相当者。
4.5.5微孔滤膜（有机相）：13 mmX0. 22μm，或相当者。
5仪器
5.1液相色谱三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.2分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
5.3离心机：转速不低 于5000 r/min。
5.4组织捣碎机。
5.5涡旋混合器。
6试样制备
6.1 试样制备
样品测定部位按照GB 2763- 2021 中附录A的规定执行。
食用菌、热带和亚热带水果（皮可食）随机取样1 kg，水生蔬菜、茎菜类蔬菜、豆类蔬菜、核果类水果、热带和亚热带水果（皮不可食）随机取样2kg，瓜类蔬菜和水果取4个~6个个体（取样量不少于1kg），其他蔬菜和水果随机取样3 kg。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取一部分或全部用组织捣碎机勾浆后，放入聚乙烯瓶中。
干制蔬菜、水果和食用菌随机取样500g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。
谷类随机取样500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。
油料、茶叶、坚果和香辛料（调味料）随机取样500g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。
6.2试样储存
将试样按照测试和备用分别存放。于-18℃及以下条件保存。
7分析步骤
7.1 蔬菜、水果、食用菌和糖料
称取10g（精确至0.01g）试样于50mL塑料离心管中，加入10mL乙腈及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1 min，加入4g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠二水合物、0.5 g柠檬酸二钠盐倍半水合物，剧烈振荡1min后4200r/min离心5min。定量吸取上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用150 mg无水硫酸镁、25 mg PSA）；对于颜色较深的试样，离心管中另加入GCB（每毫升提取液使用2.5 mg），涡旋混匀1 min。4 200 r/ min离心5 min，吸取上清液过微孔滤膜（4.5. 5），待测定。
注：对于干制蔬菜、水果和食用菌，称取1g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加9mL水涡旋混匀，静置30min后按上述方式处理。
7.2 谷物、油料和坚果
称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入15 mL乙腈乙酸溶液（4.2. 1）及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1 min，加入6 g无水硫酸镁、1.5 g乙酸钠，剧烈振荡1 min后4 200 rt/min离心5 min。定量吸取上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用150mg无水硫酸镁、50mgC18和50mgPSA），涡旋混匀1min。4200r/min离心5 min，吸取上清液过微孔滤膜（4.5.5），待测定。
7.3茶叶和香 辛料（调味料）
称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混勾，静置30 min。加入15 mL乙腈乙酸溶液（4.2.1）及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1min，加入6g无水硫酸镁、1.5 g乙酸钠，剧烈振荡1 min后4200r/min离心5min。定量吸取上清液至内含保水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用150 mg无水硫酸镁、50mgC18、50mg PSA和25 mgGCB），涡旋混匀1 min。4 200 r/min离心5 min，吸取上清液过微孔滤膜4.5.5），待测定。
7.4 植物油
称取2 g试样（精确至0.01 g）于50mL塑料离心管中，加入5 mL水。加入10mL乙腈及1颗陶瓷均质子，剧烈振端1 min，加入4g无水硫酸镁、1g氧化钠、1 g柠檬酸钠二水合物、0.5 g柠檬酸二钠盐倍半水合物，剧烈振荡1 min后4200r/min离心5 min，定量吸取上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用150/mg 无水硫酸镁、50mgC18和50 mg PSA），涡旋混匀1 min。4 200 r/min离心5 min，吸取上清液过微孔滤膜（4.5.5），待测定。
注：测定疏菜、水果、食田菌、糖料、植物油中磺酰脲类除草剂，环己烯酮类除草剂（烯草酮、烯草酮砜、烯草酮亚砜、噻草酮、三甲苯草酮、烯禾啶）、三唑并嘧啶磺酰胺类除草剂 （双氟磺草胺、咗嘧磺草胺、五氟磺草胶）、氟啶胺、螺虫乙酯及其代谢物、甲磺草胺、苯嘧磺草胺、苯噻隆、氰霜唑代谢物CCIM和异噁唑草酮-二酮腈时，PSA的用量降低至每亳升提取液5 mg，谷物、油料、坚果降低至每毫升提取液10mg。
7.5 测定
7.5.1液相色谱参考条件
a）色谱柱： C18 2.1mm（内径）×100 mm，粒径1.8 μm，或相当者；
b）流动相：A相为甲酸铵-甲酸水溶液（4.4.2），B相为甲酸铵-甲酸甲酰浴液（4.4.3）。流动相梯度条件见表1；
c） 流速：0.3 mL/min；
d） 柱温：40℃；
e） 进样量：2μL。
表1流动相及其梯度条件（VA+VB）
7.5.2质谱参考条件
a） 离子源类型： 电喷雾离子源；
b） 扫描方式：正离子和负离子同时扫描；
c） 电喷雾电压：正离子5500 V，负离子-4 500 V；
d） 离子源温度：350℃；
e） 雾化气：0.345 MPa；
f） 辅助加热气：0. 345 MPa；
g） 多反应监测：每种农药分别选择至少2个子离子。所有需要检测的子离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，参见附录C。
7.5.3基质匹配标准工作曲线
选择与被测样品性质相同或相似的空白样品按照7.1~7.4部分进行前处理，得到空白基质溶液。精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.002mg/L、0.005mg/L、0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0. 2 mg/L和0.5 mg/L的基质匹配标准工作溶液，根据仪器性能和检测需要选择不少于5个浓度点，供液相色谱质谱联用仪测定。以农药定量用子离子的质量色谱图峰面积为纵坐标，相对应的基质匹配标准工作溶液质量浓度为横坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。
7.5.4 定性及定量
7.5.4.1 保留时间
被测试样中日标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。
7.5.4.2 离子丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物选择的子离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在目标农药。
表2定性时离子丰度比的最大允许偏差
7.5.4.3 定量
外标法定量。
7.6 试样溶液的测定
将基质匹配标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱质谱联用仪中，保留时间和离子丰度比定性，测得定量用子离子的质量色谱图峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。
7.7平行试验
按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。
7.8 空白试验
除不加试样外，采用完quan相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算
试样中各农药残留量以质量分数w计，单位为毫克每千克（mg/kg） ，按公式（1）或公式（2）计算。
式中：
w——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg） ；
ρ1——基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（ mg/L）；
ρ2——从基质匹配标准r作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
A——试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；
As——基质匹配标准 工作溶液中被测物的质量色谐图峰面积；
V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；
m——试样质量的数值，单位为克（g）；
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字，含量超1 m/kg时保留3位有效数字。
9精密度
在重复性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r），参见附录E。
在再现性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限（R），参见附录E。
10其他
本文件方法对各种化合物的定量限为0.002 mg/kg~0.2 mg/kg （见附录A）。
