GB 31656.8-2021 水产品中有机磷类药物残留量的测定

GB 31656.8-2021 食品安全国家标准

水产品中有机磷类药物残留量的测定

液相色谱－串联质谱法

前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件系首ci发布。

1范围

本文件规定了水产品中辛硫磷、巴胺磷、倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷、蝇毒磷残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本文件适用于鱼海参、蟹和虾等水产品可食部分中辛硫磷、巴胺磷倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷和蝇毒磷残留量的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ke少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件：不注日期的引用文件，共最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和的方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术话和定义。

4原理

试样中有机磷类药物的残的经酸化乙腈提取，经PSA吸附剂净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

5试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

5.1 试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2 乙酸（CH3CO0H）：优级纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4 无水乙酸钠（CH3COONa）：优级纯。

5.2溶液配制

5.2.1  定容液：取乙腈150 mL，加水350mL甲酸0.5 mL，混匀。

5.2.2  1%乙酸乙腈：取乙腈990 mL，加乙酸10 mL，混匀。

5.3 标准品

5.3.1辛硫磷、巴胺磷、倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷和蝇毒磷：含量均≥98. 0% ，具体见附录A。

5.3.2倍硫磷-D6、马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6、甲基吡啶磷-D6和蝇毒磷-D10：浓度均为100 mg/L，具体见附录A。

5. 4标准溶液的制备

5.4.1标准储备液：在避光条件下，取有机磷类药物标准各适量（相当于各待测组分10 mg），精密称定，分别于10 mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1.1）适量使溶解并稀释至刻度。分别配成浓度为1 mg/mL的标准储备溶液。-18 ℃以下保存，有效期6个月。

5.4.2混合标准中间液：分别量取标准储备液（5.4.1）适量，用乙腈（5.1.1）稀释，配成浓度分别为：巴胺磷10 mg/L、马拉硫磷10 mg/L、二嗪农10 mg/L、敌百虫10 mg/L、敌敌畏10 mg/L、甲基吡啶磷10 mg/L；辛硫磷20 mg/L、倍硫磷20 mg/L和蝇毒磷20 mg/L的混合标准中间液。0℃~4℃避光保存，有效期1个月。

5.4.3混合标准工作液：准确量取混合标准中间液（5.4.2）适量，用乙腊（5.1.1）稀释，配成浓度分别为：巴胺磷1 mg/L、马拉硫磷1 mg/L、二嗪农1 mg/L、敌百虫1 mg/L、敌敌畏1 mg/L、甲基吡啶磷1 mg/L；辛硫磷2 mg/L、倍硫磷2 mg/L和蝇赤磷2 mg/L的混合标准工作液。0℃~4℃避光保存，有效期1周。

5.4.4混合内标中间液：准确吸取内标标准物质溶液（5.3.2），用乙腈（5.1.1）稀释配制成马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6和甲基吡啶磷-D6均为5 mg/L， 倍硫磷-D6和蝇毒磷-D10均为10 mg/L的混合内标中间液， 0℃~4℃避光保存，有效期1个月。

5.4.5混合内标工作液：准确吸取内标中间液（5.4. 4），用乙腈（5.1.1）稀释配成马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6和甲基吡啶磷-D6 0. 5 mg/L， 倍硫磷-D6和蝇毒磷-D10 1 mg/L的混合内标工作液， 0℃~4℃避光保存，有效期2周~3周。

5.5材料

5.5.1  PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：颗粒直径为40μm~60μm。

5.5.2  PVDF（聚偏氟乙烯）滤膜：孔径为0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源。

6.2 电子天平：感量0.00001 g和0.01 g。

6.3均质机。

6.4离心机：转速不低于 8 000 r/min。

6.5超声波清洗器。

6.6 涡旋混合器。

6.7氮吹仪。

7试料的制备与保存

7.1试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

a） 取均质后的供试样品，作为供试试料；

b） 取均质后的空白样品，作为空白试料；

c） 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

7.2试料的保存

-18℃以下保存。

8测定步骤

8.1提取

取试样5 g（准确至±0.02 g） ，加混合内标工作液100μL（5.4.5）、1%乙酸乙腈（5.2. 2）25.0 mL、无水乙酸钠1 g（5.1.4），涡旋混合2 min，超声30 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液，备用。

8.2净化

备用液加PSA吸附剂500 mg，涡旋振荡1 min，8 000 r/ min离心10 min；取上清液5.0 mL，45℃下氮气吹干，准确量取定容液1. 0 mL（5.2.1）溶解残渣，加PSA吸附剂200 mg，涡旋1 min，5 000 r/min离心10 min，取上清液过膜后，供液相色谱串联质谱测定。实验过程需要注意避免阳光直射，样品前处理完成后应及时上机检测。

8.3标准曲线的制备

准确量取适量混合标准工作液（5.4.3）及混合内标工作液20μL（5.4.5），用定容液（5.2.1）稀释成巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏和甲基吡啶磷浓度分别为10μg/L、20 μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷浓度分别为20μg/L、40μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、1000μg/L系列标准溶液，供液相色谱串联质谱测定。以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

8.4 测定

8.4.1色谱参考条件

a） 色谱柱：ACQUITY^TM UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1. 7μm）；或相当者；

b） 柱温：40℃；

c） 进样量：10μL；

d） 流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

8.4.2 质谱参考条件

a） 离子化模式：大气压电喷雾离于源（ESF），正离子模式；

b） 电离电压：2.50KV；

c） 锥孔电压：30V；

d） 离子源温度：140℃；

e） 脱溶剂气温度400℃；

f） 脱溶剂气流速：900 L/h；

g） 锥孔反吹气流速：50 L/h；

h） 氩气流速：0.12 mL/min；其他参数见表2

表2待测物的监测离子

8.4.3 测定法

a）定性测定

在同样测试条件下，阳性样品的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间偏差在±2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对离子丰度一致。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3的要求。

表3定性确证时相对离子丰度的允许偏差

b）定量测定

取试样溶液和相应的标准溶液等体积进样测定，按内标法以标准曲线对样品进行定量。其中辛硫磷、倍硫磷以倍硫磷-D6为内标；巴胺磷、马拉硫磷以马拉硫磷-D10为内标；二嗪农以二嗪农-D10为内标；敌百虫、敌敌畏以敌敌畏-D6为内标；甲基吡啶磷以甲基吡啶磷-D6为内标；蝇毒磷以蝇毒磷-D10为内标。标准溶液、空白样品及加标样品的总离子流图参见附录A。

8.5空白试验

除不加试料外，均按上述测定步骤进行。

9结果计算和表述

试样中有机磷类药物残留量按公式（1）计算。

式中：

C_is——试样溶液中内标浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

C_s——标准溶液中待测药物浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

C'_is——标准溶液中内标浓度的数值，单位为微克每升（ug/L）；

A_i——试样 溶液中待测药物的峰面积；

A_is——试样溶液中内标的峰面积；

A_s——标准溶液中待测药物的峰面积；

A'_is——标准溶液中内标的峰面积；

V₁——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；

V₂——净化的上清液体积的数值， 单位为毫升（mL）；

V₃——溶解残渣体积的数值，单位为毫升（mL）。

10方法的检测限、定量限、准确度和精密度

10. 1检测限和定量限

本方法的检测限：巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷均为5μg/kg，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷均为10μg/kg。定量限：巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷均为10μg/kg，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷均为20μg/kg。

10.2准确度

巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷在10μg/kg~500μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%~110%；辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷在20μg/kg~1000μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%~110%。

10.3精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。