SN_T 3147-2017 出口食品中邻苯二甲酸酯的测定方法
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN/T 3147- -2012《出口食品中邻苯二甲酸酯的测定》。
本标准与SN/T 3147- -2012相比主要技术变化如下：
——检测范围的适用基质扩大到酒类、液体饮料、固体饮料、果酱、果冻、调味品、香精香料、油脂类食品、乳制品、面淀粉制品、橄榄油及糕点；
——检测范围增加邻苯二甲酸二异辛酯；
——增加了酒类样品前处理方法；
——修订了部分样品的前处理方法；
——给出了酒类基质中24种邻苯二甲酸酯和其他基体中邻苯二甲酸二异辛酯的定量限和回收率。
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本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、湖南省检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、福建省产品质量检验研究院、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：吴敏、郑向华、林立毅、陈鹭平、方恩华、王丹红、陈燕、黄志强、岳振峰、邓晓军、黄永辉。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——SN/T 3147- -2012。
1 范围
本标准规定了食品中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丙酯、邻苯二甲酸二烯丙酯、邻苯二甲酸二丙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯、邻苯二甲酸二异戊酯、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯、邻苯二甲酸二戊酯、邻苯二甲酸二已酯、邻苯二甲酸丁基苄基酯、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二（2-乙基）已酯、邻苯二甲酸二庚酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二异壬酯、邻苯二甲酸二异癸酯、邻苯二甲酸二壬酯、邻苯二甲酸二异辛酯的气相色谱-质谱检测方法和液相色谱质谱/质谱检测方法。
本标准适用于酒类、液体饮料、固体饮料、果酱、果冻、调味品、香精香料、乳制品、面淀粉制品、橄榄油及糕点中邻苯二甲酸二甲酯等24种邻苯二甲酸酯类化合物的测定和确证。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
第一法气相色谱-质谱法
3方法提要
食品中邻苯二甲酸酯类化合物经正已烷或乙腈提取、液液萃取或固相萃取净化后，经气相色谱-质谱联用仪进行测定。采用特征选择离子监测扫描模式（SIM），外标法定量。
4试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水（储存于玻璃瓶中，避免接触塑料）
4.1 正己烷：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3甲醇：色谱纯。
4.4丙酮：色谱纯。
4.5 氯化钠。
4.6硫酸镁：色谱纯。
4.7醋酸钠：色谱纯。
4.8 5%甲醇溶液：量取5 mL甲醇，用水定容100 mL混匀，备用。
4.9 标准品：详细信息见附录A中的表A.1。
4.10标准储备液：分别称取适量上述各种标准品（精确至0.1 mg），用正已烷配制成1 000 mg/L的储备液，于0℃~4℃冰箱中避光保存。
4.11标准使用液：将标准储备液用正已烷稀释至浓度为0.1 mg/L，0.5 mg/L，1.0 mg/L，2.0 mg/L，
5.0mg/L，10.0mg/L的标准系列溶液待用。
4.12亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮共聚物填料固相萃取玻璃柱或相当亲脂亲水共聚物填料固相萃取玻璃柱：Oasis HLB Glass柱（200 mg，5 mL），使用前，加入5 mL甲醇和5 mL纯水进行活化。
非商业性声明：4.12中所列出的试验用共聚物填料固相萃取玻璃柱仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的共聚物填料固相萃取玻璃柱。
4.13 N-丙基乙二胺固相分散吸附剂（PSA）：粒径为40μm或120μm，孔径为6 nm（60 A）。
4.14 C18 固相分散吸附剂：粒径为40μm或120μm，孔径为60 A。
5仪器和设备
5.1气相色谱-质谱联用仪（GC-MS），配电子轰击离子源（EI）。
5.2分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
5.3 冷冻离心机：不低于4 000 r/min。
5.4氮吹仪。
5.5振荡器。
5.6涡旋混合器。
5.7超声提取器。
5.8组织捣碎机。
6试样制备、保存
6.1试样制备
6.1.1固体、半固体、液体样品
至少取同一批次3个最小完整包装样品（混合后的固体样品总量100g~500g，液体样品100mL~500mL），置于硬质全玻璃器皿中，固体或半固体样品粉碎混匀，液体样品混合均匀，待称样处理。
6.1.2胶囊、锭状或粉状样品
取有代表性样品500 g（胶囊取内含物），采用粉碎机粉碎后，再将其研磨成细粉状，装入洁净的玻璃盛样容器内，密封并标明标记。
6.2试样保存
粉状和液体试样于0 ℃~4 ℃保存；其他试样于-18 ℃以下冷冻保存。
在制样的操作过程中，避免接触塑料，应防止样品受到污染或发生被测物含量的变化。
7测定步骤
7.1 试样处理
7.1.1液体试样
7.1.1.1 葡萄酒、18%白酒、洋酒、58%白酒
准确称取混合均匀的液体试样1g（精确到0.01g）于25mL烧杯中，根据样品乙醇浓度加入水稀释，使乙醇浓度小于5%，混匀，将稀释液加入事先活化好的Oasis HLB Glass柱（4.12），流速控制在1 mL/min内，之后用5mL 5%甲醇溶液（4.8）淋洗，待淋洗液流干后，用5mL乙酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液于40℃氮吹至近干后挥干，用正已烷定容至1.00 mL，供GC-MS分析。
7.1.1.2 果汁、香精
准确称取混合均匀的液体试样5g （精确到0.01 g）（含有二氧化碳气体的先超声20 min除去二氧化碳）于25mL具塞磨口玻璃试管中，加入氯化钠至水相饱和，加入5.0mL正已烷，涡旋1min，4000r/min离心2 min，收集上清液，供GC-MS分析。
7.1.1.3固化乳酸菌饮料 、牛奶
准确称取混合均匀的液体试样5g （精确到0.01 g）（含有二氧化碳气体的先超声20 min除去二氧化碳）于25 mL具塞磨口玻璃试管中，加10 mL乙腈，涡旋1 min，4 000 r/min离心2 min，取上清液到一洁净的25mL玻璃离心管中，加入氯化钠至水相饱和，涡旋1 min.静置或离心分层，取上层（乙腈层）到另一洁净玻璃管中，吹氮浓缩至近干后挥干，用正已烷定容至5.00mL，供GC-MS分析。
7.1.2 葡萄果冻、柚子酱、调味精粉
准确称取混合均匀固体或半固体试样5g（精确到0.01g）于50mL具塞磨口玻璃试管中，加水10 mL（视试样水分含量，可适当增加加水量），加入氯化钠至水相饱和加入10.0 mL乙腈，涡旋1 min，超声提取20 min，4 000 r/min离心2 min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。将提取液于40℃氮吹至近干后挥干，用正已烷定容至5.00mL，供GCMS分析。
7.1.3鸡蛋面、水果酥
准确称取混合均匀试样1 g （精确到0.01 g）于25 mL具塞磨口玻璃试管中，加入5 mL乙腈，涡旋1 min，4 000 r/min离心2 min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。将提取液于40 ℃氮吹至近干，用甲醇定容至1 mL，放入-18 ℃的冰箱冷藏2 h，4000 r/min0C~4 C冷冻离心2 min，取上清液，供GC-MS分析。
7.1.4橄榄油
准确称取混合均匀试样5g （精确到0.01 g）于50 ml具塞磨口玻璃试管中，准确加入15 mL乙腈，加入6g MgSO4和1.5 g醋酸钠，涡旋1 min 4 000 r/min离心2 min，收集上清液，于40℃氮吹至近干。用乙腈定容至5 mL，加入50 mg PSA粉（4.13），50 mg C18粉（4.14），150 mg MgSO4涡旋1min，4000r/min离心2min，取上清液，供GC-MS分析。
7.2 测定
7.2.1气相色谱条件
气相色谱条件如下：
a） 色谱柱：TG/DB-5MS石英毛细管柱，60 m（柱长）×0.25 mm（内径），0.25μm（膜厚），或相当者；
b） 其他色谱条件参见附录B中的B.1。
7.2.2质谱条件
质谱条件参见B.2。
7.2.3气相色谱- 质谱法测定
根据样液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液、样液及空白试验溶液等体积参插进样测定，标准工作溶液和待测样液中每种邻苯二甲酸酯的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述气相色谱质谱条件下，24种邻苯二甲酸酯化合物的参考保留时间参见表B.3，标准品总离子流色谱图和全扫描质谱图参见附录参见图C.1和图C.2。
试样待测液和标准品的选择离子在相同保留时间处（±0.5%）出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度比与标准品相比应符合表1，可定性确证目标分析物。各邻苯二甲酸酯类化合物的保留时间、定性离子和定量离子见表B.3。各邻苯二甲酸酯类化合物标准物质的气相色谱质谱选择离子色谱图见附录C。
7.3空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
8结果计算和表述
8.1 用色谱数据处理机或按式（1）分别计算试样中被测化合物的含量：
式中：
Xi——试样中每种被测化合物含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
Ai——样液中每种被测化合物的峰面积；
ci——标准工作液中每种化合物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
Vi——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
Ais——标准工作液中每种化合物的峰面积；
mi——最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。
8.2 计算结果应扣除空白值，结果保留三位有效数字。
9方法定量限、回收率
9.1 定量限
本方法的定量限（LOQ）DINP、DIDP、DINOP为0.5 mg/kg，其他化合物为0.1 mg/kg。
9.2 回收率
分别在葡萄酒、洋酒、18%白酒、58%白酒、番石榴汁、固体乳酸菌饮料、调味精粉、葡萄果冻、柠檬香精、水果酥、柚子酱、鸡蛋面、食用橄榄油、木瓜牛奶中添加24种邻苯二甲酸酯，添加浓度及其回收率数据参见附录D中的表D.1和表D.2。
10质量控制
10.1 取样制样
取样制样均应采用不锈钢或玻璃器具，避免接触塑料。
10.2有机溶剂
本标准中使用到的所有有机溶剂，在使用前，应进行空白实验。如本底值高于定量限，应对有机溶剂进行重蒸，直至本底值低于定量限。
10.3玻璃器皿
所用玻璃器皿洗净后，用去离子水淋洗三次，于丙酮浸泡1 h，在200 ℃下烘干2 h，冷却至室温备用。
第二法 液相色谱-质谱/质谱法
11方法提要
食品中邻苯二甲酸酯类化合物经正己烷或乙腈提取、液液萃取或固相萃取净化后，经采用高效液相色谱-质谱联用法测定。采用特征选择离子监测扫描模式（MRM），外标法定量。
12试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水（储存于玻璃瓶中，避免接触塑料）。
12.1甲醇：色谱纯。
12.2 乙腈：色谱纯。
12.3正己烷：色谱纯。
12.4丙酮：色谱纯。
12.5氯化钠。
12.6硫酸镁：色谱纯。
12.7醋酸钠：色谱纯。
12.8甲酸。
12.9 0.1%甲酸水溶液：量取0.5 mL甲酸，用水定容500 mL，混匀，备用。
12.10 5%甲醇溶液：同4.8。
12.11邻苯二甲酸酯标准品：同4.9。
12.12标准储备溶液：分别准确称取适量的24种PAEs标准品于100mL容量瓶中，用甲醇配制成质量浓度为100ug/mL的标准储备液。
12.13标准工作溶液：根据需要再用甲醇逐级稀释成适用浓度的系列混合标准工作溶液。线性范围：DAP 0.01 mg/L~0.2 mg/L，其余23种邻苯二甲酸酯0.1 mg/L~2 mg/L。
12.14亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮共聚物填料固相萃取玻璃柱或相当亲脂亲水共聚物填料固相萃取玻璃柱：同4.12。
12.15 N-丙基乙二胺固相分散吸附剂（PSA）：同4.13。
12.16 C18固相分散吸附剂：同4.14。
13仪器和设备
13.1液相色谱串联质谱，配电喷雾离子源（ESI）。
13.2 分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
13.3 冷冻离心机：不低于4 000r/ min。
13.4 超声提取器。
13.5振荡器。
13.6 氮吹仪。
13.7涡旋混合器。
13.8组织捣碎机。
14 试样制备与保存
14.1 试样制备
同6.1。
14.2试样保存
同6.2。
15测定步骤
15.1 试样处理
15.1.1 液体试样
15.1.1.1 葡萄酒、18%白酒、洋酒、58%白酒
同7.1.1.1，仅吹氮浓缩至近干，用甲醇定容至1 mL，供LC-MS/MS分析。
15.1.1.2番石、榴汁、柠檬香精
同7.1.1.2，供LC-MS/MS分析。
15.1.1.3 固化乳酸菌饮料、木瓜牛奶
同7.1.1.3，仅吹氮浓缩至近干，用甲醇定容为5 mL，供LC-MS/MS分析。
15.1.2 葡萄果冻、柚子酱、调味精粉
同7.1.2。 仅吹至近干，用甲醇定容至5 mL，供LC-MS/MS分析。
15.1.3鸡蛋面、水果酥
同7.1.3，供LC-MS/MS分析。
15.1.4 橄榄油
同7.1.4，供LC-MS/MS分析。
15.1.5 浓度调整
若以上处理试样浓度超过工作曲线线性范围，根据试样浓度用甲醇稀释定容至适合浓度。
15.2测定
15.2.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：
a） 色谱柱： Kinetex C18柱，长100 mm，内径4.6 mm，粒径2.6μm；
b） 预保留柱：Eclipse XDB C18柱，长150 mm，内径4.6 mm，粒径5μm；或相当者；
c） 其他色谱条件参见附录E中的E.1。
15.2.2质谱条件
质谱条件如下：
a） 离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+ ）；
b） 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；
c） 分辨率：单位质量分辨率；
d） 其他参考质谱条件参见E.2。
15.2.3液相色谱串联质谱测定
根据试样中被测物的含量，选取响应值适宜的标准工作溶液进行分析。对标准工作溶液、样液及空白试验溶液等体积参插进样测定。标准工作液和待测样液中24种邻苯二甲酸酯化合物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应稀释到合适浓度后分析。在上述LC-MS/MS条件下，24种邻苯二甲酸酯化合物的参考保留时间参见表E.2。邻苯二甲酸酯化合物标准品MRM图参见图F.1和图F.2。
在相同的实验条件下，样液中被测物的色谱峰保留时间与标准工作液相同，并且在扣除背景后的样液谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，误差不超过表2规定的范围内，则可判断样品中存在对应的被测物。
15.3空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
16 结果计算和表述
16.1用色谱数据处理机或按式（2）分别计算试样中被测化合物的含量：
式中：
Xi——试样中每种被测化合物的含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）；
Ai——样液中每种被测化合物的峰面积；
ci——标准工作液中每种化合物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
Vi——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
Ais——标准工作液中每种化合物的峰面积；
mi——最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。
16.2计算结果应扣除空白值，结果保留三位有效数字。
17 方法定量限、回收率
17.1 定量限
本方法的定量限（LOQ）DAP为0.01 mg/kg，其他化合物为0.1 mg/kg。
17.2 回收率
分别在葡萄酒、洋酒、18%白酒、58%白酒、番石榴汁、固体乳酸菌饮料、调味精粉、葡萄果冻柠檬香精、水果酥、柚子酱、鸡蛋面、食用橄榄油、木瓜牛奶中添加24种邻苯二甲酸酯，添加浓度及其回收率数据参见表G.1和表G.2。
18质量控制
同10。
