GB/T 23204-2008 茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定
气相色谱-质谱法
前言
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E、附录F、附录G、附录H、附录I和附录J为资料性附录。
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。
本标准中“茶叶中490种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法"的起草单位中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中国农业科学院茶叶研究所、天津博纳艾杰尔科技有限公司；“茶叶中29种酸性除草剂残留量的测定气相色谱-质谱法"的起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本标准中“茶叶中490种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱质-谱法"的主要起草人：陈宗懋、庞国芳、曹彦忠、胡雪艳、范春林、梁萍、汪群杰、楼正云、罗逢健、汤富彬、刘光明、张俊燕；“茶叶中29种酸性除草剂残留量的测定 气相色谱-质谱法"的主要起草人颜鸿飞、张莹、黄志强、黄萍、李拥军、王美玲、庞国芳。
1范围
本标准规定了绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中490种农药及相关化学品（参见附录A和附录F）残留量的气相色谱质谱测定方法，以及绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中29种酸性除草剂残留量的气相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中490种农药及相关化学品残留量的定性鉴别，其中可定量测定农药及相关化学品453种，以及绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中二氯皮考啉酸、调果酸、对氯苯氧乙酸、麦草畏、2-甲-4-氯、2，4-滴丙酸、溴苯腈、2，4-滴、三氯吡氧乙酸、1-萘乙酸、5-氯苯酚、2，4，5-滴丙酸、草灭平、2-甲-4-氯丁酸、2，4，5-涕、氟草烟、2，4-滴丁酸、苯达松、碘苯腈、毒莠定、二氯喹啉酸、吡氟禾草灵、吡氟氯禾灵、麦草氟、三氟羧草醚、嘧草硫醚、环酰菌胺、喹禾灵、双草醚29种酸性除草剂残留量的测定。
本标准定量测定的453种农药及相关化学品的方法检出限为0.001mg/kg~0.500mg/kg（参见附录A），29种酸性除草剂的方法检出限为0.01mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第1部分：总则与定义
（GB/T 6379. 1-2004，ISO 5725-1：1994，IDT）
GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T 6379. 2-2004， ISO 5725-2：1994，IDT）
SN/T 0918-2000 进出口茶叶抽样方法
3茶叶中490种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法
3.1原理
试样用乙腈均质提取，固相萃取柱净化，用乙腈-甲苯洗脱农药及相关化学品，气相色谱质谱仪检测，内标法定量。
3.2试剂和材料
3.2.1乙腈：色谱纯。
3.2.2甲苯：优级纯。
3.2.3丙酮：分析纯，重蒸馏。
3.2.4 二氯甲烷：色谱纯。
3.2. 5正己烷：分析纯，重蒸馏。
3.2.6甲醇：色谱纯。
3.2.7无水硫酸钠：分析纯。650℃灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用。
3.2.8乙腈-甲苯（3+1，体积比）。
3.2.9 微孔过滤膜（尼龙） 13 mm×0.2μm。
3.2.10内标溶液：准确称取3.5mg环氧七氯于100mL容量瓶中，用甲苯定容至刻度。
3.211农药及相关化学品和内标标准物质纯度≥95%，参见附录A。
3.2.12农药及相关化学品标准溶液
3.2.12.1标准储备溶液
准确称取5 mg~10 mg（精确至0. 1 mg）农药及相关化学品各标准物分别于10 mL容量瓶中，根据标准物的溶解性和测定的需要选甲苯、甲苯bing酮混合液、二氯甲烷或甲醇等溶剂溶解并定容至刻度（溶剂选择参见附录A） ，标准储备溶液避光0℃~4℃保存，可使用一年。
3.2.12.2 混合标准溶液（混合标准溶液A、B、C、D、E和F）
按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将490种农药及相关化学品分成A、B、C、D、E、F六个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对490种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录A。依据每种农药及相关化学品的分组号、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于100 mL容量瓶中，用甲苯定容至刻度。混合标准溶液避光0℃~4℃保存，可使用一个月。
3.2.12.3基质混合标准工作溶液
A、B、C、D、E、F组农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是将40μL内标溶液和--定体积的混合标准溶液分别加到10mL的样品空白基质提取液中，混匀，配成基质混合标准工作溶液A、B、C、D、E和F。基质混合标准工作溶液应现用现配。
3.2.13 固相萃取柱Cleanert TPT，10mL，2.0g或相当者。
3.3仪器
3.3.1 气相色谱质谱仪配有电子轰击源（EI）。
3 3.2 分析天平：感量0.1 mg和0 01 g。
3.3 3均质器：转速不低于20 000 r/min。
33.4旋转蒸发器。
3.3.5鸡心瓶：200 mL。
3.3.6 移液器：1 mL。
3.3.7离心机：转速不低于4 200 r/ min。
3.4 试样制备与保存
3.4.1试样的制备
茶叶样品经粉碎机粉碎，过20目筛，混匀，密封，作为试样，标明标记。
3.4.2 试样的保存
试样于常温下保存。
3.5测定步骤
3.5.1 提取
称取5 g试样（精确至0.01 g），于 80 mL离心管中，加入15 mL乙腈，15 000 r/min均质提取1 mn，4 200 r/mn离心5 mn，取上清液于200 mL鸡心瓶中。残渣用15 mL乙腈重复提取一次，离心，合并二次提取液，40℃水浴旋转蒸发至1 mL左右，待净化。
3.5.2 净化
在Cleanert TPT固相萃取柱中加入约2cm高无水硫酸钠，用10mL乙腈-甲苯预洗Cleanert TPT固相萃取柱，弃去流出液。下接鸡心瓶，放入固定架上。将上述样品浓缩液转移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用2 mL乙腈-甲苯洗涤样液瓶，重复三次，并将洗涤液移入柱中，在柱上加上50 mL贮液器，再用25mL乙腈-甲苯洗涤小柱，收集上述所有流出液于鸡心瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL。加入5mL正己烷进行溶剂交换，重复两次，最后使样液体积约为1mL，加入40μL内标溶液，混匀，用于气相色谱-质谱测定。
3.5.3气相色谱-质谱法测定
3.5.3.1条件
a）色谱柱：DB-1701石英毛细管柱[14%氰丙基苯基-甲基聚硅氧烷；30m×0.25mm （内径）×0. 25μm]或相当者；
b） 色谱柱温度：40℃保持1 min，然后以30℃/min程序升温至130℃，再以5℃/min升温至250℃，再以10℃/min升温至300℃，保持5 min；
c） 载气：氦气，纯度≥99.999%，流速1.2mL/min；
d） 进样口温度.290℃；
e） 进样量：1μL；
f） 进样方式：无分流进样，1 5min后打开阀；
g） 电子轰击源70 eV；
h） 离子源温度230℃；
i） GC-MS接口温度：280℃；
j） 溶剂延迟A组830min，B组780min，C组730min，D组5.50min，E组610min，F组5.50 min；
k）选择离子监测：每种化合物分别选择一个定量离子，2个~3个定性离子。每组所有需要检测离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种化合物的保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子丰度的比值，参见附录B。每组检测离子的开始时间和驻留时间参见附录C。
3 5.3.2 定性测定
进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度>50%，允许±10%偏差；相对丰度在20%~50%之间，允许±15%偏差，相对丰度在10%~20%之间，允许±20%偏差；相对丰度≤10%，允许±50%偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。
3.5.3.3 定量测定
本方法采用内标法单离子定量测定。内标物为环氧七氯。为减少基质的影响，定量用标准应采用基质混合标准工作溶液。标准溶液的浓度应与待测化合物的浓度相近。本方法的A、B、C、D、E、F六组标准物质在茶叶基质中选择离子监测GC-MS图参见附录D。
3.5.4平行试验
按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。
3.5.5 空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
3.6结果计算
气相色谱质谱测定结果可由计算机按内标法自动计算，也可按式（1）计算
式中：
Xi——试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
cs——基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
A——试样溶液中被测物的色谱峰面积；
As——基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；
ci——试样溶液中内标物的浓度，单位为微克每毫升（pg/mL）；
cst——基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；
Ast——基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；
Ai——试样溶液中内标物的色谱峰面积；.
V——样液最终定容体积，单位为毫升（ mL）；
m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白值。
3.7 精密度
本方法精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。本方法的精密度数据参见附录E。
4茶叶中29种酸性除草剂残留量的测定 气相色谱-质谱法
4.1原理
用乙腈超声振荡提取试样，石墨化碳黑固相萃取柱净化，三甲基硅烷化重dan甲烷衍生化，过弗罗里硅土固相萃取柱净化，用气相色谱质谱仪测定，外标法定量。
4.2试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。
4.2.1乙腈：色谱纯。
4.2.2丙酮：色谱纯。
4.2.3 正己烷：优级纯。
4.2.4 甲醇：色谱纯。
4.2.5苯。
4.2.6乙酸。
4.2.7甲苯：色谱纯。
4.2.8 无水硫酸钠：650℃灼烧4 h后，贮于干燥器中，冷却后备用。
4.2.9 三甲基硅烷化重dan甲烷正己烷溶液（2.0 mol/L）。
4.2.10 乙腈-甲苯-乙酸溶液（75+25+1，体积比）：准确移取75 mL丙酮、25 mL甲苯和1 mL乙酸混合均匀。
4.2.11丙酮-正己烷溶液（2+8，体积比）：准确移取20mL丙酮和80mL正己烷混合均匀。
4.2.12甲醇苯溶液（2+8，体积比）：准确移取20 mL甲醇和80 mL苯混合均匀。
4.2.13 农药标准品：二氯皮考啉酸、调果酸、对氯苯氧乙酸、麦草畏、2-甲-4-氯、2，4-滴丙酸、溴苯腈、2，4-滴、三氯吡氧乙酸、1萘乙酸、5-氯苯酚、2，4，5-滴丙酸、草灭平、2-甲-4-氯丁酸、2，4，5-涕、氟草烟、2，4-滴丁酸、苯达松、碘苯腈、毒莠定、二氯喹啉酸、吡氟禾草灵、吡氟氯禾灵、麦草氟、三氟羧草醚、嘧草硫醚、环酰菌胺、喹禾灵、双草醚标准品，纯度大于等于95%，英文名称、分子式和CAS登记号参见附录G。
4.2.14农药标准储备液：准确称取适量（精确至0.1mg）各农药标准品，用丙酮溶解于50mL棕色容量瓶，溶解定容，配制浓度为500μg/mL单标储备液。此储备液在0℃~4℃避光保存，有效期为90天。
4.2.15中间浓度混合标准工作溶液：准确吸取2.0mL单个农药的标准储备溶液于100mL棕色容量瓶中，用丙酮定容，配制浓度为10μg/mL混合标准中间溶液，标准中间液在0℃~4℃避光保存，有效期为30天。
4.2.16混合标准工作溶液：根据检测需要移取一定体积的混合标准中间溶液逐级稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，现配现用。
4.2.17石墨化碳黑固相萃取柱：1.0 g，12 mL，或相当者。
4.2.18弗罗里硅土固相萃取柱：250mg，3mL，或相当者。
4.3 仪器
4.3.1气相色谱质谱仪：配有电子轰击源（EI）。
4.3.2固相萃取装置。
4.3.3离心机：5 000 r/ min。
4.3.4涡旋混匀器。
4.3.5旋转蒸发仪。
4.3.6 氮气吹干仪。
4.3.7分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
4.3.8鸡心瓶：100 mL。
4.4试样制备与保存
4.4.1试样制备
按SN/T 0918-2000抽取有代表性茶叶样品500g，用粉碎机粉碎并通过40目筛，混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。
4.4.2试样保存
将试样于0℃~4℃保存。
在存样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
4.5测定步骤
4.5.1提取
称取2.5g （精确至0.01 g）试样于50 mL具塞离心试管中，加入20 mL乙腈超声30 min，加入无水硫酸钠2 g，然后置于旋转振荡器上振荡提取5 min，离心3 min（5 000 r/min），吸取上层清液，转入100mL鸡心瓶中。残渣用20mL乙腈再提取1次，合并全部提取液，在40℃水浴下旋转浓缩至约1mL，待净化。
4.5.2石墨化碳黑固相萃取柱净化
将石墨化碳黑固相萃取柱置于固相萃取装置，在柱中加入1cm高的无水硫酸钠，加样前用10mL乙腈-甲苯yi酸溶液预淋洗萃取柱，弃去淋洗液，当液面到达无水硫酸钠顶部时，迅速将4.5.1得到的试样提取浓缩液转入石墨化碳黑固相萃取柱中，用2 mL乙腈-甲苯-乙酸溶液洗涤鸡心瓶，重复三次，将全部洗涤液转入石墨化碳黑固相萃取柱中，然后用25mL乙腈-甲苯-乙酸溶液洗脱，收集所有流出液于另一100 mL鸡心瓶中。
4.5.3衍生化
将4.5.2收集的洗脱液在40℃水浴中旋转浓缩至约1mL，用平缓氮气流吹至近干，用2mL苯-甲醇溶液溶解，加入0.2 ml三甲基硅烷化重dan甲烷正己烷溶液，盖塞混匀，在30℃水浴中放置30 min；再用平缓氮气流吹至近干，用5 mL正己烷溶解残渣。
4.5.4弗罗里硅土固相萃取柱净化
加样前先用3mL丙酮、6mL正己烷依次预淋洗弗罗里硅土固相萃取柱，弃去淋洗液，将4.5.3得到的试样正己烷溶解液过弗罗里硅土固相萃取柱，弃去淋洗液；然后用6mL丙酮-正己烷洗脱，收集全部洗脱液于10 mL刻度试管中，45 C下用平缓氮气流吹至近干，用丙酮溶解定容至0 5 mL，供GC-MS测定。
4.5.5 气相色谱-质谱测定
4.5.5.1气相色谱质谱条件
a） 色谱柱：DB-1701石英毛细管柱[14%氰丙基-苯基-甲基聚硅氧烷，30 m×0.25mm（内径）×0.25μm]或相当者。
b） 色谱柱温度：40℃保持1 min，以40℃/min的速率上升至130℃不保持，以5℃/min的速率上升至250℃不保持，以10 ℃/min的速 率上升至300℃保持5 min。
c） 进样口温度：290℃。
d） 色谱-质谱接口温度：280℃。
e） 载气：氦气，纯度大于等于99. 999% ，流量为12mL/min。
f） 进样量：1μL。
g） 进样方式：无分流进样，1 min后开阀。
h） 电离方式：EI。
i） 电离能量：70 eV。
j） 测定方式：选择离子监测方式（SIM），根据各种农药的保留时间分组，每种农药选择一个定量离子，2个~3个定性离子，每种农药的保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的丰度比值参见附录G。
k）溶剂延迟时间：9 min。
4.5.5.2气相色谱-质谱测定
4.5.5.2. 1定性测定
进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度≥50% ，允许±10%偏差；相对丰度在20%~50%之间，允许±15%偏差；相对丰度在10%~20%之间，允许±20%偏差；相对丰度≤10%，允许±50%偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。在上述气相色谱-质谱条件下，各农药检测离子的开始时间和驻留时间参见附录H。
4.5.5.2.2定量测定
根据样液中酸性除草剂的含量情况，选定峰面积相近的标准工作容液。标准工作溶液和样液中农药的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作液和样液等体积交替进样测定，在上述色谱条件下，各农药混合标准物质SIM色谱图参见附录I。
4.5.6平行试验
按以上试验步骤对同一样品进行平行测定。
4.5.7空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
4.6结果计算
用色谱工作站或按式（2）计算试样中各农药的含量。
式中：
Xi——试样中各农药的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A——样液中各农药的峰面积；
cs——标准工作液中各农药的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
As——标准工作液中各农药的峰面积；
m——最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白值。
4.7精密度
本方法的精密度数据是根据GB/T 6379.1和GB/T 6379.2规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算的，本方法的精密度数据参见附录J。
