GB 23200.64-2016 食品安全国家标准
食品中吡丙醚残留量的测定
液相色谱-质谱_质谱法
前 言
本标准代替SN/T 2623-2010《进出口食品中吡丙醚残留量的检测方法 液相色谱—质谱/质谱法》。
本标准与SN/T 2623-2010相比，主要变化如下：
—标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；
—标准名称中“进出口食品"改为“食品"；
—标准范围中增加“其它食品可参照执行"。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
—SN/T 2623-2010。
1 范围
本标准规定了食品中吡丙醚残留量的制样和测定方法。
本标准适用于大米、大豆、菠菜、柠檬、茶叶、蘑菇、牛肉、猪肝和牛奶中吡丙醚残留量的检测，其它食品可参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样中残留的吡丙醚在醋酸钠缓冲剂作用下用酸性乙腈提取，再用PSA填料净化，液相色谱-质谱进行测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 无水硫酸镁（MgSO4）。
4.1.2 无水乙酸钠（C2H3O2Na）。
4.1.3 乙酸（C2H4O2）：色谱级。
4.1.4 乙腈（C2H3N）：色谱级。
4.1.5 N-丙基乙二胺（PSA）填料：50μm，色谱级。
4.1.6 甲酸（CH2O2）：色谱级。
4.1.7 乙酸铵（C2H7NO2）。
4.2 溶液配制
4.2.1 0.025％甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸铵）：准确吸取0.25 mL甲酸和称取0.386 g乙酸铵于1 L容量瓶中，用水溶解并稀释定容至1 L。
4.2.2 1％ 乙酸乙腈溶液。
4.3 标准品
4.3.1 吡丙醚标准品（Pyriproxyfen, C20H19NO3，CAS: 95737-68-1）:纯度>99％。
4.4 标准溶液配制
4.4.1 吡丙醚标准储备液：准确称取适量的吡丙醚标准品，用乙腈溶解并稀释配制成100 μg/mL的标准储备液， 4℃以下保存。
4.4.2 吡丙醚标准工作液：根据需要，用10％乙腈水溶液稀释成适当浓度的标准工作液，4 ℃以下保存。
4.5 材料
4.5.1 微孔滤膜：0.2μm，有机相型。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。
5.2 离心机：4 000 r/min。
5.3 分析天平：感量0.0001 g和0.01 g。
5.4 具塞聚丙稀离心管：2 mL和50 mL。
5.5 粉碎机。
6 试样制备与保存
6.1 大米、大豆、菠菜、柠檬、茶叶、蘑菇、牛肉、猪肝
取有代表性样品约500 g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封，并标明标记。将试样置于-18℃冷冻避光保存。
6.2 牛奶
取有代表性样品约500 g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样，密封，并标明标记。将试样置于低于 4℃冷藏避光保存。
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
注：以上样品取样部位按GB 2763附录A执行。
7 分析步骤
7.1 提取
7.1.1 茶叶、大豆、蘑菇、大米样品
称取上述样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL聚丙烯塑料离心管中，加10 mL水，混匀，静置30 min。将离心管置于冰浴中，然后加6 g 无水硫酸镁和1.5 g 无水乙酸钠，恢复至室温后，准确加入 15.0 mL 1％乙酸乙腈溶液，振荡提取4 min，4000 r/min离心5 min。
7.1.2 菠菜、柠檬和牛奶样品
称取15 g（精确至0.01 g）于预先称有6 g 无水硫酸镁和1.5 g 无水乙酸钠的50 mL聚丙烯塑料离心管中，将离心管置于冰浴中，恢复至室温后，准确加入 15.0 mL 1％乙酸乙腈溶液，振荡提取4 min，4000 r/min离心5 min。
7.1.3 牛肉、猪肝样品
称取15 g（精确至0.01 g）于50mL聚丙烯塑料离心管中，准确加入15 mL 1％乙酸乙腈溶液，振荡提取4 min，4000 r/min离心5 min。另取称有6 g 无水硫酸镁和1.5 g 无水乙酸钠的50 mL聚丙烯塑料离心管，加入10 mL水，溶解，待水溶液恢复到室温后，再将乙腈提取液转移至其中，振荡4 min，4000 r/min离心5 min。
7.2 净化
取1 mL上述乙腈提取液于预先称有50 mg PSA和150 mg无水硫酸镁的2 mL聚丙烯塑料离心管中，振荡提取1 min，在4000r/min离心5min。
准确吸取200 μL上清液用水定容至1 mL，混匀后过0.2 μm滤膜。滤液供液相色谱-质谱测定。
7.3 测定
7.3.1高效液相色谱参考条件
a） 色谱柱：色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，50mm×2.0mm(i.d.),3 μm或相当者。
b） 流动相：A：0.1％甲酸乙腈溶液，B：0.025％甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸铵）。
c） 流速：300μL/min，梯度洗脱程序见表1。
d） 柱温：35℃。
e） 进样量：20 mL。
7.3.2 质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾ESI，正离子。
b) 扫描方式：多反应监测(MRM)。
c) 其它参数条件见附录A 。
7.3.3 定量测定
根据试样中被测物的含量，选取响应值相近的标准工作液同时进行分析。标准工作液和待测液中吡丙醚的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下的吡丙醚的参考保留时间为1.4 min，标准溶液的多反应监测色谱图见附录B。
7.3.4 定性测定
按照液相色谱－质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度是用相对于zui强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
7.4 空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
8 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1）计算样品中待测药物残留量。计算结果需扣除空白值。
式中：
X —试样中吡丙醚的含量，单位为微克每千克（µg/kg）；
A —样液中吡丙醚的峰面积；
c —标准溶液中吡丙醚的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；
V —样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
As —标准溶液中吡丙醚的峰面积；
m —最终溶液所代表试样的质量，单位为克（g）；
注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9 精密度
9.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10 定量限和回收率
10.1 定量限
本方法菠菜、柠檬、牛肉、猪肝和牛奶中的定量限为5.0 μg/kg；
本方法大豆、大米、蘑菇和茶叶中的定量限为15.0 μg/kg。
10.2 回收率
不同基质中吡丙醚的添加回收率见附录C。
