NY/T 1379-2007 蔬菜中334种农药多残留的测定
气相色谱质谱法和液相色谱质谱法
前言
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D和附录E为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。
本标准起草单位：中国水稻研究所农业部稻米及制品质量监督检验测试中心、浙江大地农作物产品质安全检测中心。
本标准主要起草人：陈铭学、牟仁祥、朱智伟、金连登、应兴华、吴俐、闵捷。
1范围
本标准规定了蔬菜中305种农药（参见附录A）的气相色谱质谱多残留测定方法和29种农药（参见附录C）液相色谱质谱多残留测定方法。
本标准适用于蔬菜中334种农药残留量的测定。
本标准检出限为0.001mg/kg~0.05mg/kg（参见附录A和附录C）。
2原理
试样用乙腈匀浆提取，提取液经盐析，石墨碳黑、丙氨基固相小柱净化后，用气相色谱质谱仪检测305种农药（参见附录A）。质谱图由解卷积（deconvolution）软件经噪音处理、基线漂移的修正和共流出谱峰当中单个化合物的识别等处理后，根据被处理的质谱图和保留时间定性，内标法定量；提取液经乙二胺基-N-丙基（PSA）分散固相萃取净化后，用液相色谱质谱仪检测29种农药（参见附录C），根据选择离子丰度比和保留时间定性，外标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和去离子水或相当纯度的水。
3.1 乙腈：色谱纯。
3.2甲醇：色谱纯。
3.3甲苯：色谱纯。
3.4丙酮：色谱纯。
3.5 无水硫酸镁：500℃烘烤4 h，在干燥器内冷却至室温，贮于干燥器中备用。
3.6流动相A液：准确称取0.385g乙酸铵，溶解在1000mL甲醇中，过0.22μm滤膜。
3.7流动相B液：准确称取0.385g乙酸铵，溶解在1000mL水中，过0.22μm滤膜。
3.11 农药标准品：纯度≥95%。
3.12内标：氘代毒死蜱， 准确称取一定量氘代毒死蜱，用丙酮溶解稀释配成1 000 mg/L储备溶液，-18℃以下贮存。吸取一定体积的内标储备溶液，用丙酮逐级稀释成5 mg/L的内标添加溶液。
3.13农药标准溶液
3.13.1 气相色谱质谱法测定用标准溶液
单一农药标准溶液：分别准确称取某农药标准品，用丙酮溶解稀释，逐一配成1000 mg/L的单一农药标准储备溶液，-18℃以下贮存。使用时根据各农药在质谱中的响应值，吸取适量的标准储备液，用丙酮稀释配制成所需的标准工作溶液。
混合农药标准溶液：根据各农药在质谱中的响应值，逐一吸取一定体积的农药标准储备液分别注入同一容量瓶中，用丙酮稀释至刻度，配制成农药混合标准储备溶液。使用前用丙酮稀释成所需的标准工作液，其间加入一定量的内标使用溶液。混合标准工作溶液浓度和内标浓度见附录A。
3.13.2 液相色谱质谱法测定用标准溶液
单一农药标准溶液：分别准确称取某农药标准品，用乙腈溶解稀释，逐一配成1000 mg/L的单一农药标准储备溶液，-18℃以下贮存。使用时根据各农药在质谱中的响应值，吸取适量的标准储备液，用甲醇稀释配制成所需的标准工作溶液。
混合农药标准溶液：根据各农药在质谱中的响应值，逐一吸取一定体积的农药标准储备液分别注入同一容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成农药混合标准储备溶液。使用前用甲醇稀释成所需的标准工作液。混合标准工作溶液浓度见附录C。
4仪器
4.1 气相色谱-质谱仪：附电子轰击源（EI）， 带冷阱的程序升温进样口（PTV） ，解卷积软件， NIST05质谱库。
4.2液相色谱-质谱仪：附电喷雾离子源（ESI）。
4.3高速分散机：转速不低于20 000 r/min。
4.4离心机。
4.5旋转蒸发仪。
4.6氮吹仪。
5试样的制备
将采集的样品去除其中杂物，取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎后密封，于4℃冷藏保存。
6分析步骤
6.1 样品处理
6.1.1 提取
称取15g试样（精确到0.01g）于100mL离心管中，加入30.0mL乙腈，在高速分散机中匀浆2 min，加入7.5 g无水硫酸镁，再匀浆1 min，然后于3 000 r/min离心5min。
6.1.2浓缩
取上清液10mL至50mL鸡心瓶中，于旋转蒸发仪上50℃以下减压浓缩，当浓缩至约1mL时，加入10 mL乙腈，使提取液中少量水分与乙腈形成共沸物除去，最后使试液体积约为1 mL，待净化。
6.1.3净化
将石墨碳黑固相萃取柱和丙氨基固相萃取柱自上而下串联，先用5 mL乙腈+甲苯（3+ 1）预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入6.1.2浓缩试液，鸡心瓶用10 mL乙腈+甲苯（3+ 1）分次淋洗，并将淋洗液加入柱中，用25 mL乙腈+甲苯（3+ 1）洗脱农药，洗脱液合并于鸡心瓶中，并在旋转蒸发仪上50℃以下减压浓缩近干。用丙酮定量转移并定容至2.5 mL，其间加入125μL 5mg/L的内标添加溶液，混匀，用于气相色谱质谱测定。
移取6.1.1.上层乙腈提取液1 mL于2 mL离心管中，加入50 mg PSA和200 mg无水硫酸镁，蜗旋振荡1 min后于7000r/min离心5 min。取0.5 mL于50℃用氮气缓馒吹干后，加入0.5mL甲醇，混匀，过0.22 μm滤膜，用于液相色谱质谱测定。
6.2测定
6.2.1 相色谱质谱法
6.2.1.1仪器参考条件
a）色谱柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）石英毛细管柱或相当者；
b） 柱箱温度：70℃保持5 min，然后以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃ /min升温至280℃，保持10 min；
c） 进样方式：溶剂排空模式；
d） 进样程序：初始温度5℃，保持2.5min，然后以720℃/min升温至280℃，保持2min，再以720℃/min升温至450℃，保持5 min；溶剂排空流量：50.0 mL/min；溶剂排空压力：0.0 psi；进样口压力：20.0 psi（恒压模式）；
e） 进样量：20μL；
f） 冷却气：液体CO2；
g） 载气：氮气，纯度≥99.999%；
h） 质谱参数：电子轰击源：70 eV；离子源温度：230℃ ；四极杆温度：150℃；
GC-MS接口温度：280℃；
i） 数据采集模式：全扫描；扫描范围：35m/z~550m/z。
6.2.1.2目标化合物质谱库和保留因子校正库的建立
将一定浓度的单一农药标准溶液注入气相色谱-质谱仪，获得该农药的保留时间和质谱图，利用解卷积软件根据质谱图建立目标化合物质谱库，根据保留时间建立保留因子校正库。根据不同出峰时间段，选择三种以上农药的保留时间，建立保留因子校正曲线。
6.2.1.3定性和定测定
样品中未知组分的色谱保留时间与标准品一致，且相应的质谱图经解卷积后与标准质谱图一致，则可认定为该农药。
采用内标法单离子定量，选择解卷积后质谱图中基峰的峰高或峰面积与标准相比进行定量。
6.2.2液相色谱质谱法
6.2.2.1仪器参考条件
a） 色谱柱：C18柱，3.0μm，150mm×2.1mm；
b） 柱温：40℃；
c） 进样量：10μL；
d） 离子源：电喷雾ESI；
e） 扫描方式：多信号扫描；
f） 雾化气、窗帘气均为高纯氮气；使用前应根据仪器状况调节各气体流量和温度以使质谱灵敏度达到检测要求；
g） 离子源温度：350℃；
h） 电喷雾电压：3000 V；
i） 监测定性定量离子对、碰撞电压参见附录D；
j） 流动相及流速见表1。
6.2.2.2定性和定测定
样品中未知组分的色谱保留时间与标准品一致，且相应的定性离子和定量离子的丰度比同标准相一致则可认定为该农药。
采用外标法单离子定量，各农药的定量离子参见附录D。
7结果计算
7.1 气相色谱质谱法
样品中被测农药残留量以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：
式中：
A——试样中被测农药基峰的峰高或峰面积；
A'——农药标准溶液 中被测农药基峰的峰高或峰面积；
A'i——试样溶 液中内标基峰的峰高或峰面积；
Ai ——标准溶液中内标基峰的峰高或峰面积；
V1——提取溶剂总体积， 单位为毫升（mL）；
V2——分取用于检测的提取液的体积， 单位为毫升（mL）；
V3——样品定容体积， 单位为毫升（mL）；
m——样品的质量，单位为克（g）；
C——标准工作溶液中被测农药的浓度，单位为毫升每升（mg/L）；
计算结果表示到二位有效数字。样品含量超1mg/kg时表示到三位有效数字。
7.2液相色谱质谱法
样品中被测农药残留量以质量分数W计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：
式中：
V——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度， 单位为毫克每升（mg/L）；
V——样品提取时加入乙腈的体积，单位为毫升（mL）；
计算结果表示到二位有效数字。样品含量超1 mg/kg时表示到三位有效数字。
8准确度和精密度
蔬菜中0.05mg/kg~1.0mg/kg添加水平，气相色谱质谱法回收率在60% ~ 130%之间，变异系数小于20%。
蔬菜中0.01mg/kg~1.0mg/kg添加水平，液相色谱质谱法回收率在70%~120%之间，变异系数小于20%。
9总离子流图和选择离子监测图
气相色谱质谱法总离子流图及峰号见附录B。
液相色谱质谱法选择离子监测图见附录E。
