料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T 30955-2014

更新时间:2023-03-22      点击次数:321

GB_T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.jpg

中华人民共和国国家标准

GB/T 30955-2014

饲料中黄曲霉毒素B1B2G1G2的测定

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法

 

1范围

本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1B2G1G2的免疫亲和层析净化高效液相色谱法的测定方法。

本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1B2G1G2的测定。

本标准的检测限:黄曲霉毒素B10.2μg/kg,黄曲霉毒素B20.2μg/kg,黄曲霉毒素G10.3μg/kg,黄曲霉毒素G20.3 μg/kg

本标准的定量限:黄曲霉毒素B11.0μg/kg,黄曲霉毒素B21.0μg/kg,黄曲霉毒素G11.0μg/kg,黄曲霉毒素G21.0μg/kg

 

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 14699.1饲料 采样

GB/T 20195动物饲料 试样的制备

 

3原理

试样经过甲醇-水提取后,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化,经高效液相色谱仪分离,荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B1B2G1G2的含量。

 

4试剂

除非另有说明,均为分析纯的试剂;实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定,标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2 苯 色谱纯。

4.3乙腈:色谱纯。

4.4甲醇+水(8+2):取 80 mL甲醇(4.1)加20 mL水,混合均匀。

4.5 甲醇+水(45+55):取45 mL甲醇(4.1)加55 mL水,混合均匀。

4.6 +腈(98+2):取2 mL乙腈(4.3)加入98 mL苯(4.2),混合均匀。

4.7黄曲霉毒素标准储备溶液:用+乙腈(98+2)溶液(4.6)分别配制0.100 mg/mL的黄曲霉毒素B1B2G1G2标准储备液,保存于4℃备用,可使用1年。

4.8黄曲霉毒素混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉毒素B1B2G1G2标准储备溶液(4.7), 50℃下,氮气吹干仪吹干,用适量的甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)定容为混合标准工作液,黄曲霉毒素B1B2G1G2各分别为0 ng/mL1 ng/mL5 ng/mL10 ng/ mL50 ng/mL

4.9 PBS缓冲溶液:称取8.0 g氯化钠,1.2 g磷酸氢二钠,0.2 g磷酸二氢钾,0.2 g钾,用990 mL 纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0 最后用纯水稀释至1000 mL

4.10次氯酸钠。

 

5仪器和设备

实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。

5.1 高速均质器,18 000 r/ min~22 000 r/min,或震荡器。

5.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱,柱容量≥300 ng

5.3玻璃纤维滤纸,直径 11 cm,孔径1.5 μm

5.4玻璃定量管,10 mL

5.5 氮吹仪,50℃。

5.6 光化学衍生系统。

5.7高效液相色谱仪,带荧光检测器。

 

6试样采集与制备

GB/T 14699.1采样;按GB/T 20195用四分法缩减至500 g,粉碎后过1 mm孔径的分析筛,混匀后装入密闭容器,冷藏保存。

 

7分析步骤

7.1 提取

称取试样(粒度小于1mm50.0 g250 mL具塞锥形瓶中,加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mLV1)甲醇+水(8+2)溶液(4.4),以均质器高速搅拌提取2 min,或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤,准确移取10.0 mLV2 )滤液并加入40.0 mLV3 PBS缓冲溶液(4.9)稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1~2次,至滤液澄清,备用。

7.2净化

将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mLV,)样品提取液注入玻璃定量管中,将空气压力泵与玻璃定量管连接,调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,待溶液全部流出后,以10.0 mL纯水清洗柱子2次,弃去全部流出液。准确加入1.0 mLV)甲醇(4.1 洗脱,流速不超过1mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,加纯水定容为2.0mL,供色谱检测用。

7.3测定

7.3.1色谱条件

色谱柱C18150 mm内径4.6 mm填料直径5μm,或相当者。

流动相:甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)。

流速:0.8 mL/min

检测波长:激发波长360 nm;发射波长440 nm

光化学衍生系统。

柱温:30 ℃。

进样量:20μL

7.3.2色谱测定

分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积)。经过与黄曲霉毒素B1B2G1G2标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1B2G1G2的浓度c(μg/L)。标准品色谱图参见附录A

警告——黄曲霉毒素是高致癌性物质,应十分小心处理。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。

 

8结果计算与表述

8.1 结果计算

试样中黄曲霉毒素B1B2G1G2含量以质量分数Xi计,单位为微克每千克(μg/kg),按式(1)计算:

image.png

式中:

Pi——试样溶液中黄曲霉毒素B1B2G1G2各组分的峰面积值;

Vi——样品的总稀释体积,单位为毫升(mL);

ci——黄曲霉毒素B1B2G1G2各标准溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);

V——标准溶液的进样体积(μL);

P——黄曲霉毒素B1B2G1G2各标准溶液峰面积平均值;

m——试样质量,单位为克(g)。

8.2 结果表示

测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果表示到小数点后一位。

 

9重复性

在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%

 

版权所有©2024 广州信谱徕科学仪器有限公司 All Rights Reserved    备案号:粤ICP备13051513号    sitemap.xml    管理登陆    技术支持:化工仪器网