SN/T 4139-2015 出口水果蔬菜中乙萘酚残留量的测定

更新时间:2023-06-08      点击次数:250

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 4139-2015

出口水果蔬菜中乙萘酚残留量的测定

Determination of 2-naphthol residue in fruits and vegetables for export

 

1范围

本标准规定了植物源性食品中乙萘酚含量的高效液相色谱(HPLC)检测以及高效液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)检测和确证方法。

本标准适用于苹果、柑橘、小白菜、西红柿等食品中乙萘酚含量的测定和确证。

 

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可(ke)少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

 

3原理

试样经乙腈提取,氨基柱净化,经高效液相色谱仪和高效液相色谱-质谱/质谱仪检测,外标法定量。

 

4试剂和材料

除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1乙腈:高效液相色谱级。

4.2甲醇:高效液相色谱级。

4.3 甲苯。

4.4氯化钠。

4.5乙腈-甲苯溶液(3+1,体积比):量取300 mL乙腈(4.1)和100 mL甲苯(4.3),混匀后备用。

4.6乙腈溶液(5+5,体积比):准确量取 50 mL乙腈(4.1)和50 mL水,混匀后备用。

4.7 乙腈溶液(1 +9,体积比):准确量取10 mL乙腈(4.1)和90 mL水,混匀后备用。

4.8乙萘酚标准品:CAS NO.135-19-3,纯度≥99.5%

4.9标准储备溶液:精确称取适量的上述标准品,用甲醇溶解配制溶液浓度1mg/mL的标准储备溶液,-20℃下保存。

4.10标准中间溶液:用甲醇分别稀释标准储备液至终浓度约为10 mg/L,低于4℃下保存。

4.11基质标准工作液:吸取适量的标准中间溶液(4.10),用空白样品提取液配成适当浓度的混合标准工作溶液。现配现用。

4.12 氨基柱3 mL500 mg或相当者。使用前用5 mL甲苯、5 mL乙腈和5 mL乙腈-甲苯溶液(4.5)活化。

4.13 0.22μm微孔滤膜,有机系。

 

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪,配有荧光检测器。

5.2高效液 相色谱质谱/质谱仪,配电喷雾离子源(ESI)。

5.3 电子天平:感量为0.01 g0.01 mg

5.4旋转蒸发仪。

5.5旋涡混匀器。

5.6氮吹仪。

5.7 离心机:5 000 r/min

5.8具塞塑料离心管:50mL

 

6试样制备与保存

6.1试样制备

蔬菜、水果样品取可食部分切碎,用均质器匀浆后装入洁净容器内密封,并标明标记。

6.2试样的保存

将试样于-18℃以下保存。

 

7测定步骤

7.1 提取

称取匀浆后的样品10.0g50 ml离心管中,加入25 mL乙腈(4.1),再加入3 g氯化钠(4.4),涡旋振荡提取5min5000r/min离心3min将上层有机相转移至旋蒸瓶中。用25mL4.1)乙腈重复提取1次,合并有机相,在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL,向旋蒸瓶中加入5mL乙腈-甲苯(3+ 1)(4.5)溶液溶解残渣,待净化。

7.2净化

将上述溶液全部转移至活化后的氨基柱上,用鸡心瓶收集流出液,再每次用2 mL乙腈-甲苯 3+1)(4.5)溶液洗涤旋蒸瓶3次,并将洗涤液移入柱上,再用10 mL乙腈甲苯(3+ 1)(4.5)溶液洗脱化合物,收集全部流出液。并在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL,氮吹至干。HPLC法用1 mL乙腈溶液(4.6)或LC-MS/MS法用1 mL乙腈溶液(4.7)溶解残渣,过滤膜后供HPLCLC-MS/MS测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

液相色谱条件如下:

a 色谱柱C18250 mm×4.6 mm内径),5.0μm,或功能相当者;

b 流动相:乙腈和水(50+50,体积比),等体积洗脱;

c 流速:1 mL/min

d 波长:激发波长λex=250 nm,发射波长λem=410 nm

e 柱温:30℃;

f 进样量:20μL

7.3.2 液相色谱-质谱/质谱条件

液相色谱-质谱/质谱条件如下:

a色谱柱C18150 mm×2.0i.d.mm5.0μm,或功能相当者;

b)流动相:乙腈(B):2 mmol/L乙酸铵溶液(A),梯度洗脱程序见表1

c)流速:0.30 mL/min或根据仪器条件优化;

d)柱温:40℃;

e)进样量:30μL

f)离子源:电喷雾离子源;

g)离子化模式:负离子;

h)扫描方式:多反应监测(MRM);.

i)其他质谱条件:见附录 A

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7.3.3 定量测定

高效液相色谱法采用保留时间定性、峰面积定量,如果残留量超出标准曲线范围,应用定容溶液进行适当稀释。标准品的色谱图见附录B中的图B.1,乙萘酚的保留时间为8.0 min

液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和基质标准工作容液,基质标准曲线法测定样液中的乙萘酚药物残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内,如果残留量超出标准曲线范围,应用空白样品提取液进行适当稀释。标准品的多反应监测色谱图见附录B中的图B.2,乙萘酚的保留时间为9.1min

7.3.4 定性测定

按照上述条件测定样液和标准溶液,如果样液中待测物的色谱峰保留时间与标准溶液一致,并且在扣除背景后的样液谱图中,所选择的离子对均出现,各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比,相对丰度偏差不超过表2的规定,则可判断样品中存在相应的被测物。

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7.3.5空白实验

除不加试样外,均按上述测定步骤进行。

 

8结果计算

用色谱数据处理机或按照式(1)计算样品中待测物的残留量,计算结果需扣除空白。

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式中:

x——试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg);

c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);

V——试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);

m——试样溶液所代表的质量, 单位为克(g)。

 

9测定低限、回收率

9.1 测定低限

高效液相色谱的测定低限为50μg/kg,高效液相色谱质谱/质谱的测定低限为10μg/kg

9.2回收率

不同基质中添加深度水平下的回收率范围见表3和表4

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