NY/T 3942-2021 水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定

更新时间:2023-06-15      点击次数:436

NY_T 3942-2021 水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定 高效液相色谱法.jpg

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 3942-2021

水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定

高效液相色谱法

Determination of L-malic acid and D-malic acid in fruits and their derived products-High performance liquid chromatography

 

前言

本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第 1部分:标准化文件的结构和起草规则》和GB/T 20001.4-2015《标准编制规则 4部分:试验方法标准》的规定起草。

请注意本文件某些内容可能涉及专(zhuan)利。本文件的发布机构不承担识别专(zhuan)利的责任。

本文件由农业农村部种植业管理司提出。

本文件由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC 501)归口。

本文件起草单位:中国农业科学院果树研究所、青岛农业大学、青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室、山东农业工程学院。

本文件主要起草人:聂继云、匡立学、沈友明、佟瑶、程杨、徐国锋、李静、闫震、秦旭。

 

1范围

本文件规定了水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸测定的高效液相色谱法。

本文件适用于水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸含量的测定。

 

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可(ke)少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。

 

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

 

4原理

试样用水提取,经固相萃取小柱净化,反相液相色谱分离,紫外检测器或二极管阵列检测器检测,以保留时间定性,峰面积外标法定证

 

5试剂或材料

除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。

5.1乙酸铜[Cu2(CH3COO)4CAS号:142-71-2]

5.2 L-缬氨酸(C5H11NO2CAS号:72-18-4)。

5.3甲醇(CH4OCAS 号:67-56-1):色谱纯。

5.4流动相:称取1.5961g乙酸铜(5.1)至1000 mL容量瓶中,加水浴解后,加入1.8744 g L-缬氨酸(5. 2),用水溶解并定容,过水相型微孔法膜(5.1)。

5.5 L-苹果酸(C4H6O5CAS97-67-6):纯度为99%,或经国家认证并授于标准物质证书的标准物质。

5.6 D-苹果酸(C4H6O5CAS636-61-3):纯度为99%,或当国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.7标准储备液(2.0 mg/mL):分别称取L-苹果酸(5.5)和D-苹果酸(5.6)各20 mg(精确至0.1 mg)于10 mL容量瓶中,用水溶解并定容,配制成2.0 mg/mL的标准储备液。4℃下保存,有效期3个月。

5.8标准工作溶液:分别量取0.05mL0.50mL1.00mL1.50mL2.00mL2.50mL L-苹果酸和D-苹果酸的标准储备液(5.7)于65 mL容量瓶中,定容,配制成混合标准溶液。混合标准溶液中L-苹果酸和D-苹果酸的浓度均为0. 020 mg/mL0.20 mg/mL0.40 mg/mL0.60 mg/mL0.80 mg/mL1.00 mg/mL

5.9 净化柱:反相C18固相萃取小柱 200 mg/6 mL,或性能相当者。

5.10 水相型微孔滤膜孔径0. 45μm

 

6仪器设备

6.1高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。

6.2电子天平:感量0.01 g0.1 mg

6.3 匀浆机。

6.4超声波清洗机: 频率不低于40 kHz

6.5冷冻研磨仪。

6.6离心机:转速不低于9 000 r/min

6.7固相萃取装置。

 

7试样的制备

7.1 新鲜水果

新鲜水果洗净擦干,取代表性的可食部分约1kg,切碎,用匀浆机制成匀浆,装入洁净容器,密封,-18℃以下冷冻保存。

7.2 果汁

7.2.1 带果肉果汁

用匀浆机制成匀浆,装入洁净容器,密封,-18℃以下冷冻保存。

7.2.2不带果肉果汁

摇匀,装入洁净容器,密封,-18℃以下冷冻保存。

7.3水果干制品

样品切成约2 mmX2 mm的小块,液氨冷冻研磨成粉末,装入洁净容器,密封,-18℃以下冷冻保存。

7.4 水果罐头类

取罐头全部内容物,用匀浆机制成匀浆,装入洁净容器,密封, -18℃以下冷冻保存。

 

8分析步骤

8.1试样溶液的制备

称取5g(精确至0.01g)均匀试样至50mL塑料离心管中,加入20mL水,摇匀,40kHz频率下常温超声提取20min9000r/min离心15min,上清液转移至50mL容量瓶中,残渣再用10mL水按上述步骤重复提取1次,合并2次提取液,用水定容至刻度,摇匀,得到样品提取液。依次用5 mL甲醇(5.3)和5 mL水预淋洗、活化固相萃取小柱(5.9)。吸取5 mL样品提取液加入活化好的固相萃取小柱中,弃去2 mL初始滤液,收集滤液供高效液相色谱仪分析测定。

8.2液相色谱参考条件

a色谱柱C18色谱柱250 mm×4.6mm×5μm,或等效的色谱柱;

b)柱温:30℃;

c)流速:1 mL/min

d)进样量:10μL

e)检测波长:302 nm

D)流动相(5. 4)洗脱:等度洗脱30 min

8.3标准工作曲线绘制

按照8.2设定的液相色谱工作条件,待仪器稳定后,依次测定系列标准工作溶液(5.8)中L-苹果酸和D-苹果酸的色谱峰面积。以系列标准工作溶液(5.8)中L-苹果酸和D-苹果酸的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制L-苹果酸和D-苹果酸的浓度-色谱峰面积标准曲线。标准品色谱图见附录A

8.4试样溶液的测定

将试样溶液注入高效液相色谱仪,得到色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中L-苹果酸和D-苹果酸的浓度。若试样溶液中测定组分浓度超过标准曲线上限,应稀释至标准曲线浓度范围再行测定。

8.5 空白试验

除不加入试样外,采用完(wan)全相同的分析步骤进行测定。

 

9结果计算和表述

试样中L-苹果酸、D-苹果酸含量按公式(1)计算。

image.png

式中:

ω——试样中L-苹果酸或D-苹果酸的含量的数值,单位为克每千克(g/kg);

C——试样溶液中L-苹果酸或D-苹果酸的浓度的数值,单位为毫克每毫升(mg/mL);

C0——空白溶液中L-苹果酸或D-苹果酸的浓度的数值,单位为毫克每毫升( mg/mL);

V——提取液体积的数值 ,单位为毫升(mL);

f——试样溶液稀释倍数;

m——试样的质量的数值,单位为克(g)。

计算结果≥10.0 g/kg时,保留3位有效数字;计算结果<10.0 g/kg时,保留2位有效数字。

 

10 精密度

在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%

在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%

 

11检出限和定量限

当称样量为5.0 g时,L-苹果酸和D-苹果酸的检出限为0.030 g/kg,定量限为0.10 g/kg


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