GB 31656.11-2021 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定

更新时间:2023-06-20      点击次数:195

GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定.jpg

中华人民共和国国家标准

GB 31656.11-2021

代替GB/T 22961-2008

食品安全国家标准

水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定

National food safety standard-

Determination of oxytetracyclinetetracyclinechlortetracycline

and doxycycline residues in aquatic products

 

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件代替GB/T 22961-2008 并增加液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件方法一对GB/T 22961-2008《河豚鱼、鳗鱼中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》进行修订。本文件与GB/T 22961-2008 相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术内容变化如下:

——更改了标准的适用范围(见12008年版的1);

——更改了方法的检测器,由紫外检测器改为荧光检测器(见6.12008年版的5.1);

——更改了方法的部分测定步骤和检出限(见82008年版的7)。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:

——GB/T 22961-2008

——本次为第一次修订。

 

1范围

本文件规定了水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量测定的高效液相色谱法。

本文件适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定。

 

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可(ke)少的条款。其中注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 30891-2014 水产品抽样规范

 

3 术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中土霉素,四环素、金霉素和多西环素经柠檬酸缓冲液提取后,固相萃取柱净化,液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。

 

5试剂与材料

以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯;水为符合GB/T 6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。

5.1.2乙酸镁(C4H6O4Mg·4H20)。

5.1.3 咪唑(C3H4N2)。

5.1.4 磷酸二氢钾(KH2PO4)。

5.1.5柠檬酸(C9H8O7H2O):优级纯。

5.1.6 磷酸氢二钠(Na2HPO4):优级纯。

5.1.7 乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA2H2O):优级纯。

5.1.8 冰乙酸(CH3COOH)。

5.2溶液配制

5.2.1磷酸二氢钾溶液:取磷酸二氢钾13.6g,加水适量使溶解并稀释至1000mL

5.2.2甲醇溶液:取甲醇5 mL、水95 mL,混匀。

5.2.3柠檬酸缓冲液:取柠檬酸6.30g、磷酸氢二钠13.8g、乙二胺四乙酸二钠1.86g,加水400mL使溶解,用冰乙酸调pH4.0,再用水稀释至500 mL

5.2.4咪唑缓冲溶液:取咪唑68.0g、乙二胺四乙酸二钠0.40g、乙酸镁10.0g,加水800mL使溶解,用冰乙酸调pH7.2,再用水稀释至1 000 mL,经0. 45μm水相微孔滤膜过滤后备用。

5.2.5甲醇咪唑缓冲溶液:取甲醇20 mL、咪唑缓冲溶液80 mL,混匀。

5.3 标准品

盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸土霉素、盐酸多西环素,含量均≥95%,具体见附录A

5.4标准溶液制备

5.4.1标准储备液(100μg/mL):分别准确称取适量标准品,用甲醇溶解稀释定容配制成土霉素、四环素、金霉素和多西环素浓度均为100μg/mL 的标准储备液。-18℃以下避光储存,有效期1个月。

5.4.2混合标准中间液:分别准确移取土霉素、四环素、金霉素和多西环素标准储备液1.0 mL1.0 mL2.0mL2.0mL100mL容量瓶,用甲醇稀释并定容,配制成土霉素、四环素、金霉素和多西环素浓度分别为1.0μg/mL1.0μg/mL2.0μg/mL2.0μg/mL的混合标准中间液。-18℃以下避光储存,有效期为7 d

5.5材料

5.5.1固相萃取柱500 mg/6 mLOasis HLB或性能相当者。

5.5.2水相微孔滤膜0. 22μm

 

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。

6.2分析天平:感量0.01 g

6.3分析天平:感量 0.00001 g

6.4涡旋振荡器。

6.5离心机:转速 6 000 r/min或以上。

6.6固相萃取装置(带负压抽滤器)。

6.7氮吹仪。

6.8组织匀浆机。

 

7试样的制备与保存

7.1试样的制备

GB/T 30891-2014附录B的要求制样。

a 取均质后的供试样品,作为供试试样;

b 取均质后的空白样品,作为空白试样;

c 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样。

7.2试样的保存

-18℃以下保存。

 

8测定步骤

8.1 提取

取试样5g(准确至±0.05g),加柠檬酸缓冲液20mL,涡旋震荡2min,超声提取10min,以6000r/min离心10 min,取上清液于另一50 mL离心管中。向残渣加柠檬酸缓冲液10 mL,重复提取2次,合并3次上清液,待净化。

8.2净化

Oasis HLB固相萃取柱依次用甲醇10 mL、水10 mL、柠檬酸缓冲液5 mL活化,移入待净化液,用甲醇溶液10mL,水10mL淋洗,抽干,加甲醇10mL洗脱,收集洗脱液,40C氮气吹干,加磷酸二氢钾溶液1.0 mL溶解残渣,超声1min,过0.22μm水相微孔滤膜后,供高效液相色谱测定。

8.3标准曲线的制备

准确移取土霉素、四环素、金霉素和多西环素混合标准中间溶液适量,用甲醇咪唑缓冲溶液稀释成土霉素和四环素浓度分别为50 ng/mL100 ng/mL200 ng/mL500 ng/mL1 000 ng/mL,金霉素和多西环素浓度分别为100 ng/mL200 ng/mL400 ng/mL1 000 ng/mL2 000 ng/mL的混合标准系列工作溶液供高效液相色谱测定。以待测物峰面积为纵坐标、相应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。计算回归方程和相关系数。

8.4 测定

8.4.1 液相色谱参考条件

a色谱柱C18 色谱柱250mm×4.6mm5μm,或相当者;

b)柱温:40℃;

c 进样量:30μL

d)流速:0.8 mL/min

e)激发波长:380 nm

f)发射波长:520 nm

g)流动相:甲醇-咪唑缓冲溶液。

8.4.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,以色谱峰面积定量,外标法计算。标准工作液及试样溶液中土霉素、四环素、金霉素和多西环素响应值应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液的高效液相色谱图见附录B中的图B. 1

8.5空白试验

取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作。

 

9结果计算和表述

试样中待测物残留量按标准曲线或公式(1)计算。

image.png

式中:

X——试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素含量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);

A——试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的峰面积;

As——标准溶液中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的峰面积;

Cs——标准溶液中土霉素、四环素、金霉素和多西环素浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);

V——最终试样定容体积的数值,单位为毫升(mL);

m——供试试样质量的数值,单位为克(g)。

 

10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度

10. 1灵敏度

本方法在水产品可食组织中土霉素和四环素的检测限均为10.0μg/kg,多西环素和金霉素的检测限均为20.0μg/kg;土霉素和四环素的定量限均为20.0μg/kg,多西环素和金霉素定量限均为40.0μg/kg

10.2 准确度

土霉素和四环素在20.0μg/kg~200μg/kg添加浓度的回收率为60%~110%;多西环素和金霉素在40.0μg/kg~ 400μg/kg添加浓度的回收率为60%~110%

10.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤15%


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