中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1651-2008
蔬菜及制品中番茄红素的测定
高效液相色谱法
Determination of lycopene in vegetables and derived products-HPLC
前言
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。
本标准起草单位：农业部蔬菜品质监督检验测试中心(北京)、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。
本标准主要起草人：刘肃、王敏、靳松、邵华。
1范围
本标准规定了用高效液相色谱仪测定蔬菜及制品中番茄红素的方法。
本标准适用于番茄、胡萝卜、番茄汁、番茄酱等蔬菜及制品中番茄红素的测定。
本方法的线性范围为10 ng~1 000 ng。
本方法的检出限为0.13 mg/kg。
2原理
蔬菜及制品中的番茄红素经丙酮-石油醚混合溶液[ψ(C3H6O+C6H14)=1+1]提取后，用石油醚液萃取，再用二氯甲烷定容，最后用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长472 nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3试剂
除非另有说明，在分析中至少使用色谱纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水。所有有机试剂每1 000 mL中加入1g 2,6-二叔丁基对甲酚(3.1)。
3.1 2,6-二叔丁基对甲酚，分析纯。
3.2丙酮(C3H6O)，分析纯。
3.3石油醚(C6H14)，60℃~90℃，分析纯。
3.4丙酮-石油醚混合溶液[ψ(C3H6O+C6H4)=1+1]。
3.5 甲醇(CH3OH)。
3.6乙腈(CH3CN)。
3.7二氯甲烷(CH2Cl2)。
3.8甲醇-乙腈-二氯甲烷混合溶液[ψ(CH3OH+CH3CN+CH2Cl2)=20+75+5]
3.9无水硫酸钠(Na2SO4)，分析纯。
3.10番茄红素标准品，纯度≥95%。
3.11番茄红素标准贮备液：准确称取0. 001 00 g番茄红素标准品，用二氯甲烷(3.7)溶解，转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，得到质量浓度为100mg/L的番茄红素标准贮备液。分装于三个样品瓶中，应避免光照和高温，贮于-20℃~-16℃冰柜中备用。
3.12番茄红素标准工作溶液：使用时番茄红素标准贮备液(3.11)用二氯甲烷(3.7)稀释得到质量浓度为20mg/L和5mg/L的番茄红素标准工作溶液。
4仪器
4.1高效液相色谱仪，配紫外检测器。
4.2 分析天平，感量0.01 mg和0.01 g。
4.3 砂心漏斗，G4。
4.4分液漏斗，250 mL。
4.5旋转蒸发仪。
4.6氮吹仪。
4.7组织捣碎机。
5试样制备
蔬菜样品洗净后去蒂、去皮，若有籽去籽，按照四分法取样后放入食品加工机中捣碎成匀浆。将匀浆试样放入聚乙烯瓶中于-20℃~-16℃条件下保存。
蔬菜制品密封好后置于-20℃~-16℃条件下保存。
6分析步骤
6.1提取
将试样充分混匀，蔬菜或汁类制品称取试样5 g，酱类制品称取试样2 g，精确至0.01 g，置于150 mL烧杯中，加入适量丙酮-石油醚混合溶液(3.4)直至完（wan）全淹没试样，用玻璃棒搅拌后静置，使番茄红素充分溶解，然后移入砂心漏斗(4.3)中真空抽滤，滤液收集于试管中。重复上述步骤直至将试样洗至无色。
6.2净化
6.2.1蔬菜和汁类制品
将全部滤液转移至分液漏斗中，静置分层，上层有机相通过装有无水硫酸钠(3.9)的玻璃漏斗后收集至圆底烧瓶中，下层水相继续用20mL石油醚(3.3)萃取，继续收集有机相，无水硫酸钠用石油醚(3.3)洗至无色并收集滤液。全部有机相在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00 mL二氯甲烷(3.7)溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。
6.2.2 酱类制品
将全部滤液转移至圆底烧瓶中在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00 mL二氯甲烷(3.7)溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。
6.3色谱参考条件
检测波长：472nm。
色谱柱：C18不锈钢柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者。
流动相：甲醇-乙腈-二氯甲烷混合溶液[ψ(CH3OH+CH3CN+CH2Cl2)=20+75+5]。
流速：1.0mL/min。
进样体积：10μL。
6.4 测定
分别将标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
6.5 空白测定
除不加试样外，采用完（wan）全相同的测定步骤进行平行操作。
7结果计算
试样中番茄红素含量用质量分数ω表示，单位为毫克每千克(mg/kg) ，按公式(1)计算：
ρs——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升(mg/ L) ；
Vs——标准溶液进样体积，单位为微升(μL)；
V0——试样溶液最终定容体积，单位为毫升(mL)；
Vx——待测液进样体积，单位为微升(μL)；
As——标准溶液的峰面积；
Ax——待测液的峰面积；
m——试样质量，单位为克(g)；
计算结果保留三位有效数字。
8色谱图
番茄红素标准溶液色谱图见附录A。
9精密度
在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20%，以大于这两个测定值的算术平均值的20%情况不超过5%为前提。
