GB 29687-2013 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定

更新时间:2023-08-08      点击次数:208

GB 29687-2013 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法.jpg

中华人民共和国国家标准

GB 29687-2013

食品安全国家标准

水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法

 

1范围

  本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。

  本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量的测定。

 

2规范性引用文件

  下列文件对于本文件的应用是必不可(ke)少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

  GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

  SC/T 3016水产品抽样方法

 

3原理

  试料中残留的阿苯达唑及代谢物,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,乙酸乙酯反萃取,高效液相色谱荧光检测器测定,外标法定量。

 

4 试剂和材料

  以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1盐酸2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑对照品:含量≥99%

4.2正己烷:色谱纯。

4.3乙腈:色谱纯。

4.4甲醇:色谱纯。

4.5 乙酸乙酯:色谱纯。

4.6 二氯甲烷:色谱纯。

4.7磷酸。

4.8十二水磷酸氢二钠。

4.9庚烷磺酸钠 :色谱纯。

4.10乙酸铵。

4.11 20%甲醇溶液:取甲醇80 mL,用水溶解并稀释至100 mL

4.12 0.05 mol/L乙酸铵溶液:取乙酸铵3.85 g,用水溶解并稀释至1 000 mL

4.13 0.04mol/L庚烷磺酸钠-磷酸溶液:取磷酸2.7mL,加水混匀,加庚烷磺酸钠8.08g,用水溶解并稀释至1 000 mL

4.14 3%磷酸溶液:取磷酸1.75 mL,用水溶解并稀释至100 mL

4.15 0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠0.716 g,用水溶解并稀释至100 mL,用3%磷酸溶液调节pH8.5,现配现用。

4.16 100μg/mL阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和2-氨基阿苯达唑砜标准贮备液:精密称取阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜各10mg以及盐酸2氨基阿苯达唑砜11.5mg,分别于100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100 μg/mL的标准贮备液。-18℃以下避光保存,有效期3个月。

4.17混合标准工作液:分别精密量取100μg/mL 2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑标准储备液适量,于同一量瓶中,用80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度,配制成浓度分别为2-氨基阿苯达唑砜1.0 μg/mL、阿苯达唑亚砜2.0 μg/ mL、阿苯达唑砜0.2 μg/mL以及阿苯达唑5.0 μg/mL的混合标准工作液。2~8℃避光保存,有效期1个月。

 

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。

5.2分析天平:感量0.000 01 g

5.3 天平:感量0.01 g

5.4均质机。

5.5离心机。

5.6旋转蒸发器。

5.7氮吹仪。

5.8梨形瓶:100 mL

5.9滤膜:有机相,0.45 μm

 

6试料的制备与保存

6.1试料的制备

  取适量新鲜或冷冻的鱼,去鳞、去皮,沿脊背取肌肉;虾,去头、去壳,取肌肉部分。绞碎,并使均质。

  ——取均质后的供试样品,作为供试试料。

  ——取均质后的空白样品,作为空白试料。

  ——取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。

6.2试料的保存

  -20℃以下保存。

 

7测定步骤

7.1虾、蟹类

7.1.1提取

  称取试料2 g±0.02 g,于50 mL离心管中,加乙酸乙酯15 mL,均质30 s,振荡5 min4 000 r/ min离心10 min,取上清液于100 mL梨形瓶中,残渣备用。另取一50 mL离心管,加乙酸乙酯15 mL,清洗均质机30 s,洗涤液于残渣中,振荡5 min4 000 r/min离心10 min,上清液合并至100 mL梨形瓶中,于35℃旋转蒸发至干,用20%甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。

7.1.2除脂

  将上述溶液移入10 mL离心管中,再向梨形瓶中加入正己烷1 mL,洗涤,正己烷转入离心管中,振荡1 min4 000 r/min离心5 min,弃正己烷层液,再加入正己烷1 mL,重复操作两次,取下层液备用。

7.1.3净化

  备用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL,混匀,加二氯甲烷1.5 mL,混合1 min4 000 r/ min离心5 min,取二氯甲烷液于10mL离心管中,再加二氯甲烷1.5mL,重复提取两次,合并三次二氯甲烷液于10mL离心管中,于35℃氮气吹千;用0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液1.0 mL溶解残余物,加乙酸乙酯2 mL,混合1min4000r/min离心5min,将乙酸乙酯液移入另一10mL离心管中,再向磷酸氢二钠溶液中加乙酸乙酯2 mL,重复提取两次,合并三次乙酸乙酯液,于40℃氮气吹干,用20%甲醇-1.0 mL溶解残留物,滤膜过滤,供液相色谱测定。

7.1.4基质匹配标准溶液的制备

  称取5份空白试料2g±0.02g,于50mL离心管中,分别加入混合标准工作液01025100200 μL,混匀,按提取、除脂、净化步骤操作,基质标准溶液浓度分别为:2-氨基阿苯达唑砜00.010.0250.10.2μg/mL,阿苯达唑亚砜00.020.050.20.4μg/mL,阿苯达唑砜00.0020.0050.020.04μg/mL,阿苯达唑00.050.1250.51 μg/mL,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2鱼类

7.2.1提取

  称取试料2 g±0.02 g,于50 mL离心管中,加乙酸乙酯15 mL,均质30 s 振荡提取5 min 4 000 r/min离心10 min,取上清液于100 mL梨形瓶中,残渣备用。另取一50 mL离心管加乙酸乙酯15mL,清洗均质机30s,将此液倒入上述残渣中振荡提取5min4000r/min离心10min,上清液合并至100 mL梨形瓶中,于35℃减压旋转蒸发至千,加入20%甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。

7.2.2除脂

  将上述溶液移入10 mL离心管中,再向梨形瓶中加入正己烷1 mL,洗涤,正己烷转入离心管,振荡1 min4 000 r/min离心5 min,去除正己烷层,再加入正己烷1 mL,依法重复操作两次。下层溶液过0.45μm有机相滤膜,供液相色谱测定。

7.2.3混合基质标准溶液的制备

  称取5份空白试料2g±0.02g,于50mL离心管中,分别加混合标准工作液1025100200μL,混匀按提取、除脂步骤操作,基质标准溶液浓度分别为:2-氨基阿苯达唑砜00.010.0250.10.2μg/mL,阿苯达唑亚砜00.020.050.20.4μg/mL,阿苯达唑砜00.0020.0050.020.04μg/mL,阿苯达唑00.050.1250.51 μg/ mL,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.3测定

7.3.1色谱条件

7.3.1.1色谱柱C18(150 mm×4.6 mm粒径5μm ),或相当者。

7.3.1.2检测波长:激发波长:290 nm,发射波长:320 nm

7.3.1.3柱温:30℃。

7.3.1.4流速:1.0 mL/ min

7.3.1.5进样量:30 μL

7.3.1.6流动相:梯度程序见表1

                                              image.png

7.3.2测定法

  取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和2-氨基阿苯达唑砜响应值应在仪器检测的线性范围之内。

  在上述色谱条件下,标准溶液和空白组织添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录A

7.4空白试验

  除不加试料外,采用完(wan)全相同的步骤进行平行操作。

 

8结果计算和表述

  试料中阿苯达唑及代谢物残留量按式(1)计算:

image.png

式中:

X——供试试料中相应的阿苯达唑及代谢物残留量,单位为微克每千克(μg/kg)

cS——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液浓度,单位为微克每毫升(μg/mL)

A——试样溶液中相应的阿苯达唑及代谢物峰面积;

V——样品定容体积,单位为毫升(mL)

As——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液的峰面积;

m——供试试料质量,单位为克(g)

注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。

 

9方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

  本方法检测限:阿苯达唑为10μg/kg2氨基阿苯达唑砜为2.5μg/kg,阿苯达唑亚砜为5 μg/kg,阿苯达唑砜为0.5 μg/kg

  本方法定量限:阿苯达唑为25μg/kg2氨基阿苯达唑砜为5μg/kg,阿苯达唑亚砜为10μg/kg,阿苯达唑砜为1 μg/kg

9.2准确度

  本方法阿苯达唑在25μg/kg~-500μg/kg2氨基阿苯达唑砜在5μg/kg~ 100μg/kg、阿苯达唑亚砜在10μg/kg~200μg/kg以及阿苯达唑砜在1μg/kg~20μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~110%

9.3精密度

本方法批内相对标准偏差≤15% ,批间相对标准偏差≤15%


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