GB 23200.114-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中灭瘟素残留量的测定

中华人民共和国国家标准

GB 23200.114-2018

食品安全国家标准

植物源性食品中灭瘟素残留量的测定 液相色谱-质谱联用法

National food safety standard-

Determination of blasticidin-S residues in foods of plant origin-

Liquid chromatography tandem mass spectrometry

1范围

  本标准规定了植物源性食品中灭瘟素（blasticidin-S）残留量的液相色谱-质谱联用测定方法。

  本标准适用于植物源性食品中灭瘟素农药残留量的测定。

2规范性引用文件

  下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

  GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量

  GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

  试样中灭瘟素用乙酸水溶液萃取，再经净化处理后，采用液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。

4试剂和材料

  除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/ T 6682规定的一级水。

4.1 试剂

4.1.1乙酸（CH3COOH，CAS 号：64-19-7）：色谱纯。

4.1.2乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。

4.1.3甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。

4.1.4甲酸铵（HCOONH2，CAS 号：540-69-2）。

4.1.5甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。

4.2溶液配制

4.2.1乙腈溶液（10+90，体积比）：将100 mL乙腈加入到900 mL水中，混匀。

4.2.2乙酸-乙腈水溶液（2+10+88，体积比）：将2 mL乙酸、10 mL乙腈加入到88 mL水中，混匀。

4.2.3甲酸-甲醇溶液（10+90，体积比）：将100 mL甲酸加入到900 mL甲醇中，混匀。

4.2.4 20mmoL/L甲酸铵水溶液（pH=3.5）：称取0.385g乙酸铵溶解于适量水中，用水定容至1000mL，用乙酸调pH至3.5。

4.3标准品

  灭瘟素标准品（C17H26N8O5，CAS号：2079-00-7）：纯度≥99.6%。

4.4标准溶液配制

4.4.1标准储备溶液（100 mg/L）：准确称取10 mg（精确到0.1 mg）灭瘟素标准品于50 mL烧杯中，用乙腈溶液（4.2.1）溶解并转移至100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，-18℃冷冻避光保存，有效期3个月。

4.4.2标准工作溶液（10 mg/L）：吸取1 mL标准储备溶液，加到10 mL容量瓶中，用乙腈溶液（4.2.1）定容，-18℃冷冻避光保存，有效期1个月。

4.5材料

4.5.1固相萃取柱：弱阳离子交换固相萃取小柱（500mg/6mL，带羧基官能团的弱阳离子交换柱）。

4.5.2滤膜：0.22μm，水系。

4.5.3十八烷基键合硅胶（C18）：40μm~60μm。

5仪器和设备

5. 1液相色谱串联-质谱：配电喷雾离子源（ESI）。

5.2分析天平：感量 0.0001g和感量0.01 g。

5.3组织捣碎机。

5.4离心机：转速不低于 10 000 r/ min。

5.5旋转蒸发器。

5.6振荡混合器（1 200次/ min）。

5.7涡旋振荡器。

6试样制备

  蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，取样部位按GB 2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。

  取谷类样品500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各500 g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。

  植物油类搅拌均匀。

  试样于-18℃以下温度条件下保存。

7分析步骤

7.1 提取

7.1.1谷类、茶叶、香辛料、 坚果、植物油

  称取5g（精确到0.01g）试样于100mL离心管中，参见附录A补水，涡旋振荡2min。加入20mL乙酸-乙腈水溶液（4.2.2），涡旋2min，振荡提取30min后，以8000r/min转速离心10min，倾出上清液，向装残渣的离心管中加入20 mL乙酸乙腈-水溶液（4.2.2）重复上述提取步骤2次，合并上清液，用提取液定容至100 mL，混匀，待净化。

7.1.2 水果、蔬菜、食用菌

  称取20 g（精确到0.01 g）试样于100 mL离心管中，参见附录A所列基质含水量补水，涡旋振荡2min，加入20mL乙酸-乙腈-水溶液（4.2.2），涡旋2min，振荡提取30min后，以8000r/min离心10min，倾出上清液，向装残渣的离心管中加入20 mL乙酸-乙腈-水溶液（4.2.2），重复上述提取步骤2次，合并提取液，用提取液定容至100 mL，混匀，待净化。

7.2 净化

7.2. 1谷类、茶叶、香辛料、坚果、植物油

  用弱阳离子交换固相萃取小柱净化，固相萃取小柱分别用水、甲醇各5 mL进行活化后，吸20 mL提取液上样过柱，分别用5mL水、5mL甲醇淋洗，抽干淋洗液，最后用10mL甲酸-甲醇溶液（4.2.3）进行洗脱，洗脱液收集至50 mL梨形瓶中，于40℃条件下旋转蒸干，用乙酸-乙腈-水溶液（4.2. 2）溶解并转移至5 mL容量瓶中，用乙酸-乙腈-水溶液（4.2.2）定容至5 mL，过0.22μm微孔滤膜后，待测。

7.2.2水果、蔬菜、食用菌

  从提取液中吸取5mL放入10mL离心管中，加入100mg的C18粉，涡旋3min后，以8000r/min

的速度离心10 min，取上清液过0.22μm微孔滤膜后，待测。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：HILIC 100 mm×2.1 mm（内径），1.7μm或相当者：

b）柱温：室温；

c）流动相：A为20mmoL/L甲酸铵水溶液（pH=3.5），B为乙腈，流动相及梯度洗脱条件见表1；

d）流速：0.25 mL/min；

e）进样量：10μL；

表1 流动相及梯度洗脱条件（V_A+V_B）

7.3.2 质谱参考条件

a）离子源类型：电喷雾离子源：

b）喷雾电压：2.8kV；

c）毛细管温度：550℃。

d）雾化气流量：600L/h；

e）碰撞气类型：氮气；

f）扫描方式：正离子扫描；

g）检测方式：多反应监测（MRM），监测条件见表2。

表2 灭瘟素多反应监测（MRM）的条件

7.4基质标准工作曲线的配制

  通过7.1和7.2制得空白基质溶液，将标准中间溶液稀释成质量浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL和0.2μg/ mL的系列基质标准溶液，基质标准溶液应现配现用。以测得峰面积为纵坐标、对应的标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

7.5 定性及定量

7.5.1保留时间

  被测试样中灭瘟素色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。

7.5.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比

  在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，月标化合物的质谱定性离子应出现，至少应包括1个母离子和2个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在灭瘟素。

7.6试样溶液的测定

  将基质标准溶液和待测溶液分别注入液相色谱质谱联用仪中，以保留时间和定性离子定性，外标法定量。样品中灭瘟素质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线最高点的则应稀释后再进行分析。

7.7空白试验

  除不加试料外，按照7.1~7.6的规定进行平行操作。

8结果计算

  试料中灭瘟素残留量以质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/ kg）表示，按式（1）计算。

式中：

ω——试样中灭瘟素残留量， 单位为毫克每千克（mg/ kg）；

ρ——标准溶液中灭瘟素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

A_i——样品溶液中灭瘟素的峰面积；

A_si——农药标准溶液中灭瘟素的峰面积；

V1——提取溶剂总体积， 单位为毫升（mL）；

V2——用于净化的提取溶液体积，单位为毫升（mL）；

V3——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样的质量，单位为克（g）；

  计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字。当计算结果大于1 mg/ kg时，保留3位有效数字。

9精密度

9.1在重复性条件下，2 次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据为：

a）质量含量为0.05 mg/kg时，重复性限（r）为0.0639；

b）质量含量为0.1 mg/kg时，重复性限（r）为0.179；

c）质量含量为0.2 mg/kg时，重复性限（r）为0.482。

9.2在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性限（R）的数据为：

a）质量含量为0.05 mg/ kg时，再现性限（R）为0.0181；

b）质量含量为0.1 mg/kg时，再现性限（R）为0.0432；

c）质量含量为0.5 mg/kg时，再现性限（R）为0.100。

10其他

  方法的定量限为0.05 mg/kg。

11 图谱

  0.01μg/mL灭瘟素标准溶液色谱图见图1。