ACQUITY UPLC BEH Amide, 130Å, 1.7μm糖基分析专用柱的清洗、再生和储存

更新时间:2023-10-10      点击次数:478

ACQUITY UPLC BEH Amide, 130Å, 1.7μm糖基分析专用柱的清洗、再生和储存


a. 清洗与再生

  如果发生峰形改变、谱峰分叉、出现肩峰、保留时间改变、分离度变化、残留、鬼峰或反压升高,可能说明色谱柱受到污染。选择可能溶解可疑污染物的清洗选项。

1. 所有清洗步骤在高温下更有效。可以在70 °C下进行清洗。

2. 使用上述色谱柱常用流速的一半进行清洗可能会很有用。在这种情况下出现高压的可能性就降低了。

3. 首先采用同时也是最简单的清洗步骤是在0–100%水范围内运行一系列梯度。确保降低水相比例高于75%的梯度的流速。在清洗过程中,柱长为150 mm的色谱柱应在250 μL/min或更低的流速下操作。梯度可短至5倍柱体积,并且3–5次重复即可达到效果。

4. 再生步骤和使用100%水性流动相进行冲洗的步骤有助于保持最佳峰形和获得最高的HILIC分离选择性。此外,分析人员可使用含有0.1% TFA的流动相执行梯度,以保持或恢复BEH Amide糖蛋白分析专用柱的性能。一些离子态污染物可能会强烈吸附到HILIC固定相上,TFA能够中和这类污染物以及与其形成离子对,从而有效清洗色谱柱固定相。

5. 用户可进样多种不同的清洗溶液以除去色谱柱中的强吸附物质或颗粒物质。通过系统配置实现最大体积进样。使用这类强清洗溶液时,最好断开检测器与色谱柱的连接并直接使其流向废液盘。

6. 通常建议将流向变换或反冲作为清洗步骤的一部分。此项应保留为最后的解决办法。此方法有可能进一步损坏色谱柱或提供瞬时性能改善。

 

b. 储存

  如果需要将色谱柱在室温下放置超过四天,应将其保存于100%乙腈中。色谱柱在高温和/或极端pH下使用后,应立即保存于100%乙腈中,尽可能延长色谱柱使用寿命。切勿将色谱柱保存在高水相(<50%有机相)流动相中,因为这样会滋生细菌。如果流动相中含有缓冲盐,则先用10倍柱体积(有关常规色谱柱体积,请参见表1)HPLC级水冲洗色谱柱,再用100%乙腈冲洗并储存。如果未执行这一中间步骤,在引入100%乙腈时色谱柱或系统中可能会出现缓冲盐沉淀。将色谱柱完全密封,防止溶剂蒸发而导致柱床变干。

  注:如果色谱柱运行了含甲酸盐(如,甲酸铵、甲酸等)的流动相,并且之后使用100%乙腈进行冲洗,那么在重新安装色谱柱并再次运行含甲酸盐的流动相时,可能需要花费略长的柱平衡时间。


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