GB 5009.8-2023 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定

更新时间:2023-11-09      点击次数:289

GB 5009.8-2023 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定.jpg

中华人民共和国国家标准

GB 5009.8-2023

食品安全国家标准

食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定

 

 

前言

  本标准代替GB 5009.8-2016《食品安全国家标准食品中果糖、 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》和GB5413.5-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定》。

  本标准与GB 5009.8-2016相比,主要变化如下:

  ——修改了第一法高效液相色谱法的适用范围;

  ——增加了离子色谱法为第二法;

  ——修改了酸水解-莱因-埃农氏法为第三法;

  ——增加了莱因-埃农氏法为第四法。

 

1范围

  本标准规定了食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定方法。

  第一法高效液相色谱法,适用于粮食及粮食制品、乳及乳制品、果蔬及果蔬制品、甜味料、糖果、饮料和婴幼儿食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。

  第二法离子色谱法,适用于食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。

  第三法酸水解-莱因埃农氏法,适用于食品中蔗糖的测定。

  第四法莱因-埃农氏法,适用于婴幼儿食品和乳品中乳糖的测定。

 

第一法 高效液相色谱法

 

2原理

  试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取后,高效液相色谱柱分离,示差折光检测器或蒸发光散射检测器检测,外标法定量。

 

3试剂和材料

  除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1乙腈(C2H3N):色谱纯。

3.1.2乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]

3.1.3 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]

3.1.4 冰乙酸(CH3COOH)

3.2试剂配制

3.2.1乙酸锌溶液(1 mol/L):称取乙酸锌21.9 g,加入3 mL冰乙酸,溶于水并稀释至100 mL,混匀。

3.2.2亚铁氰化钾溶液(0.25 mol/L):称取亚铁氰化钾10.6 g,溶于水并稀释至100 mL,混匀。

3.3 标准品

3.3.1果糖(C6H12O6CAS号:57-48-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.2葡萄糖(C6H12O6CAS号:50-99-7):纯度 99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.3蔗糖(C12H22O11CAS号:57-50-1):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.4麦芽糖(C12H22O11CAS号:69-79-4):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3..3.5乳糖(C12H22O11CAS号:63-42-3):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.4标准溶液配制

3.4.1混合标准储备液(20.0 mg/mL) :分别称取经过90℃±2℃干燥2 h的果糖和96℃±2℃干燥2 h的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各1 g(精确至0.001 g),用水溶解后转移至50 mL容量瓶中,加入2.5 mL乙腈,用水定容至刻度。置于0~4℃密封,保存期3个月。

3.4.2混合标准工作液:吸取0.100 mL1.00 mL2.00 mL3.00 mL5.00 mL混合标准储备液(20.0mg/mL)10.0mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度为0.200 mg/mL2.00 mg/mL4.00 mg/mL6.00 mg/mL10.0 mg/mL的混合标准工作液,可根据实际样品溶液的浓度适当调整混合标准工作液浓度。临用现配。

3.5 材料

3.5.1 0.45μm水性滤膜针头过滤器(纤维素滤膜除外)

3.5.2注射器。

 

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪:配示差折光检测器或蒸发光散射检测器。

4.2分析天平:感量为1 mg10 mg

4.3 旋涡混合器。

4.4离心机:转速≥4000 r/ min

4.5超声波清洗器。

4.6样品粉碎设备:高速粉碎机。

4.7恒温干燥箱。

4.8恒温水浴装置。

 

5分析步骤

5.1样品前处理

5.1.1试样制备

  取适量有代表性的样品,饮料等液态均匀样品直接摇匀;非均匀的样品需匀浆或粉碎均匀;冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀,必要时可采用30~40℃水浴加热搅拌;巧克力采用50~60℃水浴加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。

5.1.2试样提取

5.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样

  称取试样2 g(精确至0.001 g)100 mL比色管中,加入约50 mL 50~60℃热水,涡旋或搅拌,待样品充分溶解,再缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,涡旋混匀,超声30 min,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置。

5.1.2.2 含气体和酒精试样

  称取混匀后的试样50 g(精确至0.01 g)于蒸发皿中,在水浴上微热搅拌去除气体和酒精,待冷却后移至100 mL容量瓶中,缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,用水定容至刻度,混匀,静置。

5.1.2.3糖浆和蜂蜜类试样

  称取混匀后的试样1 g~2g(精确至0.001 g)100 mL比色管中,加入约50 mL水,涡旋混匀至充分溶解,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置。

5.1.2.4 其他试样

  称取粉碎或混匀后的试样1 g~10 g(精确至0.001 g)(目标糖含量≤5%时称取10 g;含量5%~

10%时称取5 g;含量10%~40%时称取2 g;含量≥40%时称取1 g)100 mL比色管中,加入约50 mL水,再缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,涡旋混匀,超声30 min,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置。

5.1.3净化

  上述试样提取液用滤纸过滤(弃去初滤液)或离心获取上清液后,用0.45 μm水性滤膜针头过滤器过滤至样品瓶,供高效液相色谱仪分析。

5.2仪器参考条件

  仪器参考条件如下:

a)色谱柱:氨基色谱柱(4.6 mm×250 mm粒径5 μm,氨基硅烷键合硅胶为填充剂),或性能相当者;

b)流动相:乙腈+=70+ 30(体积比)

c)流速:1.0 mL/ min

d)柱温:40℃;

e)进样量:10 μL

f)示差折光检测器条件;温度40℃;

g)蒸发光散射检测器条件:飘移管温度80~90℃;氮气流速2.5 L/min

5.3标准曲线的制作

  将混合标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪,测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖相应的峰面积或峰高。示差折光检测器以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积或峰高为纵坐标绘制标准曲线;蒸发光散射检测器以标准工作液浓度的幂函数为横坐标,以峰面积或峰高的幂函数为纵坐标绘制标准曲线。果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准溶液的高效液相色谱图参见附录A

5.4 试样溶液的测定

  将试样溶液注入高效液相色谱仪中,根据保留时间定性,记录目标物的峰面积或峰高,根据标准曲线得到试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度。

5.5 空白试验

  除不加试样外,均按上述步骤进行。

 

6分析结果的表述

  试样中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量按公式(1)计算。

                                              image.png

  式中:

  X——试样中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量,单位为克每百克(g/100 g)

  ρ——根据标准曲线得到的试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/ mL)

  ρ0——根据标准曲线得到的空白中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL)

  V——定容体积,单位为毫升( mL)

  f——稀释倍数;

  n——试样的称样量,单位为克(g)

  1 000——换算系数;

  100——换算系数。

  糖的含量≥10 g/100 g时,计算结果保留3位有效数字;糖的含量<10 g/100 g时,计算结果保留2位有效数字。

 

7精密度

  在重复条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

 

8其他

  当称样量为10 g、定容体积为100 mL时,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的方法检出限均为0.2 g/100 g,定量限均为0.5 g/100 g

 

第二法 离子色谱法

 

9原理

  试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取净化后,离子色谱柱分离,脉冲安培检测器检测,外标法定量。

 

10试剂和材料

  除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。

10.1试剂

10.1.1氢氧化钠(NaOH):色谱纯。

10.1.2冰乙酸(CH3COOH)

10.2试剂配制

10.2.1氢氧化钠溶液(200 mmol/L):称取8.00 g氢氧化钠,溶于水并稀释至1 000 mL,混匀。

10.2.2 酸溶液(3%,体积分数):量取3 mL冰乙酸,用水稀释至100 mL,混匀。

10.3标准品

10.3.1果糖(C6H12O6CAS 号:57-48-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

10.3.2葡萄糖(C6H12O6CAS号:50-99-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

10.3.3蔗糖(C12H22O11CAS 号:57-50-1):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

10.3.4麦芽糖(C12H22O11CAS号:69-79-4):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

10.3.5乳糖(C12H22O11CAS号:63-42-3):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

10.4标准溶液的制备

10.4.1混合标准储备液(10.0 mg/mL) :分别称取经过90℃±2℃干燥2 h的果糖和96℃±2℃干燥2h的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各1 g(精确至0.001 g),加水溶解后转移至100 mL容量瓶中,加入2 mL乙酸溶液,并用水定容至刻度。置于0~4℃密封,保存期3个月。

10.4.2混合标准中间液(100 mg/L):吸取1.00 mL果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖混合标准储备液(10.0 mg/mL)100 mL容量瓶中,用水定容至刻度。置于0~4℃密封,保存期1个月。

10.4.3混合标准工作液:分别吸取0.250 mL0.500 mL.1.00 mL2.00 mL2.50 mL混合标准中间液(100mg/L)10mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度为2.50 mg/L5.00 mg/L10.0 mg/L20.0 mg/L25.0 mg/L的混合标准工作液,可根据实际样品溶液的浓度适当调整混合标准工作液浓度。临用现配。

10.5 材料

10.5.1 0.45μm水性滤膜针头过滤器(纤维素滤膜除外)

10.5.2净化柱:C18固相萃取小柱(1.0 mL)或性能相当者。

10.5.3注射器。

 

11 仪器和设备

11.1 离子色谱仪:配脉冲安培检测器。

11.2样品粉碎设备:高速粉碎机。

11.3超声波清洗器。

11.4 分析天平:感量为1 mg

11.5 旋涡混合器。

11.6 离心机:转速≥4 000 r/ min

11.7 恒温干燥箱。

11.8恒温水浴装置。

 

12试验步骤

12.1样品前处理

12.1.1 试样制备

  取适量有代表性的样品,饮料等液态均匀样品直接摇匀;非均匀的样品需匀浆或粉碎均匀;冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀,必要时可采用30~40℃水浴加热搅拌;酱类等可以采用研磨或者均质混匀;巧克力采用50~60℃水浴中加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。

12.1.2 试样提取

12.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样

  准确称取试样2 g(精确至0.001 g)100 mL比色管中,加入约50 mL 50~60℃热水,涡旋或搅拌,待样品充分溶解,加入2 mL乙酸溶液,涡旋混匀,超声30 min,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置20 min

12.1.2.2 糖浆和蜂蜜类试样

  称取混匀后的试样2 g(精确至0.001 g)100 mL比色管中,加入约50 mL水,涡旋混匀至充分溶解,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置20 min

12.1.2.3 含气体和酒精试样

  准确称取试样10 g(精确至0.001 g)于蒸发皿中,在水浴上微热搅拌去除气体和酒精,待冷却后用水移至100 mL容量瓶中,加入2 mL乙酸溶液,用水定容至刻度,混匀,静置20 min

12.1.2.4 其他试样

  称取固体试样2 g(精确至0.001 g),半固态或液态试样5 g~10 g(精确至0.001 g)100 mL比色管中,加入约50 mL水,涡旋混匀,再加入2 mL乙酸溶液混匀后,超声30 min,转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置20 min

12.1.3 试样净化

  试样提取溶液可根据试样中目标糖含量稀释适当的倍数,婴幼儿配方乳粉中的乳糖检测时,稀释1000倍后净化;蜂蜜和糖果中高含量糖检测时,稀释500倍后净化。

  上述试样提取溶液或稀释溶液采用滤纸过滤或离心获取上清液后,依次过0.45μm水性滤膜针头过滤器和C18固相萃取小柱(1.0 mL),弃去前3 mL,收集后续的洗脱液待测。

  C18固相萃取小柱(1.0 mL)使用前依次用10 mL甲醇、15 mL水通过,静置活化30 min

12.2仪器参考条件

  仪器参考条件如下:

a)色谱柱:阴离子交换柱(4 mm×250 mm,粒径10 μm,以季铵盐为功能基,聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物树脂作为填料)(带保护柱4 mm×50 mm),或性能相当者;

b)流速:1.0 mL/min

c)进样量:10 μL

d)脉冲安培检测器:Au工作电极;糖检测波形参考条件见表1

e)淋洗液:淋洗液A:水;淋洗液B:氢氧化钠溶液(200 mmol/L);洗脱参考条件见表2

image.png

12.3标准工作曲线绘制

  将混合标准工作液按浓度从低到高依次注入离子色谱仪,测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖相应的峰面积,以标准工作液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,分别绘制标准曲线。果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准溶液的离子色谱图参见附录B

12.4试样溶液的测定

  将试样溶液注入离子色谱仪中,根据保留时间定性,记录峰面积,根据标准曲线得到试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度。

12.5空白试验

  除不加试样外,均按上述步骤进行。

 

13分析结果的表述

  试样中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量按公式(2)计算。

image.png

式中:

X——试样中果糖、 葡萄糖、 蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量,单位为克每百克(g/100 g)

ρ——由标准曲线计算得到的试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)

ρ0——由标准曲线计算得到的空白中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)

V——定容的体积,单位为毫升(mL)

f——稀释倍数;

m——试样的称样量,单位为克(g)

1000——换算系数;

10——换算系数。

  糖的含量≥10 g/100 g时,计算结果保留3位有效数字;糖的含量<10 g/100 g时,计算结果保留2位有效数字。

 

14精密度

  在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

 

15其他

  当称样量为2 g、定容体积为100 mL时,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的方法检出限均为0.015 g/100 g,定量限均为0.050 g/100 g

 

第三法 酸水解-莱因-埃农氏法

 

16原理

  试样除去蛋白质后,其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖,按还原糖测定,水解前后的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量。棉子糖、水苏糖、低聚半乳糖、果聚糖、聚葡萄糖和抗性糊精等会对蔗糖的测定产生干扰。

 

17试剂和溶液

  除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。

17.1 试剂

17.1.1 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]

17.1.2亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]

17.1.3 盐酸(HCI)

17.1.4 氧化钠(NaOH)

17.1.5甲基红(C15H15N3O2) :指示剂。

17.1.6 亚甲基蓝(C16H18ClN3S·3H2O):指示剂。

17.1.7 硫酸铜(CuSO4·5H2O)

17.1.8酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O)

17.1.9 冰乙酸(CH3COOH)

17.1.10乙醇(C2H5OH)95%

17.2试剂配制

17.2.1 乙酸锌溶液(1 mol/L):称取乙酸锌21.9 g,加3 mL冰乙酸,溶于水并稀释至100 mL,混匀。

17.2.2亚铁氰化钾溶液(0.25 mol/L) :称取亚铁氰化钾10.6 g,溶于水并稀释至100 mL,混匀。

17.2.3盐酸溶液(50%,体积分数):量取盐酸50 mL,缓慢加入50 mL水中,冷却后混匀。

17.2.4氢氧化钠溶液(40 g/L):称取氢氧化钠4.0 g,加水溶解后,冷却,用水稀释至100 mL,混匀。

17.2.5甲基红指示液(1 g/L):称取甲基红0.1 g,用95%乙醇溶解并稀释至100 mL,混匀。

17.2.6氢氧化钠溶液(200 g/L):称取氢氧化钠20.0 g,加水溶解后,冷却,用水稀释至100 mL,混匀。

17.2.7碱性酒石酸铜甲液:称取硫酸铜15.0 g和亚甲基蓝0.05 g,溶于水并稀释至1 000 mL,混匀。

17.2.8 碱性酒石酸铜乙液:称取酒石酸钾钠50.0 g和氢氧化钠75.0 g,溶于水中,再加入亚铁氰化钾4.0g,完全溶解后,用水稀释至1000mL,混匀,储存于橡胶塞玻璃瓶中。

17.3 标准品

  葡萄糖(C6H12O6CAS号:50-99-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

17.4标准溶液配制

  葡萄糖标准溶液(1.00 mg/mL):称取经过96℃±2℃烘箱中干燥2h的葡萄糖1 g(精确至0.001 g),加水溶解后转移至1000mL的容量瓶中,加入5mL盐酸,并用水定容至刻度。置于0~4℃密封保存。

 

18仪器和设备

18.1 分析天平:感量为1 mg10 mg

18.2恒温水浴装置。

18.3可调温电炉。

18.4 酸式滴定管:25 mL

18.5样品粉碎设备:高速粉碎机。

18.6 恒温干燥箱。

 

19分析步骤

19.1 样品前处理

19.1.1 试样制备

  取适量有代表性的样品,饮料等液态均匀样品直接摇匀;非均匀的样品需匀浆或粉碎均匀;冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀,必要时可采用30~40℃水浴加热搅拌;酱类等可以采用研磨或者均质混匀;巧克力采用50~60℃水浴中加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。

19.1.2试样处理

19.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样

  称取试样2.5 g~5 g(精确至0.001 g)100 mL烧杯中,加入约50 mL 50~60℃热水搅拌溶

解,再缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,混匀,放冷,转移至250 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置30 min 用滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。

19.1.2.2含淀粉试样

  称取粉碎或混匀后的试样10g~20 g(精确至0.001 g),置于烧杯中,加入约200 mL水,在45℃水浴中加热1 h,并振摇,冷却后转移至250 mL容量瓶中并定容,混匀,静置,沉淀。吸取200 mL上清液于另一250 mL容量瓶中,缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,用水定容至刻度,混匀,静置30min,用滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。

19.1.2.3含气体和酒精试样

  称取混匀后的试样100 g(精确至0.01 g),置于蒸发皿中,用氢氧化钠溶液(40 g/L)中和至中性,在水浴上微热搅拌去除气体和酒精,待冷却后移至250 mL容量瓶中,缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,用水定容至刻度,混匀,静置30min,用滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。

19.1.2.4 其他试样

  称取粉碎或混匀后的固体试样2.5g~5 g(精确至0.001 g)或液体试样5 g~25 g(精确至0.001 g)

置于烧杯中,加入约50 mL水,缓慢加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液,搅拌混匀转移至250 mL容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置30 min,用滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。

19.2酸水解

  吸取2份试样处理液各50.0 mL,分别置于100 mL容量瓶中。

19.2.1转化前:1 份用水定容至刻度,混匀。

19.2.2转化后:1 份加5 mL盐酸溶液,在68~70℃水浴中加热15 min,冷却后加2滴甲基红指示液,用氢氧化钠溶液(200 g/L)中和至中性,用水定容至刻度,混匀。

19.3标定碱性酒石酸铜溶液

  吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液和5.0 mL碱性酒石酸铜乙液于150 mL锥形瓶中,加入10 mL水,加2~4粒玻璃珠,从滴定管中加约9 mL葡萄糖标准溶液,控制在2 min内加热至沸,趁热以1/2 s的速度滴加葡萄糖标准溶液,直至溶液蓝色刚好褪尽为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液总体积,同时平行操作3份,取其平均值,计算每10 mL碱性酒石酸铜溶液(碱性酒石酸甲、乙液各5 mL)相当于葡萄糖的质量A(mg)

  注:也可以按上述方法标定4mL~20mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)来适应试样中还原糖的浓度变化。

19.4试样溶液的测定

19.4.1 预测滴定:吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液和5.0 mL碱性酒石酸铜乙液于150 mL锥形瓶中,加入10 mL蒸馏水,加2~4粒玻璃珠,置于电炉.上加热,使其在2 min内沸腾,保持沸腾状态15 s,滴入转化前样液(19.2.1)或转化后样液(19.2.2)至溶液蓝色刚好褪尽为终点,读取所用样液的体积。

19.4.2 精确滴定:吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液和5.0 mL碱性酒石酸铜乙液于150 mL锥形瓶中,加入10mL蒸馏水,加2~4粒玻璃珠,从滴定管中放出比预测滴定(19.4.1)预测体积少1mL的样液,置于电炉上,使其在2min内沸腾,维持沸腾状态2min,以1/2s的速度徐徐滴入样液,至溶液蓝色刚好褪尽为终点,记录样液消耗的体积(V)

  注:当样液还原糖浓度过低时,可以采用反滴定的方式进行测定。吸取5.00 mL碱性酒石酸铜甲液及5.00 mL碱性酒石酸铜乙液至锥形瓶中,直接加入10.0 mL样液,免去加水10 mL,再用葡萄糖标准溶液滴定至终点,记录消耗的体积。消耗体积与标定时消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于10 mL样液中所含葡萄糖的量A1(mg)

 

20分析结果的表述

20.1还原糖的含量

试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量按公式(3)计算。

image.png

式中:

R——试样中还原糖(以葡萄糖计)的质量分数,单位为克每百克(g/100 g)

A——碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg)

m——试样的称样量,单位为克(g)

50——酸水解(19.2)中吸取样液体积,单位为毫升(mL)

250——试样处理(19.1)中定容体积,单位为毫升(mL)

V——滴定时消耗样液体积,单位为毫升(mL)

100——酸水解(19.2)中定容体积,单位为毫升(mL)

1 000——换算系数;

F——当使用19.1.2.2步骤时,F= 1.25;其他步骤时,F=1

100——换算系数。

  采用反滴定方式测定时,试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量按公式(4)计算。

image.png

式中:

R——试样中还原糖(以葡萄糖计)的质量分数,单位为克每百克(g/100 g)

A1——标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖标准溶液的体积与加入

10mL样液后消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg)

m——试样的称样量,单位为克(g)

50——酸水解(19.2)中吸取样液体积,单位为毫升(mL)

250——试样处理(19.1)中定容体积,单位为毫升(mL)

10——直接加入的样液体积,单位为毫升(mL)

100——酸水解(19.2)中定容体积,单位为毫升(mL)

1 000——换算系数;

F——当使用19.1.2.2步骤时,F=1.25;其他步骤时,F=1

100——换算系数。

20.2蔗糖的含量

试样中蔗糖的含量按公式(5)计算。

image.png

式中:

X——试样中蔗糖的质量分数,单位为克每百克(g/100 g)

R2——转化后还原糖(以葡萄糖计)的质量分数,单位为克每百克(g/100g)

R1——转化前还原糖(以葡萄糖计)的质量分数,单位为克每百克(g/100g)

0.95——还原糖(以葡萄糖计)换算为蔗糖的系数。

蔗糖含量≥10 g/100g时,计算结果保留3位有效数字;蔗糖含量<10 g/100 g时,计算结果保留2位有效数字。

 

21精密度

  在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

 

第四法 莱因-埃农氏法

 

22 原理

  试样除去蛋白质后,在加热条件下,以亚甲基蓝为指示剂,直接滴定已标定过的费林氏液,根据样液消耗的体积,计算乳糖含量。果糖、葡萄糖、麦芽糖和低聚半乳糖等会对乳糖的测定产生干扰。

23试剂和材料

  除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。

23.1试剂

23.1.1乙酸铅[Pb(CH3COO)2·3H2O]

23.1.2草酸钾(K2C2O4·H2O)

23.1.3磷酸氢二钠(Na2HPO4)

23.1.4硫酸铜(CuSO4·5H2O)

23.1.5浓硫酸(H2SO4) 98%

23.1.6酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O)

23.1.7氢氧化钠(NaOH)

23.1.8亚甲基蓝(C16 H18ClN3S·3H2O):指示剂。

23.2试剂配制

23.2.1乙酸铅溶液(200 g/L):称取200 g乙酸铅,用水稀释至1 000 mL,混匀。

23.2.2草酸钾-磷酸氢二钠溶液:称取草酸钾30 g,磷酸氢二钠70 g,用水稀释至1 000 mL,混匀。

23.2.3亚甲基蓝溶液(10 g/L):称取1 g亚甲基蓝于100 mL水中,混匀。

23.2.4费林氏液(甲液和乙液)

23.2.4.1甲液:称取34.639 g硫酸铜,溶于水中,加入0.5 mL浓硫酸,加水至500 mL,混匀。

23.2.4.2乙液:称取173 g酒石酸钾钠及50 g氢氧化钠溶解于水中,稀释至500 mL,混匀,静置2 d后过滤。

23.3标准品

23.3.1乳糖(C12H22O11CAS号:63-42-3):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

24仪器和设备

24.1天平:感量为 0.1 mg

24.2可调温电炉。

24.3酸式滴定管:50 mL

24.4恒温干燥箱。

 

25分析步骤

25.1费林氏液的标定

25.1.1称取经过 96℃±2℃烘箱中干燥2 h的乳糖约0.75 g(精确至0.1 mg),用水溶解并定容至250 mL。将此乳糖溶液注入一个50 mL滴定管中,待滴定。

25.1.2预测滴定:吸取 10 mL费林氏液(甲、乙液各5 mL)250 mL三角烧瓶中。加入20 mL蒸馏水,放入几粒玻璃珠,从滴定管中放出15 mL样液于三角瓶中,置于电炉上加热,使其在2 min内沸腾,保持沸腾状态15s,加入3滴亚甲基蓝溶液,继续滴入样液至溶液蓝色完全褪尽为止,读取所用样液的体积。

25.1.3精确滴定:另取 10 mL费林氏液(甲、乙液各5 mL)250 mL三角烧瓶中,再加入20 mL蒸馏水,放入几粒玻璃珠,加入比预滴定量少0.5 mL~1.0 mL的样液,置于电炉上,使其在2 min内沸腾,维持沸腾状态2 min,加入3滴亚甲基蓝溶液,以1/2s的速度徐徐滴入样液,溶液蓝色完全褪尽即为终点,记录消耗样液的体积。

25.1.4费林氏液的乳糖校正值(f )按公式(6)和公式(7)计算。

image.png

式中:

A——实测乳糖数,单位为毫克(mg)

V1——滴定时消耗乳糖溶液的体积,单位为毫升(mL)

m1——称取乳糖的质量,单位为克(g)

f——费林氏液的乳糖校正值;

AL——由乳糖溶液滴定毫升数查表3所得的乳糖数,单位为毫克(mg)

image.png

image.png

25.2乳糖的测定

25.2.1试样处理

  称取婴幼儿食品或脱脂粉2 g、全脂加糖粉或全脂粉2.5g、乳清粉1 g,精确至0.1 mg,置于烧杯中,用约100 mL水溶解并分数次洗入250 mL容量瓶中,徐徐加入4 mL乙酸铅溶液和4 mL草酸钾-磷酸氢二钠溶液,并摇动容量瓶,用水定容至刻度,混匀,静置数分钟,用干燥滤纸过滤,弃去最初25 mL滤液,取后续滤液待滴定。

25.2.2滴定

25.2.2.1预测滴定:操作同25.1.2

25.2.2.2精确滴定:操作同25.1.3

 

26分析结果的表述

试样中乳糖的含量X按公式(8)计算。

image.png

式中:

X——试样中乳糖的质量分数,单位为克每百克(g/100 g)

F——由消耗样液的毫升数查表3所得乳糖数,单位为毫克( mg)

f——费林氏液乳糖校正值;

V——滴定消耗样液量,单位为毫升(mL)

m——试样的质量,单位为克(g)

结果保留3位有效数字。

  注:若试样中蔗糖与乳糖之比超过31时,则计算乳糖时应在滴定量中加上表4中的校正值数后再查表3

 

27精密度

  在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的1.5%


版权所有©2024 广州信谱徕科学仪器有限公司 All Rights Reserved    备案号:粤ICP备13051513号    sitemap.xml    管理登陆    技术支持:化工仪器网