中华人民共和国国家标准
GB 31658.24-2022
食品安全国家标准
动物性食品中赛杜霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-
Determination of Semduramicin residues in animal derived food by
Liquid chromatography-tandem mass spectrometric method
1范围
本文件规定了动物性食品中赛杜霉素的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于鸡肌肉和肝脏组织中赛杜霉素残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定 义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的赛杜霉素用乙腈提取，固相萃取柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法检测，外标法定量。
5试剂和材料
除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5. 1.1 乙睛(CH3CN)：色谱纯。
5.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。
5.1.3甲酸( HCOOH)：色谱纯。
5. 1.4 二氯甲烷(CH2Cl2) 。
5.2溶液配制
5.2.1 50%乙腈溶液：取乙腈50 mL，用水溶解并稀释至100 mL，混匀。
5.2.2 80%二氯甲烷甲醇溶液：取二氯甲烷80 mL，加甲醇20 mL，混匀。
5.2.3流动相 A：取水100 mL，加甲酸0.1 mL，混匀。
5.2.4 流动相B：取乙腈100 mL，加甲酸0.1 mL，混匀。
5.3标准品
赛杜霉素(Semduramicin，分子式：C45H75O16，CAS号：113378-31-7)，含量≥94.3%。
5.4标准溶液制备
5.4.1标准储备液：精密称取相当于赛杜霉素10 mg的对照品，用乙腈溶解并定容于10 mL容量瓶中，配制成浓度为1 mg/mL的赛杜霉素标准储备液。-18℃以下保存，有效期3个月。
5.4.2 10μg/mL赛杜霉素标准工作液：精密量取标准储备液0.1mL于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液稀释至刻度，配制成10 μg/mL赛杜霉素标准工作液。2℃~8℃保存，有效期1个月。
5.4.3 1μg/mL赛杜霉素标准工作液：精密量取10μg/mL赛杜霉素标准工作液1.0mL于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液稀释至刻度，配制成1μg/mL赛杜霉素标准工作液。2℃~8℃保存，有效期1个月。
5.5材料
5.5.1固相萃取柱：石墨化碳黑氨基固相萃取柱：500mg/6mL。
5.5.2 滤膜：有机相，0.22 μm。
6仪器和设备
6.1超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
6.2 分析天平：感量0.01 g和0.00001 g。
6.3 高速离心机。
6.4涡旋混合器。
6.5 水平振荡器。
6.6均质机。
6.7 固相萃取装置。
6.8 氮吹仪。
7试样的制备与保存
7.1试样制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并均质。
a) 取均质后的供试样品，作为供试试样；
b) 取均质后的空白样品，作为空白试样；
c)取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。
7.2 试样保存
-20℃以下保存。
8测定步骤
8.1提取
取试料2 g(准确至±0.05 g)，于50 mL离心管内，加乙腈12 mL，涡旋混匀1 min，振荡10 min，5 0000 r/min离心5 min(肝脏8 000 r/min)，取上清液，加乙腈12 mL重复提取一次，合并两次提取液，备用。
8.2 净化
萃取柱依次用二氯甲烷5 mL和乙腈5 mL活化，取备用液，过柱，控制流速2 mL/min~3 mL/ min。抽干10 min，用80%二氯甲烷甲醇溶液6 mL洗脱，收集洗脱液，40℃水浴中氮气吹干。用50%乙腈水溶液溶解并稀释至2.0mL，过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。
8.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取1 μg/mL赛杜霉素标准工作液20 μL、40 μL和100 μL，10 μg/mL赛杜霉素标准工作液20μL、100μL和200μL，分别加入6份按提取和净化处理的空白试料残渣中，用50%乙腈水溶液溶解并稀释至2 mL，配制成浓度为10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL和1 000 ng/ mL的基质匹配系列标准溶液，4℃ 10000r/min离心10min，取上清液，滤膜过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。以测得特征离子色谱峰面积为纵坐标，基质匹配标准溶液浓度为橫坐标，绘制基质匹配标准曲线。求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1色谱参考条件
a)色谱柱：C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，或相当者；
b)流动相：A为0.1%甲酸溶液，B为0. 1%甲酸乙腈溶液；
c)梯度洗脱：梯度洗脱程序见表1；
d)流速：0.3 mL/min；
e)柱温：30℃；
f)进样量：10 μL。
8.4.2 质谱参考条件
a)离子源：电喷雾离子源；
b)扫描方式：正离子扫描；
c)检测方式：多反应监测；
d)电离电压：3.0 kV；
e)源温：100℃；
f)雾化温度：350℃；
g)锥孔气流速：20 L/h；
h)雾化气流速：600 L/h；
i)测试药物定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值见表2。
8.5测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，外标法计算。基质匹配标准溶液及试料溶液中赛杜霉素的特征离子质量色谱峰面积均应在仪器检测的线性范围之内。试样溶液中的相对离子丰度与基质匹配标准溶液中的相对离子丰度相比，符合表3的要求。标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。
8.6 空白试验
取空白试料，除不加药物外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
9结果计算和表述
试样中赛杜霉素的残留量按公式(1)计算。
式中：
X——试样中赛杜霉素残留量的数值，单位为微克每千克(μg/kg)；
Cs——标准溶液中赛杜霉素浓度的数值，单位为微克每升(μg/L)；
A——试样溶液中赛杜霉素的峰面积；
As——标准溶液中赛杜霉素的峰面积；
V——试样溶液浓缩后定容体积的数值，单位为毫升(mL)；
m——试样质量的数值，单位为克(g)。
10检测方法灵敏度、准确度和精密度
10.1灵敏度
本方法的检测限为3 μg/kg，定量限为10 μg/kg。
10. 2准确度
本方法在10 μg/kg~400 μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~ 120%。
10.3 精密度
本方法批内相对标准偏差≤20%，批间相对标准偏差≤20%。
