GB 1886.355-2022 食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷

更新时间:2023-12-06      点击次数:340

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中华人民共和国国家标准

GB 1886.355-2022

食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷

 

前言

  本标准代替GB 8270-2014《食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷》。

  本标准与GB 8270-2014相比,主要变化如下:

  ——修改了标准范围;

  ——修改了分子式、结构式和相对分子质量等相关内容;

  ——修改了甜菊糖苷含量(以干基计)的指标要求和检验方法;

  ——修改了“灼烧残渣"指标名称为“灰分";

  ——修改了“总砷(As)"指标名称为“砷(As)";

  ——增加了铅(Pb)、砷(As)的检验方法;

  ——将鉴别试验中pH的要求放入理化指标。

 

1范围

  本标准适用于以甜叶菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)叶为原料,经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。已知糖苷包括甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。

 

2分子式、结构式和相对分子质量

2.1 13种糖苷的分子式

甜菊苷:C38H60O18

瑞鲍迪苷AC44H70O23

瑞鲍迪苷BC38 H60O18

瑞鲍迪苷CC44H70O22

瑞鲍迪苷DC50H80O28

瑞鲍迪苷EC44H70O23

瑞鲍迪苷FC43H68O22

瑞鲍迪苷MC56H90O33

瑞鲍迪苷NC56H90O32

瑞鲍迪苷OC62H100O37

杜克苷AC38H60O17

甜茶苷:C32H50O13

甜菊双糖苷:C32H50O13

2.2 13种糖苷的结构式

image.png

  13种糖苷的化合物名称、R1位取代基和R2位取代基见表1。甜菊醇(R1=R2=H)为甜菊糖苷配基。

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2.3 13种糖苷的相对分子质量

甜菊苷:804.87(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷A967.01(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷B804.87(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷C951.01(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷D1 129.15(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷E967.01(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷F936. 99(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷M1 291.29(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷N1 275.29(2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷O1 437.44(2018年国际相对原子质量)

杜克苷A788.87(2018年国际相对原子质量)

甜茶苷:642.73(2018年国际相对原子质量)

甜菊双糖苷:642.73(2018年国际相对原子质量)

 

3技术要求

3.1 感官要求

  感官要求应符合表2的规定。

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3.2理化指标

  理化指标应符合表3的规定。

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附录A

检验方法

 

A.1 一般规定

  本标准所用试剂和水在未注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品在未注明其他要求时,均按GB/T 601GB/T 602GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。

 

A.2 鉴别试验

A.2.1甜菊糖苷色谱试验

  在甜菊糖苷含量试验中,试样溶液色谱图中13种糖苷的色谱峰应与混合标准品溶液相对应。

 

A.3 甜菊糖苷含量(以干基计)的测定

A.3.1试剂和材料

A.3.1.1乙腈:色谱纯。

A.3.1.2磷酸二氢钠:色谱纯。

A.3.1.3 磷酸:色谱纯。

A.3.1.4水:GB/T 6682规定的一级水。

A.3.1.5乙腈水溶液:乙腈和水的体积比为30 70

A.3.1.6磷酸钠缓冲液(pH 2.6):称取1.20 g磷酸二氢钠(NaH2PO4),溶于800 mL水中,用磷酸调节pH2.6

A.3.1.7 瑞鲍迪苷A标准品:瑞鲍迪苷A含量(质量分数,以干基计)99.0%

A.3.1.8瑞鲍迪苷 D标准品:瑞鲍迪苷D含量(质量分数,以干基计)95.0%

A.3.1.9其他11种糖苷标准品:甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷,或使用13种糖苷混合标准品。

A.3.2仪器和设备

  高效液相色谱仪:配备紫外检测器,或其他等效的检测器。

A.3.3 参考色谱条件

A.3.3.1色谱柱:C18反相色谱柱,250 mm×4.6 mm,粒径5 μm;或其他等效的色谱柱。

A.3.3.2流动相梯度洗脱条件(比例可根据实际情况调节):见表A.1

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A.3.3.3流动相流速:0.8 mL/min

A.3.3.4 检测波长:210 nm

A.3.3.5 进样量:2 μL~10 μL

A.3.3.6柱温:40℃。

 

A.3.4 分析步骤

A.3.4.1混合标准品溶液的制备

  分别称取适量瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷标准品(13种糖苷混合标准品),置于同一个容量瓶中,用乙腈水溶液完全溶解后定容,得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定13种糖苷的相对保留时间。

A.3.4.2标准溶液的制备

  分别称取5.0 mg10.0 mg20.0 mg25.0 mg的瑞鲍迪苷A标准品和2.5 mg5.0 mg10.0 mg12.5mg的瑞鲍迪苷D标准品,精确至0.1mg,分别置于25mL的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,分别得到浓度为200 mg/L400 mg/L800 mg/L1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L200 mg/L400 mg/L500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液。

A.3.4.3试样溶液的制备

  称取25.0 mg±5.0 mg试样(干基),精确至0.1 mg,置于50 mL的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,得到试样溶液。

A.3.5 测定

A.3.5.1标准曲线的绘制

  A.3.3参考色谱条件下,分别对200 mg/L400 mg/L800 mg/L1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L200 mg/L400 mg/L500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液进行色谱分析,记录各浓度标准溶液对应的峰面积值。以标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A或瑞鲍迪苷D的峰面积值为Y轴,以对应溶液浓度(mg/L)X轴,绘制标准曲线,分别得到瑞鲍迪苷A标准曲线和瑞鲍迪苷D标准曲线(强制过原点),从标准曲线上分别获得瑞鲍迪苷A线性函数斜率(Ka)和瑞鲍迪苷D线性函数斜率(Kd)

A.3.5.2含量测定

  A.3.3参考色谱条件下,分别对混合标准品溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图(见附录B)相比较,以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷的峰面积。

 

A.3.6 结果计算

  8种糖苷含量(以干基计)的质量分数w;按式(A.1)计算。

image.png

式中:

i——sabcfdarusb,分别对应甜菊苷瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷;

fi——i组分与瑞鲍迪苷A的式量比值:1.00(瑞鲍迪苷A)0.83(甜菊苷)0.83(瑞鲍迪苷B)

0.98(瑞鲍迪苷C)0.97(瑞鲍迪苷F)0.82(杜克苷A)0.66(甜茶苷)0.66(甜菊双糖苷)

Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值;

Ka—— A.3.5.1 中瑞鲍迪苷A线性函数斜率;

c——试样溶液的浓度,单位为毫克每升(mg/L)

5种糖苷含量(以干基计)的质量分数ωi按式(A.2)计算。

 image.png

式中:

i——demno,分别对应瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O

fi——i组分与瑞鲍迪苷D的式量比值:1.00(瑞鲍迪苷D)0.86(瑞鲍迪苷E)1.14(瑞鲍迪苷

M)1.13(瑞鲍迪苷N)1.27(瑞鲍迪苷O)

Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值;

Kd——A.3.5.1 中瑞鲍迪苷D线性函数斜率;

c——试样溶液的浓度,单位为毫克每升(mg/L)

由式(A.1)和式(A.2)计算得到13种组分的含量ωs、ωaωb、ωc、ωf、ωda、ωru、ωsb、ωd、ωe、ωm、ωn和ω0,取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。

 

A.4 pH的测定

A.4.1仪器和设备

  酸度计。

A.4.2试剂和材料

  称取1 g试样,溶于100 mL除去二氧化碳的水中,用酸度计测定试样溶液的pH

 

A.5 甲醇和乙醇的测定

A.5.1试剂和材料

A.5.1.1 甲醇:色谱纯。

A.5.1.2乙醇:色谱纯。

A.5.1.3水:GB/T 6682规定的一级水。

A.5.2仪器和设备

  气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)和顶空进样器。

A.5.3参考色谱条件

A.5.3.1色谱柱:键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱(柱长为30 m,柱内径为0.25 mm,膜厚度为0.25 μm),或其他等效的色谱柱。

A.5.3.2载气:氮气( 纯度≥99.99%)

A.5.3.3载气流量:5.0 mL/ min

A.5.3.4 柱温:40℃保持5 min,以10/min升温至120℃,保持2 min,最后以16/min升温至

200℃,保持5 min

A.5.3.5进样口温度:200℃。

A.5.3.6检测器温度:250℃。

A.5.3.7进样体积:1 mL

A.5.3.8分流比:1 50

A.5.4参考顶空条件

A.5.4.1顶空瓶温度:80℃。

A.5.4.2顶空瓶平衡时间:30 min

A.5.5分析步骤

A.5.5.1空白溶液的制备

  移取2 mL水,置于顶空瓶中,迅速压紧瓶盖,备用。

A.5.5.2标准溶液的制备

A.5.5.2.1 醇标准溶液的制备

  称取0.1 g甲醇,精确至0.001 g,用水稀释后转移至一个1 000 mL的容量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得100 mg/L的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为2.5 mg/L5 mg/L10 mg/L20 mg/L50 mg/L的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL,分别置于顶空瓶中,迅速压紧瓶盖,备用。

A.5.5.2.2乙醇标准 溶液的制备

  称取0.1 g乙醇,精确至0.001 g,用水稀释后转移至一个100 mL的容量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得1 000 mg/L的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50 mg/L100 mg/L200 mg/L500 mg/L750 mg/L的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL,分别置于顶空瓶中,迅速压紧瓶盖,备用。

A.5.5.3试样溶液的制备

  称取1.0g试样,精确至0.001 g,用水溶解后转移至-10 mL的容量瓶中,在室温下超声处理约3 min,加水稀释至刻度,摇匀。移取该溶液2 mL置于顶空瓶中,迅速压紧瓶盖,备用。

 

A.5.6 测定

  在参考操作条件A.5.3A.5.4下,分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定,记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为Y轴,以对应溶剂浓度(mg/L)X轴,绘制标准曲线,得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值,从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度(mg/L)

 

A.5.7结果计算

  试样中甲醇或乙醇的含量w,单位为毫克每千克(mg/kg) ,按式(A.3)计算。

image.png

式中:

c——从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度,单位为毫克每升(mg/L)

V——试样溶液的体积,单位为毫升(mL)

m——试样的质量,单位为克(g)


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