NY/T 2890-2016 稻米中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法

更新时间:2024-02-27      点击次数:263

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中华人民共和国农业行业标准

NY/T 2890-2016

稻米中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法

Determination of γ-aminobutyric acid in rice-HPLC

 

前言

  本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。

  本标准由农业部种植业管理司提出并归口。

  本标准起草单位:云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试中心(昆明)。

  本标准主要起草人:汪禄样、黎其万、邵金良、刘兴勇、王丽、刘宏程、杨东顺、樊建麟。

 

1范围

  本标准规定了稻米中γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法。

  本标准适用于稻米中γ-氨基丁酸含量的测定。

  本方法检出限为0.10 mg/kg,定量限为0.20 mg/kg

 

2规范性引用文件

  下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

  GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

 

3原理

  试样经乙醇-水溶液提取,经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(DABS-Cl)衍生,用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,外标法定量。

 

4试剂与材料

  除非另有规定,使用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 中规定的一级水。

4.1无水乙醇(C2HOH):优级纯。

4.2乙腈(CH3CN):色谱纯。

4.3提取溶液:无水乙醇+=4+1V+V),取 400 mL无水乙醇和100 mL水混匀。

4.4 碳酸氢钠溶液:称取0.40 g碳酸氢钠,用水溶解并稀释至10 mL,现配现用。

4.5 4-二甲基胺基偶氨苯-4-磺酰氯溶液:称取4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯20.0mg,用乙腈溶解并稀释至10 mL,现配现用。

4.6三水合乙酸钠溶液:称取3.40 g三水合乙酸钠,用水溶解并稀释至500 mL,经微孔滤膜(4.10)过滤。

4.7 γ-氨基丁酸(γ-aminobutyrie acid GABA):CAS 56-12-2,纯度≥99.9%

4.8 标准储备溶液:精确称取γ-氨基丁酸标准品10.0 mg,用乙腈溶液溶解并定容至10 mL,即为1 000 mg/L的标准储备液,于-18℃下,贮存于密闭的棕色玻璃瓶中,保存有效期为3个月。

4.9标准使用液:在使用中将标准储备溶液逐级稀释成2.0mg/L5.0mg/L10.0mg/L50.0mg/L

100.0 mg/L或其他浓度的γ-氨基丁酸标准使用液,现配现用。

4.10滤膜:0.45μm,水相滤膜。

 

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2组织捣碎机:转速 1 0000 r/min

5.3分析天平:感量为0.01 mg0.01g

5.4振荡水浴锅。

5.5 超声波清洗器。

5.6 旋涡混匀器。

5.7 离心机:最大转速10 000 r/ min

 

6分析步骤

6.1试样制备

  样品经混匀后,缩分至约50g,经研磨至全部通过孔径0.25mm60目)筛的试样,混匀,装入密闭容器中,室温下保存。

6.2提取

  称取1.0g样品于50 mL离心管中,加入10 mL提取溶液(4.3),超声提取30 min后,在旋涡混匀器上振荡2min,静置5min,于5000r/min离心5min,将上清液转入25mL容量瓶中,样品残渣再用10 mL提取溶液(4.3)提取1次,合并2只提取液,用提取液(4.3)定容至25 mL,摇匀待衍生化。

6.3 衍生化

  准确吸取1 mL试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中,加入0.20mL 碳酸氢钠溶液(4.4)和0.40mL 4-二甲基胺基偶氨苯-4-磺酰氯衍生试剂(4.5),混匀后在70℃水浴中街生反应20min,用微孔滤膜(4.10)过滤,待测。

6.4 测定

6.4.1 色谱参考条件

色谱柱: C18250m×4.6 mm5μm;或与之性能相当者;

检测波长:436 nm

柱温:30℃;

进样量:10μL

流动相:乙腈(4.2)十三水合乙酸钠溶液(4.6)(35+65);

流速:1.0 mL/min

6.4.2 色谱分析

  分别将标准溶液和试样溶液,注入液相色谱仪中,以保留时间定性,以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。色谱图参见附录A

 

7结果计算

试样中γ-氨基丁酸含量按式(1)计算。

 

image.png

 

式中:

ω——试样中γ-氨基丁酸含量,单位为毫克/千克(mg/kg);

ρ——样液中γ-氨基丁酸测定质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);

V——一定容体积,单位为毫升(mL);

m——试样质量,单位为克(g);

测定结果取两次测定的算术平均值,计算结果保留三位有效数字。

 

8精密度

  在重复性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。在再现性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%


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