中华人民共和国国家标准
农业部1077号公告-1-2008
水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Simultaneou determination of 17 sulfonamides and 15 quinolones residues in aquatic products by LC -MS/MS method
前言
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。
本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心。
本标准主要起草人：冷凯良、王志杰、孙伟红、翟毓秀。
1范围
本标准规定了水产品中17 种磺胺（SAs）及15种喹诺酮（QNs）类药物残留最的液相色谱-串联质谱测定法。
本标准适用于水产品中17种磺胺（磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氯嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹噁啉）和15种喹诺酮（氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、丹诺沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、噁喹酸、氟甲喹、培氟沙星）残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于木标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
SC/T 3016水产品抽样方法
3原理
样品采用酸化乙腈提取并依缩，经正己烷液-液萃取净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
4试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。
4.1水：试验用水符合 GB/T 6682 一级水指标。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4醋酸铵：色谱纯。
4.5甲酸：色谱纯。
4.6无水硫酸钠：650℃灼烧 4 h，冷却后贮于密闭容器中备用。
4.7酸化乙腈：99 mL乙腈中加入1 mL甲酸。
4.8 0. 1%甲酸溶液（含5.0 mmol/L醋酸铁）：取0.19g醋酸铵.0.5 mL甲酸，用水滨解并定容至500mL。
4.9 20%甲醇溶液：取甲醇20mL用水稀释至100mL。
4.10标准储备液：1mg/mL，分别称取氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、丹诺沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、噁喹酸、氟甲喹、培氟沙星对照品约10mg，于各自的10mL量瓶中，加甲酸0.2mL，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，避光-18℃下保存，有效期6个月。
分别称取磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺肢甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹噁啉对照品约10mg，于各自的10mL量瓶中，用甲醉溶解并稀释至刻度。配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，避光- 18℃下保存，有效期6个月。
4. 11氘代同位紧内标标准储备液；0.5 mg/mL，分别称取氘代磺胺邻二甲氧嘧啶、氘代磺胺间二甲氧嘧啶内标对照品约5mg，于各自的10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为0.5mg/mL的同位紫内标标准储备液.避光-18℃下保存，有效期6个月。
分别称取氘代诺氟沙星、氘代环丙沙星、氘代恩诺沙星内标对照品约5mg，于各自的10mL量瓶中，加甲酸0.2 mL，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为0. 5 mg/mL的同位素内标标准储备液，避光-18℃下保存，有效期6个月。
4.12混合标准工作液：准确吸收各磺胺和喹诺酮标准储备液适量，用甲醇稀释分别配成1.0μg/mL和0.1μg/ mL混合标准工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1个月。
4.13混合内标标准工作液：准确吸取各氘代同位素内标标准储备液适量，用甲醇稀释配成1.0μg/mL的混合内标标准工作液，避光4℃下保存，有效期1个月。
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谮仪：配备电喷雾离子源（ESI）。
5.2均质机。
5.3分析天平：感量0. 0001 g。
5.4 天平：感量0.01 g。
5.5涡旋混合器。
5.6超声波清洗仪。
5.7离心机：4 000 r/min。
5.8旋转蒸发仪。
6测定步骤
6.1样品处理
6.1.1 试样制备
按SC/T 3016的规定执行。
6.1.2 提取净化
称取（5±0.02）g试样，于50mL具塞离心管中，准确加入50μL混合内标标准工作液（4.13），涡旋混合30s，避光放置10min。加入10g无水硫酸钠，涡旋混匀，再加入20mL酸化乙腈（4.7），涡旋混合1min，超声波提收10min。4000r/min离心5min，取上清液于50mL梨形瓶中。残渣中加20mL酸化乙腈（4.7），重复提取一次，合并两次提取液，于40℃水浴旋转蒸发至干。加1.0 mL甲醇溶液（4.9） 涡旋溶解残留物，再加入2.0mL正己烷涡旋混合30s，转入5mL具塞离心管中，以4000r/min离心5min，弃上层液，收下层清液，过0.2μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。
6.2标准工作曲线制作
准确量取适量混合标准工作液（4.12），用甲醇溶液（4.9）稀释成浓度分别为0.010μg/mL、0.020μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL和0.200μg/ml的混合标准工作液，供液相色谱-串联质谱仪测定。
6.3 测定
6.3.1色谱条件
色谱柱：C18柱，MGII，2. 1 mm×150 mm，5μm；或相当者；
柱温：室温；
进样量：10 μL；
流动相：A为0. 1%甲酸溶液（含5.0 mmol/L醋酸铵），B为甲醇，C为乙腈；梯度洗脱程序见表1。
6.3.2质谱条件
离子化模式：电喷雾离子源（ESI） ，正离子模式；
喷雾电压：4 500 V；
雾化气压力：12 L/min；
辅助气流量：2 L/min；
离子传输管温度：350℃；
源内碰撞诱导解离电压：10 V；
扫描模式：选择反应监测（SRM） ，选择反应监测母离子、子离子和碰撞能最见表2；
Q1半峰宽：0.7 Da；
Q3半峰宽：0.7 Da；
碰撞气压力：氩气，1.5 mTorr。
6.3.3定性依据
在同样测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准品相对丰度一致。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3要求。标准溶液、空白样品及添加样品的离子流图参见附录A。
6.3.4定量测定
按6.3.1和6.3.2仪器的色谐、质谮条件，将混合标准工作液和样品液等体积进样测定，氟罗沙星，氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星和诺氟沙星以氘代诺氟沙星为内标；洛美沙星、奥比沙星、丹诺沙星、双氟沙星和环丙沙星以氛代环丙沙星为内标；恩诺沙星、沙拉沙星、司帕沙星、噁喹酸和氟甲喹以氘代恩诺沙星为内标；磺胺二甲异噁唑、磺胺喹噁啉和磺胺间二甲氧嘧啶以氘代磺胺间二甲氧嘧为内标；磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶和磺胺氯哒嗪以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶为内标，内标法定量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片（见表2）。
6.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
7结果计算
样品中磺胺及喹诺酮类药物残留量按式（1）计算，计算结果需扣除空白值，保留三位有效数字。
式中：
Xi——样品中磺胺及喹诺酮类药物残留的含量，单位为微克每下克（μg/kg）；
C——样品制备液中磺股及喹诺關类药物残留的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
V——最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品质量，单位为克（g）。
8方法灵敏度、准确度和精密度
8.1 灵敏度
本方法的最低检出限均为1.0 μg/kg ，最低定量限均为2.0 μg/kg。
8.2准确度
本方法添加依度为2.0 μg/kg~ 10.0 μg/kg时，回收率为70%~120%。
8.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15% ，批间相对标准偏差≤15%。
