农业部783号公告-1-2006 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定

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中华人民共和国国家标准

农业部783号公告-1-2006

水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Determination of nitrofuran metabolic residues in aquatic products

by LC-MS/MS method

 

前言

  本标准的附录A、附录B、附最C和附录D均为资料性附录。

  本标准由中华人民共和国农业部提出。

  本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。

  本标准起草单位:国家水产品质量监督检验中心。

  本标准主要起草人:耿霞、冷凯良、翟毓秀、李兆新、刘莹。

 

1范围

  本标准规定了水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的液相色谱-串联质谱测定法。

  本标准适用于水产品中呋哺唑酮的代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮(AOZ)、呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮(AMOZ)、呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM)和呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD)残留量的测定。

 

2规范性引用文件

  下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

  GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

 

3原理

  样品肌肉组织中残留的硝基呋喃类蛋白结合代谢物在酸性条件下水解,用2-硝基苯甲醛衍生化,经乙酸乙酯液-液萃取净化后,液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。

 

4试剂

  除另有规定外,所用试剂均为分析纯,试验用水符合GB/T 6682一级水指标。

4.1 甲醇:色谱纯。

4.2醋酸铵:色谱纯。

4.3二甲亚砜。

4.4 2-硝基苯甲醛:色谱纯。

4.5磷酸氢二钾。

4.6 乙酸乙酯。

4.7 0.002 mol/L醋酸铵溶液:称取0.15 g醋酸铵,用水溶解并定容至1 000 mL

4.8 甲醇溶液:甲醇:水= 595v/v)。

4.9 0.2 mol/L盐酸溶液:量取浓盐酸(ρ=1.19 g/mL0.6 mL,用水稀释至100 mL

4.10 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛溶液:称取0.0378g 2-硝基苯甲醛,溶于5mL二甲亚砜中,现用现配。

4.11磷酸氢二钾溶液:1.0mol/L。称取87.1 g磷酸氢二钾,溶解于500 mL水中。

4.12标准物质AOZAMOZSEM·HClAHD·HCl:纯度≥98%

4.13同位素内标溶液:AOZ-D4AMOZ-D5AHD-13C3,和SEM·HCl-13C-15N2,浓度均为100μg/mL

4.14 AOZ标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取10.0 mg+0.1 mg AOZ,用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中,4℃冷藏保存。

4.15 AMOZ标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取10.0 mg±0.1 mg AMOZ,用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中,4℃冷藏保存。

4.16 SEM标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取14.9 mg±0.1 mg SEM·HCl,用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中,4℃冷藏保存。

4.17 AHD标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取13.2 mg±0.1 mg AHD-HC1,用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中,4℃冷藏保存。

4.18混合标准工作溶液:准确吸取AOZAMOZSEMAHD标准储备溶液,用水逐级稀释配成100ng/mL10 ng/mL混合溶液,4℃冷藏保存。

4.19混合内标工作溶液:准确吸取同位素内标溶液(4.13 ,用水逐级稀释配成100 ng/mL混合溶液,4℃冷藏保存。

 

5仪器和设备

5.1液相色谱串联四极杆质谱仪:配备电喷雾(ES1)离子源。

5.2均质机。

5.3分析天平:感量 0.0001 g

5.4 分析天平:感量0.01 g

5.5涡旋混合器。

5.6恒温水浴振荡器:可控温 37℃±1℃。

5.7离心机:4 000 r/min

5.8氮气吹干仪。

 

6测定步骤

6.1样晶处理

6.1.1制样

  取水产品可食部分,切成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块,充分匀浆,备用。

6.1.2水解和衍生化

  称取样品2.0g(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入0.05 mL混合内标工作溶液(4.19)涡旋混合50s,再加入5 mL盐酸溶液(4.9)和0.15 mL 2-硝基苯甲醛溶液(4.10),涡旋振荡50s后,置于恒温水浴振荡器中37℃避光振荡16 h

6.1.3提取净化

  取出离心管冷却至室温,加入3 mL~5 mL磷酸氢二钾溶液(4.11),调节pH7.0~7.5,加入4 mL乙酸乙酯,涡旋振荡50 s4 000 r/min离心5 min,取上层清液转移至10 mL玻璃商心管中;再加入4 mL乙酸乙酯重复上述操作,合并上清液于40℃下氮气吹干。准确加入1.0 mL甲醇溶液(4.8)涡旋振荡溶解残留物,过0.45μm滤膜,待测。

6.2标准工作曲线制作

  分别准碗移取40 ng/mL混合标准工作溶液(4.180.010 mL0.025 mL0.050 mL0.10 mL100ng/mL混合标准工作溶液(4.180.025 mL0.050 mL0.10 mL750 mL离心管中,除不加样品外,按6.1.26.1.3步骤操作,按6.3测定。

6.3 测定

6.3.1色谱条件

色谱柱:C18 100 mm×2.1 mmi.d.),5μm,或其他性能相当的色谱柱;

柱温:室温;

进样量:20 μL

流动相:A.0.002 mol/L醋酸铵溶液,B.甲醇;梯度洗脱程序见表1,平衡时间为5min

                                              image.png

6.3.2质谱条件

离子化模式:大气压电喷雾离子源(ESI),正离子模式;

喷雾电压:4 100 v

雾化气压力:35 psi

辅助气流量:3 L/min

离子传输毛细管温度:350

源内碰撞诱导解离电压:10v

扫描模式:选择反应监测(SRM),选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2

Q1半峰寬:0.7Da

Q3半峰宽:0.7 Da

碰撞气压力:氢气,1.5 mTorr

image.png

6.3.3定性依据:

  在同样测试条件下,阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对标准偏差在±5%以内,且检测到的离子的相对丰度,用与最强离子(基峰)的强度百分比表示,应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致,校正标准可以是校正标准品溶液,也可以是添加了标准物质的样品。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3要求:

image.png

6.3.4定量测定

  6.3.16.3.2设定仪器条件,待仪器稳定后,将混合标准工作液和样品制备液等体积进样测定,内标法定量,定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片(表2)。

6.4空白试验

  除不加试样外,均按上述测定条件和步骤进行。

 

7结果计算

测定结果由仪器工作站按内标法自动计算。

样品中硝基呋喃类代谢物残留量按式(1)计算。计算结果需扣除空白值。

image.png

式中:

X——样品中硝基呋喃类代谢物的含量,单位为微克每千克(μg/kg);

Ci——样品制备液中硝基呋喃类代谢物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);

V——最终定容体积, 单位为毫升(mL);

m——样品质量, 单位为克(g)。

 

8方法灵敏度

  四种硝基呋喃代谢物的检测限为0.25 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg

 

9方法回收率

  本方法添加浓度为0.25 μg/kg~ 5.0 μg/kg时回收率为75%~110%

 

10方法精密度

  本方法的批内相对标准偏差小于10% ,批间相对标准偏差小于15%


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