Waters Styragel色谱柱的保养和维护
本章介绍了：
■ 故障排查
■ 色谱柱保存
■ 效率测试
a.故障排查
表3描述了具体问题、原因和纠正措施。
问题 | 原因 | 纠正措施 |
系统操作压力增加 | 入口过滤器滤芯（仅第一根色谱柱）被颗粒堵塞。 进样器和泵密封件脱落。 | 更换入口过滤器滤芯。 安装Styragel预柱。 在泵与第一根色谱柱之间安装在线过滤器。 |
分离度下降，色谱峰展宽， 塔板数减少 | 管件堵塞 | 更换管件 |
过滤器滤芯部分堵塞 | 更换或清洗入口和/或出口过滤器滤芯 | |
进样器故障 | 维修进样器 | |
平衡不足 | 继续平衡 | |
色谱柱损坏 | 更换色谱柱 |
表3. 色谱柱故障排查。
b. 色谱柱保存
如果您打算在24小时内再次使用色谱柱，则无需进行特殊的保存。但是，应确保色谱柱不得变干。如果储存时间较长，请将色谱柱放回其包装盒中，并塞紧端塞进行储存。在没有溶剂流动的情况下，请勿将色谱柱置于高温环境中。
为获得最长的色谱柱寿命，应避免温度循环变化。色谱柱未使用时，应维持在运行温度，并将流速降低至0.1 mL/min。
要重启色谱柱，将流速维持在0.1 mL/min，并且（如果适用）在10小时内将温度逐渐升高。然后将流速设置为所需的操作流速。
c. 效率测试
沃特世色谱柱经过测试，符合我们的指标。柱效随下列条件不同可能略有变动：
■ 所用设备的类型和条件
■ 样品性质
■ 仪器设置
执行效率测试。为了测试系统及系统中的每根色谱柱，须执行以下两种测试：
■ 仪器谱带展宽测试
■ 柱效测试
何时执行效率测试
每次增加色谱柱或改动系统时均需执行效率测试。在系统使用过程中，应定期执行效率测试。
如果正常操作色谱柱的过程中发生问题，请重复初始效率测试的步骤并对比结果。在非串联条件下执行柱效测试，可用于监测仪器谱带展宽现象。谱带展宽过大的问题需在色谱柱安装之前得到解决。
1）测试仪器谱带展宽
测试步骤
合理操作的系统的谱带展宽应当小于150 μL（对于溶剂高效色谱柱，谱带展宽应小于75 μL）。测定系统谱带展宽的方法：
1. 从系统中取出色谱柱。
2. 用零死体积接头连接入口与出口管件。
3. 将流速设置为1.0 mL/min。
4. 使用较快的纸速可获得易于测量峰宽的色谱峰。如果使用的是数据系统，请将采样速率设置为每秒至少10个数据点。用户可能需要调节检测器灵敏度以保持色谱峰以合适的尺寸显示。
5. 注入与塔板数测定分析相同的样品（见表4、5和6）。
6. 在所得峰的4.4%峰高处测量峰宽，以获得μL值。
图5显示了5 sigma方法，其中峰宽（w）在峰高（h）的4.4%处测得。
2）柱效测试
下文列出的柱效测试步骤可用于计算理论塔板数，该参数是衡量系统色谱柱效率的指标。
溶剂无需使用色谱柱出厂溶剂测定色谱柱的效率。使用不同的溶剂时，测得的初始塔板数将会不同。请使用常规操作溶剂分别测试色谱柱。
测试步骤
柱效测试的方法：
1. 对于HR 0.5、HR 1、HR 2和HR 4E色谱柱，将流速缓慢增至1.0 mL/min；对于所有其它色谱柱，将流速增至2.0 mL/min。
2. 适当调节检测器衰减，使色谱峰达到全尺寸的70%（噪音水平小于全尺寸的0.5%）。
3. 将记录仪纸速设置为50 mm/min，或将数据系统采集速率设置为每秒至少5个数据点。
4. 标记溶液的进样体积最高为20 μL。溶液标记物最高浓度为10%。对于溶剂高效色谱柱，进样体积最多5 μL溶液。
关于执行效率测试时所用的标记物，请参阅表4、表5或表6。
5. 记录保留时间、仪器设置和色谱柱配置，以便将来校准时可以准确重复各项条件。
6. 采用正切法计算塔板数（见图6）。利用这些结果对色谱柱整个寿命期内的性能进行比较。
7. 当任何色谱柱的塔板数低于初始值30%以上时，应更换色谱柱。
