2.×μm UHPLC色谱柱
要完全实现UHPLC色谱柱的更高柱效，就必须让液相系统的扩散效应对色谱柱的影响尽可能小。小颗粒色谱柱，会让色谱峰更窄更尖锐，提高分离度；但是，更窄的色谱峰，对柱外扩散体积更为敏感。因此，根据系统的扩散体积，匹配合适的色谱柱规格，对于实现分离性能至关重要。
如何选择合适的亚三微米色谱柱？
根据如下四步骤加以考虑：
色谱填料/键合相的选择性与耐受性：满足目标应用的需要；
色谱柱长与粒径的比值L/dp：色谱柱的柱效水平是否满足目标应用的分离度需求；
柱长L与粒径dp对柱压的影响：考虑色谱柱运行柱压，是否能兼容您的液相系统；
色谱柱内径：对于扩散体积较大的系统，选择4.6 mm内径，可以减少系统对柱效的影响程度。
色谱柱规格选择指导
系统 | HPLC | UHPLC | UPLC |
扩散体积测量值 | >40μL | 22-29μL | <20μL |
常规操作压力 | <4000 psi | <10,000 psi | <18,000 psi |
色谱柱粒径 | 3-5μm | 2-3μm | <2μm |
色谱柱内径 | 4.6 mm (3.0 mm) | 3.0mm (2.1mm) | 2.1mm (1.0 mm) |
色谱柱长度 | 75-250mm | 50-100mm | ≤150mm |
以上根据Waters LC系统来推荐色谱柱规格。
对任何LC系统都适用的柱规格
在转移LC方法时，仪器谱带展宽是需要确定的十分关键的LC仪器参数之一。了解谱带展宽，能帮助色谱分离化学家所开发的方法，兼容任何一台LC系统。如下色谱柱规格表，基于仪器谱带展宽名义测量值。
系统 | LC技术 | 谱带展宽* | 推荐色谱柱的粒径与内径 |
Shimadzu Prominence UFLC | HPLC | 41μL | XBridge 3.5, 5μm; XSelect 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0–4.6 mm I.D. |
Alliance 2695 HPLC | HPLC | 29 μL | |
Agilent 1260 UHPLC (600 bar) | HPLC | 28 pL | |
Thermo Accela UHPLC | HPLC | 21μL | XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D. |
Agilent 1290 UHPLC (1200 bar) | UHPLC | 17 μL | |
ACQUITY Arc | UHPLC | 23 μL | XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D. |
ACQUITYUPLC | UHPLC | 12 μL | ACQUITY UPLC BEH 1.7 μm; ACQUITY UPLC CSH 1.7 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 1.6 μm 2.1 mm I.D. |
ACQUITY UPLC H-Class W/Column Manager | UPLC | 12 μL | |
ACQUITY UPLC H-Class | UPLC | 9μL |
*这些测量数值基于未经调整的仪器，仅作为参考。对于系统的泵、管路连接、以及仪器参数的任何调整，都会改变该仪器的谱带展宽。
