Waters ACQUITY UPLC色谱柱怎么安装和平衡?

发表时间:2022-10-13      点击次数:633

  Waters ACQUITY UPLC色谱柱怎么安装和平衡?


  Waters ACQUITY UPLC色谱柱专用于ACQUITY UPLC系统,它采用超纯试剂在满足cGMP要求并获得ISO9001认证的工厂进行生产。每批ACQUITY BEH填料均采用酸性、碱性和中性分析物进行了色谱分析测试,并且填料的指标控制严苛,以保证色谱柱的重现性。每根色谱柱都经过单独测试,色谱柱的性能图谱和填料的批次检验证书一起存储在eCord™智能芯片上。

 

  ACQUITY Premier BEH色谱柱提供带或不带VanGuard™*集成技术(FIT)保护柱两种规格。VanGuard FIT保护柱专为延长分析柱使用寿命而设计,可减少样品基质的污染或颗粒物进入色谱柱,而不会影响分离性能。保护柱可轻松更换,以便恢复分离性能,延长分析柱的使用寿命。

 

  此外,ACQUITY Premier BEH色谱柱采用创新的MaxPeak™高性能表面技术,能够尽量减少分析物/表面相互作用,避免可能因此造成的样品损失,从而提高分析物回收率、分析灵敏度和重现性。

  

  每根ACQUITY BEH色谱柱的色谱柱包装盒或eCord智能芯片中都随附COA报告和性能测试报告。COA报告是针对填料的批次测试报告,包括填料批号、填料颗粒键和前和键合后的分析数据、测试结果和所用的测试条件。性能测试色谱图提供每根色谱柱的以下信息:批号、色谱柱序列号、USP塔板数、USP拖尾因子、保留因子以及色谱条件。

 

a. eCord安装(可能并非所有色谱柱配置都适用)

eCord智能芯片按钮专用于ACQUITY UPLC和ACQUITY Arc™系统,需要装在仪器柱温箱模块的侧面。eCord按钮经过磁化处理,不需要专门的安装操作。有关eCord智能芯片功能的更多信息,请参阅相关维护和使用手册。

 

b. 色谱柱安装(带或不带VanGuard FIT保护柱)

注:在处理ACQUITY BEH色谱柱和任何化学品之前,请咨询您的安全主管部门和/或参照当地法规,使用适当的防护装备。ACQUITY BEH色谱柱出厂时保存于100%乙腈中。下述步骤给出的流速适用于内径2.1 mm的色谱柱。

1. 灌注泵系统,排出含缓冲盐的流动相,然后将色谱柱的入口端连接至进样器出口。

2. 通过将泵流速设置为0.1 mL/min,并且在至少5 min增加至0.5 mL/min,用100%有机流动相(甲醇或乙腈)冲洗色谱柱。

3. 当流动相可从色谱柱出口均匀流出时,停流速,并将色谱柱出口连接至检测器。这能防止气泡进入检测系统。

4. 按照步骤2所述逐渐增加流速。

5. 一旦柱压和基线达到稳定状态,即可继续进行下一部分操作。

 

c. 色谱柱平衡

在更换为其他流动相体系之前,务必确保流动相的兼容性。请用至少10倍柱体积的流动相平衡色谱柱(色谱柱体积请参见表1)。当色谱柱达到恒定背压时,可认为该柱已达到热力学平衡。

表1.不同规格色谱柱柱体积(mL)(乘以 10得到冲洗色 谱柱所用的流动相体积)

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  为了避免流动相缓冲盐在色谱柱或系统中发生析出,请使用5倍柱体积的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱,其中有机溶剂比例应与所需缓冲盐流动相中的有机溶剂比例相同或更低。(例如,引入60%甲醇/40%缓冲盐流动相之前,应使用60%甲醇水溶液冲洗色谱柱和系统。)

  对于采用BEH HILIC填料的色谱柱,用50倍柱体积的50:50乙腈:水溶液(含最终浓度为10mM的缓冲盐)进行冲洗。对于采用BEH Amide填料的色谱柱,用50倍柱体积的60:40乙腈:水溶液进行冲洗。进第一针样品前,用20倍柱体积的流动相(初始条件)平衡色谱柱(色谱柱体积请参见表1)。请参阅“BEH HILIC色谱柱入门”或“Amide色谱柱入门”获取详细信息。

 

d. 初始柱效测定

1. 使用色谱柱之前,需要先进行柱效测试。这项测试可包括 :

a. 您所在实验室常用的混合标准品,和/或

b. Waters柱性能测试报告中测试柱效所用的标准品。

注:如果采用(b)项的分析物进行柱效测试,在等度条件下测得的柱效可能低于沃特世色谱柱性能报告中所示的柱效。这种情况是正常的。为了尽可能减小系统体积,沃特世的等度色谱柱测试系统进行了相应的改进。这对于色谱柱填充质量的考察相当具有挑战性,可确保色谱柱被最好地装填。

  这些经过改造的特殊测试系统不再具有商业可行性,方法的灵活性亦受限,只能用于等度色谱柱测试。

2. 测定理论塔板数(N),并定期对比该数值。

3. 按预定的时间间隔进行重复测试,跟踪色谱柱性能随时间的变化情况。所得柱效结果可能会有微小差异,这可能是由于连接质量、运行环境、系统电子设备、试剂质量、色谱柱条件和操作员技术等方面存在差异所致。


e. 色谱柱QR码

色谱柱标签上的快速参考卡(QR)码可提供色谱柱专有信息(即色谱柱的唯yi标识符 - P/N和序列号),这些信息按照广泛采用的行业标准进行编码。

1. 可使用任何能扫描QR码的设备进行扫描(即使用智能手机和平板电脑的内置摄像头应用程序进行扫描)。

2. QR码直接链接至waters.com的色谱柱信息中心。

3. 获取关于色谱柱的技术信息和专业信息(即COA报告和应用纪要)。

 

f. VanGuard保护柱

  VanGuard保护柱专门用于ACQUITY UPLC色谱柱和ACQUITYUPLC系统。这些2.1 mm(内径)× 5 mm(长)的保护柱设备所使用的UPLC填料和筛板与沃特世内径2.1 mm的UPLC色谱柱相同。VanGuard保护柱可直接连接至ACQUITY UPLC色谱柱的入口端。

注:为了确保VanGuard保护柱的连接无空隙且无渗漏,在出厂时未将保护柱的箍环和锥箍进行永jiu性固定。取下将这两个部件固定至保护柱管路的O形圈时,必须谨慎操作。

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安装说明

1. 将VanGuard保护柱从包装盒中取出,移去塑料塞头。

2. 调整保护柱方向使其外接头朝上,小心取下在运输期间用于固定箍环和锥箍的橡胶O形圈(箍环和锥箍尚未永jiu性固定)。

3. 使ACQUITY UPLC色谱柱垂直于工作台表面,且色谱柱入口朝下(色谱柱出口朝上)。

4. 将VanGuard保护柱从下方插入ACQUITY UPLC色谱柱入口,并用手拧紧(箍环和锥箍尚未永jiu性固定)。

5. 将VanGuard保护柱推入色谱柱入口后,将组装好的色谱柱和保护柱翻转180°,使保护柱位于上方。

6. 如上图所示,将两个5/16英寸扳手分别置于ACQUITY UPLC色谱柱的平坦部分和VanGuard保护柱六角螺母(外接头)处,然后拧紧。

7. 拧紧1/4圈,固定箍环和锥箍。

8. 松开接头并检查锥箍深度,确保锥箍*固定。经适当固定后,锥箍深度将与ACQUITY UPLC系统中其他连接相似。

9. 重新连接保护柱,使流动相流经保护柱,检查渗漏情况。

 

g. VanGuard FIT保护柱

  VanGuard FIT保护柱专门用于ACQUITY Premier色谱柱。对于带VanGuard FIT保护柱的ACQUITY Premier色谱柱,可以使用两个3/8英寸扳手更换VanGuard FIT保护柱。只需用扳手咬合住保护柱和色谱柱末端螺母的平坦部分,然后逆时针转动(见图1),即可拆下VanGuard FIT保护柱,然后按照实验室规范合理弃置。

  接下来可以使用新的VanGuard FIT保护柱更换弃置的保护柱。沿顺时针方向用手拧紧新的保护柱,再用两个3/8英寸扳手拧紧。正确密封的位置不应超过手拧紧处的1/4圈。

 

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