怎么使Waters ACQUITY BEH色谱柱保持良好的性能?

更新时间:2022-10-14      点击次数:581

怎么使Waters ACQUITY BEH色谱柱保持良好的性能?


为确保Waters ACQUITY BEH色谱柱始终保持理想性能,请遵循以下原则:

 

a. 样品前处理

1. 样品中的杂质往往会污染色谱柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有适合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色谱柱或Sep-Pak™小柱净化样品。

2. 为获得理想峰形和灵敏度,优先选用运行分析时拟用的流动相或比它更弱的流动相来制备样品。除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性配件包,否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。

3. 如果样品不溶于流动相,请确保样品、溶剂和流动相可以混溶,以避免样品和/或缓冲盐析出。

4. 0.2 _m滤膜过滤样品,去除颗粒物质。如果用于溶解样品的溶剂含有机溶剂(如乙腈、甲醇等),请确保滤膜材料不溶于该溶剂。请联系滤膜生产商了解滤膜的溶剂兼容性。或者,可以考虑在8000 rpm下离心样品溶液20 min,然后将上清液转移至适当的样品瓶中。

5. 对于亲水作用色谱(HILIC)分离,样品必须用高百分比的有机溶剂制备(例如95%乙腈)。请参阅相关章节。

 

b. pH范围

ACQUITY BEH色谱柱的推荐操作pH范围如下:采用BEH C18BEH C8BEH苯基填料为1~12;采用BEH Shield RP18BEHAmide填料为2~11;采用BEH HILIC填料为1~9。表2列出了常用的缓冲盐和添加剂。此外,柱寿命将根据操作温度、使用的缓冲盐类型和浓度而有所不同。例如,在高温下使用pH值为8的磷酸盐缓冲液会缩短色谱柱寿命。

 

c. 溶剂

为了保持理想的色谱柱性能,请使用高品质色谱级溶剂。所有水相缓冲盐在使用前都应使用0.2 _m滤膜过滤。推荐使用PallGelman Laboratory Acrodisc®过滤器。含有悬浮颗粒物的溶剂

通常会堵塞色谱柱入口筛板,这会导致操作压力增大,性能变差。有关详细信息,请参阅相关章节。

 

d. 压力

ACQUITY BEH色谱柱能够承受高达18000psi1241 bar124 MPa)的操作压力。

注:在压力、pH/或温度的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。

 

e. 温度

为了改善选择性、降低溶剂粘度和提高传质速率,ACQUITYBEH色谱柱的推荐操作温度范围为20 °C~90 °C。在高pH条件下操作时,建议降低操作温度以延长色谱柱使用寿命。在较高

温度下(如70 °C以上)运行也可能缩短色谱柱使用寿命。在HILIC分析中,BEH Amide色谱柱可以在高pH值和高温条件下使用,不会出现问题(请参阅“BEH Amide色谱柱入门"章节的推荐条件)。

 

2.使用ACQUITY BEH色谱柱时的推荐缓冲盐

添加剂/缓冲液

pK,

缓冲液范围

挥发性(±1pH单位)

能否用于质谱

注释

TFA

0.3

挥发性

可用

离子对添加剂,能抑制MS信号,

0.02%~0.1%范围内使用。

乙酸

4.76

挥发性

可用

与醋酸铵-起使用时缓冲能力非常强。

0.1%~1.0%范围内使用。

醋酸盐(NH3 CH3CO2)

3.75

挥发性

可用

与甲酸铵-起使用时缓冲能力非常强。

0.1%~ 1.0%范围内使用。

甲酸盐(NH4HCO2)

4.76

3.76-5.76

挥发性

可用

1~10 mM范围内使用。

:其钠盐或钾盐无挥发性。

磷酸盐1

3.75

2.75-4.75

挥发性

可用

1~10 mM范围内使用。

:其钠盐或钾盐无挥发性。

磷酸盐2

2.15

1.15-3.15

非挥发性

不可用

常用的低pH缓冲液,具有良好的UV透光性。

磷酸盐3

7.2

6.20-8.20

非挥发性

不可用

pH值大于7时,需要降低柱温/浓度并使用保护柱,以便尽可能延长使用寿命。

4-甲基吗fei

12.3

11.3-13.3

非挥发性

不可用

pH值大于7时,需要降低柱温/浓度并使用保护柱,以便尽可能延长使用寿命。

氨水(NH4OH)

~8.4

7.4-9.4

挥发性

可用

通常在10mM或更低浓度下使用。

碳酸氢铵

9.2

10.3(HCO3-)

9.2   (NH4+)

8.2-10.2

8.2-11.3

挥发性

挥发性

可用

可用

5~10mM范围内使用(进行MS分析时,需保持源温度> 150°C)。用氨水或醋酸调节pH值。pH=10时具有良好的缓冲容量。

:请使用碳酸氢铵(NH,HCO),而不是碳酸铵(INH4)2CO3)

醋酸铵

9.2

8.2-10.2

挥发性

可用

1~10 mM范围内使用。

甲酸铵

9.2

8.2-10.2

挥发性

可用

1~10 mM范围内使用。

硼酸盐

9.2

8.2-10.2

非挥发性

不可用

需要降低柱温/浓度并使用保护柱,以便尽可能延长使用寿命。

CAPSO

9.7

8.7-10.7

非挥发性

不可用

两性离子缓冲液,兼容乙腈,在1~10 mM范围内使用。气味小。

甘氨酸

2.4,   9.8

8.8-10.8

非挥发性

不可用

两性离子缓冲液,相较于硼酸盐缓冲液更有助于延长色谱柱寿命。

1-甲基哌啶

10.2

9.3-11.3

挥发性

可用

1~10 mM范围内使用。

CAPS

10.4

9.5-11.5

非挥发性

不可用

两性离子缓冲液,兼容乙腈,在1~10mM范围内使用。气味小。

三乙胺(用作醋酸盐)

10.7

9.7-11.7

挥发性

可用

0.1%~1.0%范围内使用。仅当使用乙酸滴定时具有挥发性(使用盐酸或磷酸滴定时无挥发性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作离子对试剂。

吡咯烷

11.3

10.3-12.3

挥发性

可用

温和型缓冲液,可延长柱寿命。

注:在pH、温度和/或压力的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。

 

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