美国Bio-rad关于生物分子纯化的一些指南

更新时间:2022-11-21      点击次数:1005

生物分子纯化指南

 

抗体纯化

单抗药物采用 UNOsphere SUPrA 亲和介质进行捕获UNOsphere 离子交换中间纯化最后用CHT 陶瓷羟基磷灰石进行精纯该生产工艺可直接得到高纯度的抗体并能zui有效的去除宿主蛋白聚合体DNA 和内毒素

Affi-Gel Affi-Prep Protein A 介质上偶联的Protein A 可与免疫球蛋白的Fc 链结合能有效纯化各种来源的抗体包括血清腹水和培养液等并且与哺乳动物IgG 具有更高的亲和性

DEAE/CM Affi-Gel 蓝胶双配基功能亲和凝胶其中共价结合的Cibacron blue F3GA 染料配基可以结合白蛋白蛋白酶和其他补体蛋白DEAE CM 在不同条件下能有效结合IgG因此同样可以一步纯化血清和腹水中的IgG并且洗脱液中无蛋白酶活性Protein A 的经济替代品

Macro-Prep High Q High S 两步离子交换策略非常便于IgM 的纯化纯度可达95%以上

 

Affi-Gel 10 Gel.jpg


抗原纯化

Affi-Gel Hz 活化载体通过结合抗体分子Fc 链的碳水化合物部分可以实现对IgG 分子的定向耦联这种结合产生更特异的抗原-抗体作用比其他介质高出100-300%的抗原结合量

 

Affi-Gel Hz Hydrazide Gel.jpg


重组蛋白纯化

Profinity IMAC 介质是一种用于分离带有 His-Tag 标签的重组蛋白的金属螯合介质Profinity IMAC 以最新的UNOsphere 为基质IDA 配基螯合金属Ni具有高流速高载量高分辨率的特点可一步纯化His 标签的重组蛋白

Profinity GST 预装柱是在UNOsphere 基质偶联了谷胱甘肽衍生物可以与谷胱甘肽转移酶结合用于纯化带有GST标签的重组蛋白同样具有高流速高载量高分辨率的特点

Profinity eXact 融合标签系统是基于亲和标签纯化蛋白质的系统用以解决在其他亲和标签系统中普遍存在的标签去除的瓶颈耦联在琼脂糖基质中的枯草杆菌蛋白酶可以特异性地识别枯草杆菌蛋白酶原的N 端前结构域75 个氨基酸的标签序列利用含氟的洗脱缓冲液引发了枯草杆菌蛋白酶的酶切活性可以快速而精确的从融合蛋白质中切下融合的标签同时释放出纯化的目标蛋白

★不带标签的普通重组蛋白可采用UNOsphere 离子交换介质捕获陶瓷羟基磷灰石氟代磷灰石CFTMacro-Prep 离子交换或疏水作为中间纯化或精纯的策略其中UNOsphere Q/S 具有高流速高载量低反压的特点能有效的进行样品的粗分离陶瓷羟基磷灰石对样品中的盐不敏感样品无需脱盐即可直接上样可单独用磷酸盐浓度单梯度洗脱也可以先用氯化钠浓度梯度洗脱再用磷酸盐梯度洗脱的双梯度洗脱模式从而达到更高的分辨率

 

Profinity IMAC Resins.jpg


包涵体蛋白纯化

★包涵体溶于8M 尿素或6M 盐酸胍中可直接上样于高化学稳定性的UNOsphereMacro-Prep 离子交换介质进行纯化也可以用陶瓷羟基磷灰石I 型纯化对于含His 标记的重组包涵体可用Profinity IMAC 金属螯合快速捕获并一步纯化或者进行柱上复性同步纯化

 

酶的纯化

UNOsphere 离子交换Macro-Prep 离子交换和疏水羟基磷灰石都能有效分离纯化各种酶其中羟基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM 对酶的吸附更加温和不影响酶的活性

Bio-Rex 70 弱阳离子交换树脂可提供更高的载量更温和的吸附作用并支持在位再生和清洗

 

UNOsphere SUPrA.jpg


■硫酸铵沉淀样品的纯化

★沉淀样品直接上Macro-Prep 甲基或丁基疏水洗脱组分再上陶瓷羟基磷灰石进行双梯度洗脱精纯或上离子交换进行精纯

★先以Bio-Gel P-6DG 脱盐再上离子交换单梯度洗脱或陶瓷羟基磷灰石双梯度洗脱

 

■寡糖多糖和多糖肽的纯化

Bio-Gel P-2, P-4, P-6 P-10 等可以高分辨率纯化寡糖和多糖以聚丙烯酰胺为基质不会与糖形成多氢键非特异性吸附可获得最高得率

Macro-Prep DEAE/CM/High Q High S 离子交换以聚苯乙烯二乙烯为基质可用于纯化多糖和多糖肽分辨率高无非特异性吸附

 

Bio-Gel P-2-1.png


去除内毒素

Macro-Prep 离子交换和陶瓷羟基磷灰石都能有效去除内毒素,是一种高效经济的选择

Affi-Prep 多粘菌素亲和介质可结合来自许多革兰氏阴性菌的内毒素具备很高的去除率线性流速可达2000cm/hr70bar的耐受压力可在分析级和工业级等规模上应用

 

7311550.jpg


耦联活化亲和纯化

Profinity 环氧化物介质可固化含有氨基硫醇羟基等基团的亲核配基耦联后可有效纯化蛋白质糖类和DNA 例如耦联Protein A 以纯化单抗耦联麦芽糖结合蛋白和钙调蛋白配基可有效纯化重组蛋白该介质以UNOsphere为基质具有*的物理强度􀉺高流速低反压的大孔结构可以在很高的流速下操作使得生产效率得以提高

Affi-Gel 10 可有效耦联pI 6.5-11 的中性或碱性蛋白Affi-Gel 15 用于耦联pI<6.5 的酸性蛋白蛋白偶联量为35mg/ml 凝胶

Affi-Gel Hz 活化载体通过结合抗体分子的Fc 段的碳水化合物部分实现对IgG 分子的的定向耦联抗体,,这种结合产生更特异的抗原和抗体作用比其他介质高出100-300%的抗原结合量

Affi-Gel 102 碳二亚胺活化亲和介质能耦联含初端或末端羧基的配体可以提供经济灵活的化学选择

 

■核酸和病毒纯化

CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型对超螺旋DNA 和线性DNA双链DNA 和单链DNA 具有ji高的分辨率也能有效分离纯化病毒

★基因治疗用病毒载体如腺病毒等UNOsphere S Q 两步纯化可获得最佳的纯度和得率而且容易规模放大

Chelex 100 分子生物学级树脂用于缓冲液和离子试剂的超纯化可有效去除DNA 样品中影响测序和PCR 反应的各种金属污染物也可去除各种生物样品的金属污染物

AG 50W-X8 阳离子交换树脂可有效去除DNA 样品中的溴化乙锭和碘化丙锭的污染

 

CHT Ceramic Hydroxyapatite #1584000.jpg


■去除蛋白质样品中核酸

CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型在中性pH 下对核酸有效吸附而对蛋白质吸附较弱用一定的磷酸盐浓度梯度可有效去除蛋白样品中绝大部分核酸

UNOsphere S Macro-Prep High S CM 都能有效结合带正电的目标蛋白而让核酸流穿过从而去除大部分核酸

UNOspherer Q Macro-Prep High Q DEAE 对核酸具有很高的结合能力在缓冲液的pH 值低于目标蛋白等电点的情况下使目的蛋白流穿可以高效的去处蛋白质样品中的核酸

 

CHT Ceramic Hydroxyapatite #1588200.jpg


■样品的脱盐

★蛋白质核酸等生物大分子的脱盐可采用Bio-Gel P-6DG

AG501-X8 可用于水或其他非离子物质的去离子和脱AG11 A8 混合床树脂可从蛋白样品中去除SDS 和游离的荧光染料并可从氨基酸中去除无机盐

 

■小量和微量蛋白质精纯

UNO Q/S Monolith采用连续床技术高流速超高分辨率10 分钟内分离4 个蛋白质

 

■中草药与天然产物活性成分的纯化

亲水性活性成分

UNOsphere Macro-Prep 阴阳离子交换能有效分离其中的生物酸生物碱皂甙等组分

Affi-Gel 硼胶对含邻式羟基的化合物具有高亲和力和高载量可高效分离糖糖肽核苷酸核苷儿茶酚胺等小分子化合物

★具有小分子量排阻范围的凝胶过滤层析Bio-Gel P-2P-4P-6 P-10 等能以分子排阻模式有效分离各种水溶性小分子物质分辨率ji高

AG1AG2 AG50 等分析级树脂可以分离各种小分子有机物如各种有机酸磷酸肌醇氨基酸小肽核苷酸等

 

Macro-Prep High Q Resin.jpg


亲脂性活性成分

Bio-Beads S-X 介质是中性多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球体用于亲脂性多聚物和有机洗脱溶质的分子量排阻层析含分子量0-4000-10000-2000 600-14,000等各种不同排阻范围具有ji高的分辨率兼容几乎所有的有机溶剂包括各种芳香族卤代烷等溶剂可用于分离天然产物中亲脂性的物质环境中的各种污染物如杀虫剂灭鼠剂多环芳香化合物和不饱和酯类等

 

Bio-Beads S-X3.png


单糖寡糖糖醇和有机酸的分析

Aminex HPLC 分析柱由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的 Aminex HPLC 具有良好的高压及 pH 稳定性高柱效和选择性通过离子调节分配层析技术分离混合物根据多种不同的化学特性分离分子其分离机制包括离子排阻离子交换正相和反相分配分子量排阻和配体交换等多重机制分离根据层析的物理和化学性质可选择使用一个或者多个分离机制Aminex 是工业界和分析实验室zui普遍使用的用于分析碳水化合物有机酸糖醇有机碱和其它包括肽和核苷酸的有机小分子的分析高效液相色谱柱

QQ图片20220927193640.jpg


版权所有©2024 广州信谱徕科学仪器有限公司 All Rights Reserved    备案号:粤ICP备13051513号    sitemap.xml    管理登陆    技术支持:化工仪器网