GB 31656.9-2021 食品安全国家标准
水产品中二甲戊灵残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件系首ci发布。
1范围
本文件规定了水产品中二甲戊灵残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于鱼虾、蟹、贝、海参、龟鳖类可食性组织中二甲戊灵残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ke少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 30891-2014水产品抽样规范
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的二甲戊灵经乙晴提取，HLB固相萃取柱净化，C18吸附剂去除脂类杂质，液相色谱串联-质谱法测定，内标法定量。
5试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1乙腈（C2H3N）： 色谱纯。
5. 1.2甲醇（CH4O）：色谱纯。
5.1.3 甲酸（CH2O2）：色谱纯。
5. 1.4 正已烷（C6H14）：色谱纯。
5.1.5 丙酮（C3H6O）：色谱纯。
5. 1.6氯化钠（NaCI）。
5.2溶液配制
5.2.1正己烷-丙酮溶液：取正已烷500 mL、丙酮500 mL，混匀。
5.2.2甲酸水溶液（0.1%）：取甲酸1 mL，用水稀释至1 000 mL。
5.3标准品
5.3. 1二甲戊灵（Pendimethalin，C13H19N3O4 ，CAS号：40487- 42-1），含量≥98.0%。
5.3.2氘代二甲戊灵（Pendimethalin-D5，C13H14N3O4D5，CAS号：1219803-39-0），含量≥98.0%。
5.4标准溶液配制
5.4.1 标准储备液（1 mg/ mL）：取二甲戊灵标准品约10 mg，精密称定，用乙腈溶解并稀释定容至10 ml容量瓶，摇匀，即得。4 ℃避光保存，有效期6个月。
5.4.2内标储备液（1 mg/mL）：取氘代二甲戊灵标准品约10 mg，精密称定，用乙溶解并稀释定容至10 mL容量瓶，摇匀，即得。4 ℃避光保存，有效期6个月。
5.4.3标准中间液（1μg/ mL）：准确移取二甲戊灵标准储备液0.1 mL，于100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为1μg/ml 的标准中间液。4 ℃下避光保存，有效期2周。
5.4.4内标中间液（1μg/mL）：准确移取氘代二甲戊灵标准储备液0.1 mL，于100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为1μg/mL.的内标中间液。4℃下避光保存，有效期2周。
5.5 材料
5.5.1 HLB 固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。
5.5.2 C18吸附剂：40μm~60μm。
5.5.3微孔滤膜：0.22μm，耐有机试剂。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI源）。
6.2 分析天平：感量0.01 g和0.00001 g。
6.3氮吹仪。
6.4 均质机。
6.5 涡旋混合器。
6.6离心机：10000 r/min或以上。
6.7 超声波振荡器。
6.8旋转蒸发器。
6.9固相萃取装置。
7试料的制备与保存
7.1 试料的制备
按GB/T 30891-2014 附录B的要求制样。
a） 取均质的供试样品，作为供试试料；
b） 取均质的空白样品，作为空白试料；
c）取均质的空 白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。
7.2 试料的保存
-18 ℃以下保存。
8测定步骤
8.1提取
称取试料5.0 g（准确至±0.02 g），加内标工作液50μL，混匀，依次加水6 mL、氯化钠1 g，乙腈20 mL，3 000 r/min涡旋1 min， 超声提取20 min，4 000 r/min 离心10 min。取上清液，残渣加乙腈20 mL重复提取一次，合并上清液。40℃旋蒸浓缩至近干，加乙腈3 mL溶解残渣，备用。
8.2 净化
固相萃取柱用乙腈3mL活化，取备用液过柱，控制流速不超过1mL/min，用乙腈3mL淋洗，加正已烷-丙酮溶液8mL洗脱。收集洗脱液，40℃氮吹至近干，准确加入乙腈2mL复溶，加C18吸附剂0.5g，以3000r/min涡旋1min，以4000r/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。
8.3标准曲线的制备
准确移取标准工作液、内标工作液各适量，用乙腈稀释配制成二甲戊灵浓度分别为2.5μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20μg/L、50. 0μg/L、100.0μg/L，氘代二甲戊灵浓度均为25. 0μg/L的系列混合标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。使用时现用现配。以待测物与内标物峰面积比值为纵坐标、对应二甲戊灵浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1液相色谱参考条件
a） 色谱柱：C18柱（100 mm×2. 1 mm，1. 7μm） ，或相当者；
b） 柱温：40℃；
c） 进样量：5μL；
d） 流速：0.5 mL/min；
e） 流动相：A 为乙腈，B为甲酸水溶液（0.1%）；
f） 梯度洗脱条件见表 1。
8.4.2质谱参考条件
a） 离子源：电喷雾离子源（ESI源）；
b） 扫描方式：正离子扫描；
c） 检测方式：多反应监测（MRM）；
d） 电喷雾电压：3000 V；
e） 离子源温度：150℃；
f） 脱溶剂气温度：450℃；
g） 脱溶剂气、碰撞气、辅助气等气体，在使用前应调节其流量，使质谱灵敏度达到检测要求；
h） 母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量等见表2。
8.4.3测定方法
a） 定性方法
通过试样中各组分的保留时间、特征离子与相应的标准工作液中各组分的保留时间、特征离子相对照进行定性。在相同测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对偏差在±2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的校正标准品相对丰度一致。定量与定性碎片离子丰度比应符合表3的要求。
b）定量方法
将试样溶液和标准工作液在相同的色谱质谱条件下进行测定，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，内标法计算。标准工作液和试样液中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。标准溶液的多反应监测谱图见附录A。
8.5空白试验
取空白试料，除不加标准溶液外，采用相同的测定步骤进行平行操作。
9结果计算和表述
试样中待测物残留量按标准由线或公式（1）计算。
式中：
X——试样中二甲戊灵残留量的数值，单位为微克每千克（μg/kg）；
As——标准工作液中二甲戊灵的峰面积；
A'is——标准工作液中氘代二甲戊灵的峰面积；
A——试样溶液中二甲戊灵的峰面积；
Ais——试样溶液中氘代二甲戊灵的峰面积；
Cs——标准工作液中二甲戊灵标准品浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；
C'is——标准工作液中氘代二甲戊灵标准品浓度的数值， 单位为微克每升（μg/L）；
Cis——试样溶液中氘代二甲戊灵浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；
V——试样复溶溶液体积的数值，单位为毫升（mL）；
m——供试试样质量的数值。单位为克（g）。
10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度
10.1 灵敏度
二甲戊灵的检测限为1.0μg/kg，定量限为2.0μg/kg。
10.2准确度
二甲戊灵在2μg/kg~20μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
10.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15% 。
