NY/T 1453-2007 蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定
液相色谱-质谱-质谱联用法
前言
本标准附录A、附录B、附录C为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：农业部热带农产品质量监督检验测试中心。
本标准主要起草人：吴莉宇、徐志、韩红新、吕岱竹。
1范围
本标准规定了蔬菜、水果中多菌灵等16种农药的残留用液相色谱-质谱-质谱联用测定方法。
本标准适用于蔬菜、水果中多菌灵、杀线威、噻菌灵、灭多威、吡虫啉、啶虫脒、嘧菌酯、虱螨脲、多杀菌素、咪鲜胺、氟菌唑、氟苯脲、氟虫脲、伐虫脒、霜霉威、氟铃脲残留量的测定。
16种农药的zui低检出限为0.01 mg/kg~0. 10 mg/kg。
2原理
试样用乙酸乙酯匀浆提取，过滤后的提取液浓缩，硅胶小柱净化后定容，然后采用配有电喷雾离子源液质联用仪检测，分段多事件扫描，多反应监测，外标法定量。
3规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/ T 6682分析实验用水规格和试验方法（neq ISO 3696：1987）
4试剂与材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1 水，符合GB/ T 6682，二级。
4.2乙酸乙酯。
4.3甲酸。
4.4 乙腈（色谱纯）。
4.5甲醇（色谱纯）。
4.6 丙酮。
4.7 正已烷。
4.8丙酮+正己烷溶液：10+90。
4.9甲醇+丙酮溶液：50+ 50。
4.10乙酸铵。
4.11饱和无水硫酸钠溶液。
4.12固相萃取柱：硅胶填料， 500 mg，6 mL。
4.13农药标准品：纯度≥95%。
4.14标准储备液
分别称取10 mg（精确到0. 1 mg） 16种农药标准品（4.13），于50 mL烧杯中加入乙腈（4.4）或丙酮（4.6）溶解并转移进10 mL容量瓶中，并用乙腈（4.4）定容至刻度，得到上述16种农药的各自储备液。
农药储备液在避光处，4℃可保存6个月。
4.15混合标准溶液
按照每种农药在仪器上的响应，确定其在混合标准溶液中的浓度。
4.16流动相 A
准确称取0.134 g乙酸铵（4.10），溶解在1 000 mL乙腈（4.4）中，加入适量甲酸（0.15%），过0.22μm有机相滤膜。
4.17 流动相B
准确称取0. 134 g乙酸铵（4.10）溶解于1 000 mL的水中配成浓度为2 mmol/L的乙酸铵溶液，再加入1mL甲酸后，过0.22μm水相滤膜。
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.2高速匀浆机：最大转速24 000 r/ min。
5.3氮吹仪。
5.4旋转浓缩蒸发器 。
5.5烧杯：150 mL，高型。
5.6具塞量筒：100 mL。
6分析步骤
6.1试样制备
取不少于1000g蔬菜、水果样品，取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样，放入样品瓶中并置于-20℃条件下保存，待测。
6.2 提取
称取20g（精确至0.01g）试样放入150mL烧杯中，加入60mL乙酸乙酯（4.2），用匀浆机（5.2）15000r/min匀浆提取2min后用滤纸过滤，收集滤液于100mL具塞量筒（5.6）中，用40mL乙酸乙酯（4. 2）分3次淋洗残渣，并收集淋洗液于同一具塞量简（5.6）中。在室温下静置10 min，使乙酸乙酯和水相分层。如果出现乳化现象，可以加入饱和无水硫酸钠溶液（4.11）。
准确吸取50.00mL乙酸乙酯溶液于40℃旋转蒸发器浓缩至近干，用氮吹仪（5.3）吹干后，加入2 mL丙酮+正已烷溶液（4.8）溶解，待净化。
6.3净化
固相萃取柱（4.12）分别通过10 mL丙酮（4. 6），5 mL正己烷（4.7）预处理，加入（6.2）得到的溶液，再加入5 mL丙酮+正已烷溶液（4.8），舍弃流出液。20 mL甲醇+丙酮溶液（4.9）分4次加入洗脱，收集洗脱液于40℃旋转蒸发器浓缩至约2mL，用氮吹仪吹干后，加入2mL甲醇（4.5）溶解并转移至2mL容量瓶中，定容后待测定。
6.4测定
6.4.1参考条件
a） 色谱柱：AtlantisTM dC18，3μm， 150mm×2.1mm或相当者；
b） 流动相及流速见表1；
c） 进样量：10μL；
d） 扫描方式：分段多事件扫描（正离子、负离子）；
e） 检测方法：多反应监测；
f） 电喷雾电压：4900 V；
g） 雾化气压力：0. 076 MPa；
h） 离子传输毛细管温度： 250℃。
6.4.2液相流动相梯度洗脱
液相色谱流动相梯度洗脱具体见表1：
6.4.3定性
进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，而且所选择的离子丰度比与标准样品离子丰度比相-致，则可以判断样品中存在这种农药化合物。
6.4.4定量
本方法采用外标校准曲线法单离子定量测定，通过与添加到空白样品的标准工作液中各已知质量浓度16种农药的定量离子进行比较，确定试样溶液中各自农药的浓度。定量用的标准应采用基质配制。
6.5空白试验
除不加待测样品外，均按上述步骤进行操作。
6.6结果计算
试料中16种农药的含量以质量分数表示，单位为mg/ kg，按下列公式计算：
式中：
W——试样中被测组分的残留量， 单位为毫克每千克（mg/kg）；
ρ——从标准曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——样品溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。
计算结果精确到小数点后两位。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于20%，以大于这两个测定值的算术平均值的20%不超过5%为前提。
