中华人民共和国国家环境保护标准
HJ 960-2018
土壤和沉积物 氨基甲酸酯类农药的测定
柱后衍生-高效液相色谱法
前言
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，保护生态环境，保障人体健康，规范土壤和沉
积物中氨基甲酸酯类农药的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定土壤和沉积物中10种氨基甲酸酯类农药的柱后衍生-高效液相色谱
法。
本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。
本标准为首ci发布。
本标准由环境监测司、科技标准司组织制订。
本标准起草单位：浙江省环境监测中心。
本标准验证单位：江苏省环境监测中心、杭州市环境监测中心站、绍兴市环境监测中心
站、苏州市环境监测中心站、浙江环境监测工程有限公司和中检集团理化检测有限公司。
本标准生态环境部2018年7月29日批准。
本标准自2019年1月1日起实施。
本标准由生态环境部解释。
1 适用范围
本标准规定了测定土壤和沉积物中10 种氨基甲酸酯类农药的柱后衍生-高效液相色谱法。
本标准适用于土壤和沉积物中涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、
残杀威、克百威、甲萘威、异丙威、甲硫威等10 种氨基甲酸酯类农药的测定。
当取样量为10 g，试样定容体积为1.0 ml，进样体积为15 μl 时，10 种氨基甲酸酯类农药的方法检出限为1～3 μg/kg，测定下限为4～12 μg/kg。详见附录A。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本
标准。
GB 17378.3 海洋监测规范第3 部分：样品采集、贮存与运输
GB 17378.5 海洋监测规范第5 部分：沉积物分析
HJ 494 水质采样技术指导
HJ 613 土壤干物质和水分的测定重量法
HJ 783 土壤和沉积物有机物的提取加压流体萃取法
HJ/T 166 土壤环境监测技术规范
3 方法原理
土壤或沉积物中的氨基甲酸酯类农药经有机溶剂提取、固相萃取柱净化、浓缩、定容、
用液相色谱柱分离后，在碱性条件下水解生成甲胺（式1），与衍生化试剂反应生成具有强
荧光物质（式2），用荧光检测器测定。根据保留时间定性，外标法定量。
4 干扰和消除
具有相近保留时间的物质对测定产生干扰，可通过改变流动相梯度洗脱程序、标准添加
法、定量定性波长吸收比等方法消除干扰。
5 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的不含目
标物的纯水。
5.1 乙腈（CH3CN）：液相色谱级。
5.2 甲醇（CH3OH）：液相色谱级。
5.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：液相色谱级。
5.4 氢氧化钠（NaOH）。
5.5 四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
5.6 2-巯基乙醇（HSC2H4OH）或2-二甲氨基乙硫醇盐酸盐（C4H11NS·HCl）。
5.7 邻苯二甲醛（C8H6O2）。
5.8 无水硫酸钠（Na2SO4）。
马弗炉中450℃灼烧4 h，稍冷却后置于干燥器中备用。
5.9 水解液：氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.05 mol/L。
称取2.0 g 氢氧化钠（5.4），用水溶解并稀释至1 L，经滤膜（5.19）过滤。也可直接购
买市售商品。
5.10 四硼酸钠溶液：c(Na2B4O7·10H2O) =0.05 mol/L。
称取19.1 g 四硼酸钠（5.5），用水溶解并稀释至1 L，经滤膜（5.19）过滤。也可直接
购买市售商品。
5.11 衍生化试剂。
称取0.1 g 邻苯二甲醛（5.7），溶于10 ml 甲醇（5.2）。移取200 μl 2-巯基乙醇（5.6）或称取2.0 g 2-二甲氨基乙硫醇盐酸盐（5.6），溶于10 ml 四硼酸钠溶液（5.10）。将上述2 种
溶液混合后用四硼酸钠溶液（5.10）稀释至1 L。
5.12 甲醇-二氯甲烷混合溶剂：1+2。
用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:2 体积比混合。
5.13 甲醇-二氯甲烷混合溶剂：1+9。
用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:9 体积比混合。
5.14 氨基甲酸酯类农药标准贮备液：ρ=100 mg/L。
直接购买市售有证标准溶液，按标准溶液证书要求保存。
5.15 氨基甲酸酯类农药标准使用液：ρ=10 mg/L。
取500 μl 氨基甲酸酯类农药标准贮备液（5.14）于5 ml 容量瓶中，用甲醇（5.2）定容，
混匀，置于-18℃冰箱，密封、避光保存，保存期为6 个月。
5.16 固相萃取柱：石墨化炭黑/N-丙基乙二胺复合填料萃取柱（500 mg/6 ml）或其它性能
相近的固相萃取柱。
5.17 硅藻土：0.6～0.9 mm（30 目～20 目）。
5.18 石英砂：150～830 μm（200 目～100 目）。
马弗炉中450℃灼烧4 h，稍冷却后置于洁净干燥器中备用。
5.19 滤膜：0.45 μm 聚醚砜或其它等效材质。
5.20 滤膜：0.45 μm 聚四氟乙烯或其它等效材质。
5.21 氮气：纯度≥99.99%。
6 仪器和设备
6.1 高效液相色谱仪。
6.1.1 具有荧光检测器、梯度洗脱功能。
6.1.2 具有柱后衍生系统，能自动完成衍生反应。
6.1.3 色谱柱：填料粒径为5 μm，柱长为25.0 cm，内径为4.0 mm 的C8 色谱柱或其它性能相近的色谱柱。
6.2 冷冻干燥仪。
6.3 提取装置：加压流体萃取仪（配有50 ml 以下萃取池）、索氏提取装置、自动索氏提取
仪或其他性能相当的提取装置。
6.4 浓缩装置：氮吹浓缩仪、旋转蒸发仪或其他性能相当的设备。
6.5 分析天平：感量为0.01 g。
6.6 一般实验室常用仪器和设备。
7 样品
7.1 样品采集和保存
按照HJ/T 166 的相关要求采集和保存土壤样品，按照HJ 494 的相关要求采集水体沉积
物样品，按照GB 17378.3 的相关要求采集海洋沉积物样品。样品采集后，0～4℃密封、避
光保存，7 d 内完成萃取。
7.2 样品的制备
除去样品中的异物（枝棒、叶片、石子等），将样品完全混匀。如样品水分含量较高，
应先用冷冻干燥仪（6.2）干燥。称取两份约10 g（精确至0.01 g）的样品。
土壤样品一份用于测定干物质含量；另一份用于提取。使用加压流体萃取法提取时，加
入适量硅藻土（5.17），装入萃取池中。使用索氏提取时，加入适量无水硫酸钠（5.8），装入
提取管中。
沉积物样品一份用于测定含水率；另一份用于提取，提取方法参照土壤样品。
7.3 水分的测定
按照HJ 613 测定土壤样品干物质含量，按照GB 17378.5 测定沉积物样品含水率。
7.4 试样的制备
7.4.1 提取
7.4.1.1 加压流体萃取
采用甲醇-二氯甲烷混合溶剂（5.12）提取样品中氨基甲酸酯类农药，压力10.34 Mpa，
萃取温度80℃，加热时间5 min，静态萃取时间5 min，冲洗量80%，萃取后氮气吹扫60 s，
循环萃取3 次。或按照HJ 783 进行萃取条件的设置和优化。
7.4.1.2 索氏提取
将滤筒置于索氏提取器回流管中，在圆底溶剂瓶中加入200 ml 甲醇-二氯甲烷混合溶剂
（5.12），提取12 h，回流速度控制在4～6 次/h。提取完毕，取出圆底溶剂瓶，待浓缩。
注：若经过验证也可使用其它等效提取方法。
7.4.2 浓缩
用浓缩装置（6.4）将萃取液（7.4.1）浓缩至近1.0 ml，待净化。
7.4.3 净化
用5.0 ml 甲醇-二氯甲烷混合溶剂（5.13）以2 ml/min 的速度活化固相萃取柱（5.16），在填料即将暴露于空气之前，将浓缩液（7.4.2）转移至柱头，在填料即将暴露于空气之前，用5.0 ml 甲醇-二氯甲烷混合溶剂（5.13）洗脱萃取柱，收集洗脱液于刻度管中。
注：使用不同批次萃取柱净化样品时，需通过实验确定洗脱溶剂用量。
7.4.4 净化后浓缩
用氮吹浓缩仪（6.4）将洗脱液（7.4.3）30℃ 以下浓缩至近干，用甲醇（5.2）定容至1.0ml，过滤膜（5.20），待测。
处理好的试样应于-18℃以下冰箱冷冻保存，在30 d 完成分析。
7.5 空白试样的制备
用石英砂（5.18）代替实际样品，按照与试样的制备（7.4）相同的步骤制备空白试样。
8 分析步骤
8.1 参考测量条件
8.1.1 柱后衍生条件
反应器温度：100℃，衍生泵流速：0.3 ml/min。
8.1.2 色谱条件
流动相：流动相A 乙腈（5.1），流动相B 水，梯度洗脱程序见表1。流速：0.8 ml/min；
进样体积：15 μl；柱温：37℃；荧光检测器：激发波长330 nm，定量发射波长460 nm，定性发射波长435 nm。
8.2 标准曲线的建立
移取适量的氨基甲酸酯类农药标准使用液（5.15）至5 ml 容量瓶，用甲醇（5.2）稀释
至标线，配制至少5 个浓度点的标准系列，标准系列浓度分别为0.05 μg/ml、0.50 μg/ml、1.00μg/ml、2.50 μg/ml 和5.00 μg/ml（此为参考浓度）。由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，按照测量条件（8.1）分析，以标准系列溶液中各氨基甲酸酯农药的浓度为横坐标，以其对应的峰面积（或峰高）为纵坐标，建立标准曲线。
8.3 试样测定
按照与标准曲线的建立（8.2）相同的步骤进行试样（7.4）的测定。
8.4 空白试验
按照与试样测定（8.3）相同的步骤进行空白试样（7.5）的测定。
9 结果计算与表示
9.1 定性分析
根据试样中目标物和标准溶液中目标物的保留时间进行定性。必要时还可采用标准添加
法、定量定性波长吸收比等方法辅助定性。
在本标准规定的测量条件（8.1）下，标准溶液色谱图见图1。
9.2 结果计算
土壤样品中目标物的质量浓度按照公式（3）进行计算：
式中： W 1 i——土壤样品中第i 种目标物浓度，μg /kg；
ρ1i ——土壤试样中第i 种目标物浓度，mg/L；
V 1——土壤试样定容体积，ml；
m1 ——土壤样品湿重，g；
Wdm——土壤干物质含量，%；
沉积物样品中目标物的质量浓度按照公式（4）进行计算：
式中： W 2 i——沉积物样品中第i 种目标物浓度，μg /kg；
ρ2i——沉积物试样中第i 种目标物浓度，mg/L；
V 2——沉积物试样定容体积，ml；
m2——沉积物样品湿重，g；
W H2O——沉积物水分含量，%。
9.3 结果表示
测定结果小数点位数与方法检出限保持一致，最多保留3 位有效数字。
10 精密度和准确度
10.1 精密度
六家实验室分别对含氨基甲酸酯类农药加标浓度为500 μg/kg 和5 μg/kg 的统一沉积物样品进行了6 次重复测定，实验室内相对标准偏差范围分别为：1.6%～7.6%，2.4%～13%；实验室间相对标准偏差范围分别为：4.1%～12%，4.9%～19%；重复性限范围分别为：56～73 μg/kg，1～2 μg/kg；再现性限范围分别为：79～161 μg/kg，2～3 μg/kg。
精密度结果参见附录B。
10.2 准确度
六家实验室对含氨基甲酸酯类农药均小于方法检出限的统一沉积物样品进行了加标分析测定，加标量分别为500 μg/kg 和5 μg/kg，加标回收率范围分别为：78.7%～106%，82.6%～141%；加标回收率最终值分别为：（86.7±20）%～（102±8.2）%，（93.8±10）%～（111±28）%。
准确度结果参见附录B。
11 质量保证和质量控制
11.1 空白试验
每20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）至少分析1 个实验室空白，空白测试结果应低于方法检出限。
11.2 校准
标准曲线的相关系数r≥0.995。
选择标准曲线的中间浓度点进行连续校准，每分析20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）进行1 次连续校准，测定结果相对偏差应≤20%，否则需重新建立标准曲线。
11.3 平行样
每20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）至少分析1 个平行样，平行样相对偏差≤30%。
11.4 基体加标
每20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）至少分析1 个基体加标样，加标回收率应在60%～145%之间。
12 废物处理
实验中产生的废液和废物应集中收集，并做好相应标识，委托有资质的单位进行处理。
