中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 0293-2014
代替SN 0293-1993
出口植物源性食品中百草枯和敌草快残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN 0293-1993《出口粮谷中敌草快、对草快残留量检验方法》。
本标准与SN 0293-1993 相比，主要修改如下：
——修改了标准的中文名称；
——对原标准的结构进行了修改；
——标准的适用范围由玉米增加为大米、大豆、小麦、棉籽、干木耳、甘蓝、苹果、香蕉和草莓；
——按照主要贸易国家对百草枯和敌草快的限量要求重新制定了检测低限；
——采用液相色谱-质谱/质谱法替代了原标准中的气相色谱法；
——增加了确证方法。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：吴岩、康庆贺、徐义刚、魏冬旭、沈睿至、刘永、杨长志、张瑞、王树奇。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——SN 0293-1993。
1范围
本标准规定了出口植物源性食品中百草枯和敌草快的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于大米、大豆、玉米、小麦、棉籽、干木耳、甘蓝、苹果、香蕉、草莓中百草枯和敌草快残留量的测定和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中的百草枯和敌草快残留用甲醇盐酸溶液匀浆提取，经弱酸性阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相色谱质谱/质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙腈：色谱纯。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3甲酸：色谱纯。
4.4盐酸。
4.5氢氧化钠。
4.6盐酸溶液（0.1 mol/L）：移取9 mL盐酸，用水定容至1 L。
4.7氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4.0 g氢氧化钠，用水溶解，并定容至100 mL。
4.8甲酸溶液（0.1%）：移取1.0 mL甲酸，用水稀释，并定容至1 L。
4.9乙腈-0.1%甲酸溶液（1+1，体积比）：量取50 mL乙腈，加入50 mL 0.1%甲酸溶液（4.8），混匀。
4.10乙腈-水-甲酸溶液（88+10+2，体积比） ：量取88 mL乙腈10 mL水和2 mL甲酸，混匀。
4.11甲醇-0.1 mol/L盐酸溶液（1+9，体积比）：量取900 mL 0.1 mol/L盐酸溶液（4.6），加入100 mL甲醇，混匀。
4.12百草枯二氯盐标准物质：C12 H14Cl2N2，CAS号1910-42-5，纯度大于或等于99.0%。
4.13敌草快二溴盐标准物质：C12 H12 Br2N2，CAS号85-00-7 ，纯度大于或等于99.0%。
4.14标准储备溶液：分别准确称取适量的每种标准物质，用0.1 mol/L 盐酸溶液配制成浓度为1000μg/mL的标准储备溶液，0℃~4℃冰箱中保存，有效期为6个月。
4.15混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备溶液，根据需要用乙腈-0.1%甲酸溶液（4.9）稀释成适用浓度的混合标准工作溶液， 0℃~4℃冰箱中保存，有效期为1个月。
4.16 Oasis WCX固相萃取（SPE）柱：60mg，3mL或性能相当者。使用前依次用1 mL甲醇、1 mL水活化。
4.17微孔滤膜：0.22μm，有机系。
5仪器与设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）源。
5.2固相萃取装置。
5.3分析天平：感量分别为0.0001 g和0.01 g。
5.4均质器。
5.5氮吹仪。
5.6离心机：4000r/min。
5.7高速离心机：转速不低于10000r/min.
5.8 pH计。
5.9 涡旋混合器。
5.10具塞离心管：50 mL。
5.11容量瓶：50 mL。
5.12 移液管：10 mL。
5.13刻度离心管：15 mL。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1 粮谷、豆类、棉籽和干木耳
取代表性样品约500g，取可食部分，经磨碎机充分磨碎，混勾，装入洁净容器，密封并标明标记。
6.1.2水果、蔬菜类
将水果蔬莱或去皮、核、蒂、梗、籽、芯等（不可用水洗涤），取可食部分约500g，切碎或经粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器，密封并标明标记。
6.2试样保存
粮谷、豆类、棉籽和干木耳试样可于0℃~4℃保存，水果、蔬菜类试样于-18℃冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
7测定步骤
7.1提取
称取5 g（精确到0.01 g）均匀试样，置于50 mL具塞离心管中，加入25 mL甲醇-0.1 mol/L盐酸溶液（4.11），均质提取1 min，4000r/min离心5 min，取上层提取液至50 mL容量瓶中，残留物再用20 mL甲醇-0.1 mol/L盐酸溶液重复提取一次，合并提取液于同一容量瓶中，并用水定容至刻度。准确移取10 mL提取液，用1 mol/L氢氧化钠溶液（4.7）调节pH值至7.0±0.1，并在10000 r/min离心5 min，待净化。
7.2 净化
将上述待净化液全部转移至经过预活化的Oasis WCX固相萃取柱（4.16）中，控制流速在1mL/min~2mL/min，弃去流出液。依次用1 mL水、1 mL甲醇淋洗净化柱，最后用2 mL乙腈-水-甲酸溶液（4.10）洗脱，控制流速在1mL/min~2mL/min，收集洗脱液于15mL刻度离心管中，洗脱液经45℃氮吹仪吹干后，用1，0mL乙腈-0.1%甲酸溶液（4.9）振荡溶解残渣，过0.22μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
7.3 测定
7.3.1液相色谱-质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件如下：
a） 色谱柱：Hilic柱，100mm×2.1mm（内径），粒度1.7μm，或相当者。
b） 流动相 ：
A：乙腈，B：0.1%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。
c） 流速：0.25mL/min。
d） 柱温：30℃。
e） 进样量：5μL。
f） 质谱条件：参见附录 A。
7.3.2液相色谱-质谱/质谱检测
根据样液中被测物含量，选定浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中百草枯和敌草快的响应值均应在仪器检测的线性范围内。根据样液中被测物含量情况，选定浓度相近的混合标准工作溶液，对标准工作溶液与样液等体积参插进样测定，标准工作溶液和待测样液中百草枯和敌草快的响应值均应在仪器检测的线性范围内。
7.3.3液相色谱-质谱/质谱确证
如果样液与标准工作溶液的质量色谱图中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于2.5%，所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表2）。则可判断样品中存在相应的被测物。在7.3.1条件下，百草枯和敌草快标准物的液相色谱-质谱谱图参见附录B。
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。
8结果计算和表述
用色谱数据处理软件中的外标法或按式（1）计算试样中药物的残留量：
式中：
X——试样中药物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——标准工作液中药物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
A——样液中被测药物的峰面积；
V——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
AS——农药标准溶液中被测农药的峰面积；
m——最终样液代表的试样的质量，单位为克（g）。
9测定低限和回收率
9.1测定低限
本方法对水果、蔬菜类、粮谷和豆类中百草枯和敌草快残留量的测定低限均为0.01mg/kg。
9.2 回收率
采用本方法对大米、大豆、玉米、小麦、棉籽、干木耳、甘蓝、苹果、香蕉和草莓10种食品基质进行添加回收率试验，百草枯和敌草快的添加水平和回收率见表3。
