SN/T 0162-2011 出口水果中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、 苯菌灵、噻菌灵残留量的检测方法

更新时间:2023-05-23      点击次数:233

SN_T 0162-2011 出口水果中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、苯菌灵、噻菌灵残留量的检测方法 高效液相色谱法.jpg

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 0162-2011

代替SN 0162-1992

出口水果中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、

苯菌灵、噻菌灵残留量的检测方法

高效液相色谱法

 

前言

本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 1部分:标准的结构和编写》的规定起草。

本标准是对SN 0162-1992《出口水果中甲基托布津残留量检验方法》的修订,与

SN 0162-1992相比主要变化如下:

——文本结构不同:SN 0162-1992 GB/T 1.1-1987编写,本标准按GB/T 1.1-2009 编写;

——检测物质增多:SN 0162-1992 只有甲基硫菌灵,本标准增加了硫菌灵、多菌灵、苯菌灵和噻菌灵;

——检测对象增多:SN 0162- 1992只有柑橘,本标准增加了苹果、梨、桃子和葡萄;

——删除SN 0162-1992的抽样内容(SN 0162-19922 抽样和制样");

——增加了试样制备与保存(见本标准“6 试样制备与保存");

——检测方法不同:SN 0162-1992采用气相色谱法,本标准采用高效液相色谱法;

——增加了测定低限、回收率(见本标准“8测定低限、回收率")。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准由中华人民共和国湖南出入境检验检疫局负责起草。.

本标准主要起草人:王美玲、张莹、黄志强、胡宇东、李拥军、焦艳娜、颜鸿飞。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为:

——SN 0162-1992

 

1范围

本标准规定了出口水果中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、苯菌灵、噻菌灵残留量的高效液相色谱检测方法和液相色谱-质谱/质谱确证方法。

本标准适用于出口柑橘、苹果、梨、桃子和葡萄中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、苯菌灵、噻菌灵残留量的测定和确证。

 

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

 

3方法提要

用乙腈提取试样中残留的农药,经固相萃取小柱净化后,采用高效液相色谱法检测,外标法定量,液相色谱-质谱/质谱法确证。

 

4试剂和材料

除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682规定的- -级水。

4.1乙腈:液相色谱级。

4.2 甲醇:液相色谱级。

4.3甲苯。

4.4乙酸。

4.5氯化钠。

4.6氢氧化钠。

4.7氢氧化钠溶液(0.5 mol/L :称取2.0 g氢氧化钠,用水溶解并定容至100 mL

4.8 0. 1%乙酸甲醇溶液:取1 mL乙酸,用甲醇稀释并定容至1 000 mL

4.9 甲苯-乙腈(1+3,体积比):量取100 mL甲苯,加入300 mL乙腈,混匀。

4.10甲醇-水(1+1,体积比):量取100 mL甲醇,加入100 mL水,混匀。

4.11标准物质:甲基硫菌灵(thiophanate-methylCAS号:23564-05-8)、硫菌灵(thiophanateCAS号:25564-06-9)、多菌灵(carbendazimCAS号:10605-21-7)、噻菌灵(thiabendazoleCAS号:148-79-8)。

4.12标准贮备液:分别准确称取适量的上述标准品,用甲醉配制成1.0 mg/mL的标准贮备液。多菌灵需先用少量盐酸溶解后,再用甲醇溶解定容。-18℃下避光保存。

4.13混合标准中间液:分别准确移取1.0mL单个农药的标准贮备液于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成浓度为100μg/mL的混合标准中间液,-18℃下避光保存。

4.14标准工作溶液;根据需要,临用时吸取一定量的混合标准中间液,用甲醇-水(4.10)稀释配成适当浓度的混合标准工作溶液。

4.15 石墨化碳氨基复合小柱6 mL500 mg或相当者。

4.16滤膜有机系0. 45μm

 

5仪器和设备

5.1 高效液相色谱仪,配紫外检测器。

5.2 高效液相色谱-质谱/质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。

5.3 捣碎机。

5.4 涡旋混匀器。

5.5 离心机(最大转速10000 r/min)。

5.6 固相萃取装置。

5.7旋转蒸发仪。

5.8 氮气吹干仪。

5.9 电子天平:感量为0.0001号和0.01 g

5.10 塑料离心管:50 mL,具塞。

5.11 尖嘴刻度离心管:5 mL

 

6试样制备与保存

6.1试样制备

从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,充分绞碎,混匀,均分成两份,分别装入洁净容器内。密封作为试样,标明标记。在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 试样保存

将试样于-18℃保存。

7测定步骤

7.1提取

称取5 g(精确至0.01 g)经捣碎样品于50 mL塑料离心管中,加入3 mL水,于涡旋混匀器上混合:1 min,再加入适量氢氧化钠溶液(4. 7),使试液的pH调至7~8,并加入2.0 g氯化钠,于混匀器上混匀。先用10 mL乙腈提取一次,涡旋混合3 min,以5000 r/min离心2 min。取上层清液于另一25 mL离心管中,残渣再加入10 mL乙腈,重复提取一次,合并上清液。提取液在氮气吹干仪上40℃下浓缩至近1 mL。加入0.5 mL乙酸甲醇溶液(4.8)混匀,准备过柱净化。

7.2 净化

将石墨化碳氨基复合小柱连接到固相萃取装置,用6 mL甲苯-乙腈溶液(4.9)预淋洗后,加入上述提取液(7.1),控制流速为0.5 mL/min,并用20 mL甲苯-乙腈溶液(4. 9)洗脱。收集所有流出液,在旋转蒸发仪上40℃下浓缩至近1 mL后,转移至尖嘴刻度离心管中,并用2 mL乙腈洗涤旋转蒸发瓶2次,合并洗涤液,在氮气吹干仪上40℃下浓缩至近0.5 mL,用甲醇水溶液(4.10)定容至1.0 mL,过0.45μm有机相微孔滤膜后,供高效液相色谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

7.3.1.1 色谱柱C18250 mm×4.6 mm内径),粒度5μm端基封尾或相当者。

7.3.1.2 流动相:梯度洗脱程序见表1

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7.3. 1.3流速:1.0 mL/min

7.3.1.4检测波长:276 nm

7.3.1.5柱温:30℃。

7.3.1.6进样量:20μL

7.3.2色谱测定

按照上述检测条件测定样液和混合标准工作溶液。以色谱峰面积按外标法定量。在上述色谱条件下待测物的参考保留时间分别为7.03 min(多菌灵)、8.55 min(噻蘭灵)、9.32 min(甲基硫菌灵)、13.32 min(硫菌灵)。标准溶液的液相色谱图参见图A.1

7.4空白试验.

除不加试样外,均按上述测定步骤进行。

7.5结果计算和表述

用色谱数据处理机或按照式(1)计算样品中待测物的残留量,计算结果需扣除空白。

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式中:

Xi——试样中某农药组分的残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);

Ai——样液中某农药组分的峰面积;

ci——标准工作溶液中某农药组分的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

V——样液最终定容体积,单位为毫升(mL);

Ais——标准工作溶液中某农药组分的峰面积;

m——最终样液代表的试样质量,单位为克(g)。

注:苯菌灵在分析过程中已分解成多菌灵,故:

a 当样品只施用苯菌灵农药时,苯菌灵定量结果以多菌灵计;

b 当样品只施用多菌灵农药时,与多菌灵标液比对可得多菌灵定量结果;

c 当样品同时施用苯菌灵和多菌灵农药时,苯菌灵+多菌灵合量结果以多菌灵计;

d 检测甲基硫菌灵、硫菌灵农药残留时,需同时检测多菌灵。

7.6阳性样品的确证

7.6.1确证方法

对于高效液相色谱法检出的阳性样品,用液相色谱-质谱/质谱法进行定性确证。

7.6.2液相色谱 条件

7.6.2.1色谱柱:C18柱,150 mm×4.6 mm(内径) ,粒度5μm,端基封尾或相当者。

7.6.2.2流动相:梯度洗脱程序见表1

7.6.2.3流速:0. 5mL/ min

7.6.2.4柱温:30℃。

7.6.2.5进样量:10μL

7.6.3 质谱条件

7.6.3.1离子源:电喷雾离子源。

7.6.3.2扫描方式:正离子。

7.6.3.3检测方式:多反应监测(MRM)。

7.6.3.4 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求,参考条件见附录B

7.6.3.5喷雾电压、去集簇电压、碰撞能量等参数应优化至最(zui)优灵敏度,参考条件见附录B

7.6.4定性确证结果的判定

在相同的实验条件下,样液中被测物的质量色谱峰保留时间与标准工作液相同,并且在扣除背景后的样液谱图中,所选择的离子对均出现,各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比,误差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物。在上述色谱和质谱条件下,标准溶液的多反应监测色谱图参见图C.1

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8测定低限、回收率

8.1测定低限

甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、苯菌灵和噻菌灵的测定低限均为0.05mg/kg

8.2回收率

不同样品基质添加浓度及回收率数据见表3~7

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