中华人民共和国农业行业标准
NY/T 3943-2021
水果中葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇的测定
离子色谱法
Determination of glucose， fructose， sucrose and sorbitol in fruits
by ion chromatography method
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》和GB/T20001.4--2015《标准编制规则第4部分：试验方法标准》的规定起草。
请注意本文件某些内容可能涉及专（zhuan）利。本文件的发布机构不承担识别专（zhuan）利的责任。
本文件由农业农村部种植业管理司提出。
本文件由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC 501）归口。
本文件起草单位：中国农业科学院果树研究所、青岛农业大学、青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室、山东农业工程学院。
本文件主要起草人：聂继云、匡立学、李静、张建一、高贯威、李银萍、李海飞、秦旭。
1范围
本文件规定了水果中葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇测定的离子色谱法。
本文件适用于水果中葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇的含量测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可（ke）少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样用甲醇提取，经固相萃取小柱净化，稀释，阴离子交换柱分离，脉冲安培检测器测定，保留时间定性，峰面积外标法定量。
5试剂或材料
除非另有说明，本方法所用试剂物为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1甲醇（CH4O，CAS号：67-56-1）：色谱纯。
5.2氢氧化钠溶液（NaOH，50%，质量浓度）：色谱纯。
5.3 200 mmol/L氢氧化钠溶液：准确量取10.4mL氢氧化钠溶液（5.2），用水定容至1000 mL。
5.4葡萄糖（C6H12O6，CAS号：50-99-7）：纯度为99%或经国家认证并授予标准物征证书的标准物质。
5.5果糖（C6H12O6，CAS号：57-48-7）纯度为99%全或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.6蔗糖（C12H12O6，CAS号：57-50-1）纯度为99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.7山梨醇（C6H14O6，CAS号：50-70-4）纯度为99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.8标准储备液（1.0 mg/ mL）：分别称取葡萄糖（5.4）、果糖（5.5）、蔗糖（5.6）、山梨醇（5.7）各50 mg（精确至0.1mg）于4个50mL容量瓶中，用水溶解并定容，配制成1.0mg/mL的标准储备液。4℃下保存，有效期1个月。
5.9标准工作溶液：分别量取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3. 00 mL、4.00 mL、5.00 mL葡萄糖、果糖、蔗糖标准储备液（5.8）和0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL.、0.80 mL、1.00 mL、1.20 ml山梨醇标准储备液（5.8）于6个100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配置成4种糖组分的混合标准溶液，混合标准溶液中葡萄糖、果糖、蔗糖的浓度分别为5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、30.0 mg/L、40.0 mg/L、50.0 mg/L，山梨醇的浓度分别为2.0 mg/L、4.0 mg/L、6.0 mg/L、8.0 mg/L、10.0 mg/L、12.0 mg/L。
5.10固相萃取小柱：反相C18固相萃取小柱，200 mg/6 mL，或性能相当者。
6仪器设备
6.1离子色谱仪 ：脉冲安培检测器，Au工作电极。
6.2 电子天平：感量0.01 g、0.1 mg。
6.3冷冻研磨仪。
6.4超声波清洗机：频率不低于40 kHz。
6.5离心机：转速不低于9 000 r/min。
6.6固相萃取装置。
7试样的制备
取干净果实代表性的可食部分250 g，适当切分，液氮冷冻，研磨成粉末，-18℃以下储存备用。
8分析步骤
8.1试样溶液的制备
称取5 g（精确至0.01 g）均匀试样至50 mL离心管中，加入30 mL甲醇（5.1）混匀，40 kHz的频率下室温超声提取20min，9000r/min离心15min，上清液转移至50mL容量瓶中，残渣再用10mL甲醇（5. 1）按上述步骤重复提取1次，合并2次提取液，用甲醇（5.1）定容至刻度，摇匀，得到样品提取液。吸取1.00mL样品提取液于50ml容量瓶中，用水定容至刻度。依次用5mL甲醇（5.1）和5mL水预淋洗、活化固相萃取小柱（5.10）。吸取5mL稀释后的样品提取液加入活化好的固相萃取小柱中过滤净化，弃去2mL.初始滤液，收集滤液供离子色谱分析测定。
8.2离子色谱参考条件
a）色谱柱：阴离子交换柱（PA10），250 mm×4.0 mm；
b）柱温：30℃；
c）流动相：A 为水，B为200 mmol/L氢氧化钠溶液（5.3）；
d）流速：1 mL/ min；
e）进样量：10μL；
I）工作电极：Au电极；
g）参比电极：Ag/AgCl参比电极；
h） 检测池温度：30℃；
i） 洗脱条件按表1设置。
8.3标准工作曲线绘制
按照8.2设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，依次测定系列标准工作溶液（5.9）中葡萄糖.果糖、蔗糖和山梨醇的色谱峰面积。以系列标准工作溶液（5.9）中葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇的浓度为横坐标，以相应峰面积为纵坐标，绘制葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇的浓度色谱峰面积标准曲线，标准品色谱图见附录A。
8.4试样溶液的测定
当试样溶液注入离子色谱仪中，得到峰面积。根据标准曲线得到待测液中葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨醇的浓度。若试样溶液中测定组分浓度超过标准曲线上限，应稀释至标准曲线浓度范围后再行测定。
8.5 空白试验
除不加入试样外，采用完（wan）全相同的分析步骤进行测定。
9结果计算和表述
试样中葡萄糖、果糖、蔗糖或山梨醇的含量按公式（1）计算。
式中：
ω——试样中葡萄糖、果糖、蔗糖或山梨醇的含量的数值，单位为克每百克（g/100 g）；
C——试样溶液中葡萄糖、果糖、蔗糖或山梨醇的浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
C0——空白溶液中葡萄糖、果糖、蔗糖或山梨醇的浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；
f——试样溶液稀释倍数；
m——试样的质量的数值，单位为克（g）；
10000——换算系数。
计算结果≥10.0 g/100 g时，保留3位有效数字；计算结果<10.0 g/100 g时，保留2位有效数字。
10 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%。
在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。
11检出限和定量限
当称样量为5 g时，水果中山梨醇的检出限为0.015 g/100 g，葡萄糖、果糖、蔗糖的检出限均为0.0030 g/100 g；水果中山梨醇的定量限为0.050 g/100 g，葡萄糖、果糖、蔗糖的定量限均为0.010 g/100 g。
