中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1725-2009
蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法
Determination of cyromazine residue in vegetables by HPLC
1范围
本标准规定了新鲜蔬菜中灭蝇胺残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于黄瓜、番茄、菜豆、甘蓝、大白菜、芹菜、萝卜等蔬菜中灭蝇胺残留量的测定。
本标准方法的检出限为0.02mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样（中的灭蝇胺经乙酸铵-乙腈混合溶液提取强阳离子交换萃取柱净化后，用高效液相色谱仪进行分离，在215nm处六元环上的π电子被激发，用紫外检测器检测。根据标准物质色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T 6682中规定的至少二级的水。
4.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.3乙酸铵溶液[c(CH3COONH4)=0.05 mol/ L]：称取7.70 g乙酸铵（CH3COONH4），用水溶解后转移至2L容量瓶中，用水定容至刻度。
4.4乙酸铵-乙腈溶液（1 +4）：最取200 mL乙酸铵溶液（4.3）至1L容量瓶中，用乙腈（4.1）定容至刻度。
4.5盐酸溶液[c(HCI) =0.1 mol/L] ：吸取8.5 mL盐酸（HCl）至1 L容量瓶中，用水定容至刻度。
4.6氨水-甲醇溶液（5+95） ：吸取5 mL氨水（NH3·H2O）至100 mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度。
4.7乙腈-水溶液（97 +3）：吸取3 mL水至100 mL容量瓶中，用乙腈（4.1）定容至刻度。
4.8灭蝇胺标准品：纯度≥95%。
4.9灭蝇胺标准贮备液：称取0.01 g（精确至0. 000 1 g）灭蝇胺标准品，用乙腈（4. 1）溶解并转移至10 mL容量瓶中，再用乙腈（4.1）定容至刻度，得到质量浓度约为1 000 mg/ L的灭蝇胺标准贮备液。贮于-20℃~-16℃冰柜中备用。
4.10灭蝇胺标准工作溶液：用乙腈（4.1）稀释灭蝇胺标准贮备液（4.9），得到质量浓度为1.0 mg/L和0.2mg/L的灭蝇胺标准工作溶液。
4.11强阳离子交换萃取柱（SCX）：以硅胶为基质，键合有苯磺酸官能团，规格为500 mg/6 mL。
5仪器
5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。
5.2分析天平，感量0.1 mg和0.01 g。
5.3食品加工器。
5.4均质器，6 000 r/min~36 000 r/min。
5.5具塞比色管，100 mL。
5.6旋转蒸发仪。
5.7氮吹装置。
6试样制备
取蔬菜样品可食部分，用干净纱布轻轻擦去样本表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入食品加工器中加工成匀浆。匀浆试样放入聚乙烯瓶中，于-20℃~-16℃条件下保存。称取试样时，常温试样应搅拌均匀；冷冻试样应先解冻再混匀。
7分析步骤
7.1提取与浓缩
称取试样20g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加入50mL乙酸铵-乙腈溶液（4.4），高速均质2min。均质液经铺有滤纸的布氏漏斗抽滤至100mL具塞比色管中，再用约30mL乙酸铵-乙腈溶液（4.4）冲洗烧杯和均质器刀头，均质30s左右，洗液一并滤入上述100 mL具塞比色管中，并用乙酸铵乙腈溶液（4.4）定容。盖上塞子，将滤液混合均匀。
用移液管准确吸取10mL提取液至150mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上（水浴温度40℃）浓缩至只含水的溶液（冷凝装置无液滴滴下），加入盐酸溶液（4.5）约2 mL，待净化。
7.2 净化
依次用甲醇（4.2）、水各5mL预淋活化强阳离子交换萃取柱（4.11），当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即将7.1所得溶液转移至SCX柱中。用3mL盐酸溶液（4.5）将圆底烧瓶中的残余物洗入SCX柱中，并重复一次。然后依次用水、甲醇（4.2）各5 mL淋洗SCX柱，弃去所有流出液并将小柱抽干。
用15mL氨水-甲醇溶液（4.6）分3次洗脱SCX柱，收集洗脱液于150 mL圆底烧瓶中。在旋转蒸发仪上（水浴温度40℃）浓缩至近干，氮气吹干后用2.00 mL乙腈-水溶液（4.7）溶解蒸残物，过0.45μm微孔有机滤膜，待测。
7.3色谱参考条件
7.3.1色谱柱：NH2不锈钢柱，250 mm×4.6 mm，5μm；或性能相当的色谱柱。
7.3.2流动相：乙腈-水溶液（97+3）。
7.3.3流速：1.0 mL/min。
7.3.4进样体积：10μL。
7.3.5检测波长：215 nm。
7.3.6 柱温：35℃。
7.4 测定
分别将标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
7.5空白试验
除不加试样外，均按上述分析步骤进行操作。
8结果计算
试料中灭蝇胺含量用质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：
式中：
ρs——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
Vs——标准溶液进样体积，单位为微升（μL） ；
V0——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL） ；
Vx——待 测液进样体积，单位为微升（μL）；
As——标准溶液的峰面积；
Ax——待测液的峰面积；
m——试料质量，单位为克（g）；
F——提取液体积/分取体积；
计算结果保留两位有效数字。
9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。
在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的30%。
10 色谱图
灭蝇胺标准溶液色谱图见图1。
