中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 0525-2012
代替SN 0525-1996
出口水果、蔬菜中福美双残留量检测方法
Determination of thiram residue in fruit and vegetable for export
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN0525-1996《出口水果、蔬菜中福美双残留量检验方法》。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：林黎、陈波、侯乐锡、谢丽琪、周昱、岳振峰、靳保辉。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
SN 0525-1996。
1范围
本标准规定了出口水果、蔬菜中福美双残留量的液相色谱和液相色谱质谱/质谱检测方法。
本标准适用于苹果、梨、香蕉、西瓜、芹菜、茄子和白菜中福美双残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
样品经乙腈提取，浓缩后用液相色谱仪和液质联用仪进行测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙腈：HPLC级。
4.2 甲醇：HPLC级。
4.3甲醇-水（30+70，体积比）：取30 mL甲醇（4.2）和70 mL水混合均均。
4.4甲醇-水（50+50，体积比）：取50mL甲醇（4.2）和50mL水混合均匀。
4.5甲酸：HPLC级。
4.6 醋酸铵：HPLC级。
4.7 0.05%甲酸的甲醇溶液：在200mL甲醇中加入0.1mL甲酸。
4.8 0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，体积比）：取50 mL 0.05%甲酸的甲醇溶液（4.7）和50 mL水混合均匀。
4.9醋酸铵溶液（0.05%甲酸）：5 mmol/L。准确称取0.3854 g醋酸铵（4.6），用水溶解，加0.5 mL甲酸（4.5），用水定容到1 000 mL。
4.10 无水硫酸钠：分析纯。500℃灼烧4 h，置于干燥器中备用。
4.11福美双标准物质：thiram，纯度大于99% ，CAS号：137-26-8。
4.12 福美双标准储备溶液：准确称取12.5 mg标准品（4.11），用0.05%甲酸的甲醇溶液（4.7）溶解并定容至25 mL，得到浓度为500 mg/L标准储备液，此溶液保存于棕色容量瓶中，可在-18℃条件下保存3个月。
4.13 标准工作溶液：液相色谱法：根据需要取适量标准储备液，以0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，体积比）（4.8）稀释成适当的标准工作液；液相色谱-质谱/质谱法：根据需要取适量标准储备液，以空白基质提取液，稀释成适当的标准工作液。
4.14滤膜：0. 45μm，有机系。
5仪器和设备
5.1液相色谱仪，配紫外检测器。
5.2液相色谱-质谱/质谱联用仪，配电喷雾（ESI）源。
5.3涡旋振荡器。
5.4往复式振荡器 。
5.5 旋转蒸发仪。
5.6 分析天平：感量0.1 mg和0.001 g。
5.7低温离心机：可制冷至4℃，5 000 r/ min。
5.8 塑料离心管：15 mL和50 mL。
6样品制备与保存
样品至少500g，取可食部分后将其切成小块，用组织捣碎机将样品匀浆，混合均匀后分成两份，装入洁净的样品袋内，密闭并标识；在-18℃保存避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
7测定步骤
7.1提取
7.1.1 称取4g（精确到0. 01 g）均匀试样于50 mL离心管中，加入30 mL乙腈（4.1），涡旋振荡30s，往复振荡提取10 min，在4℃下5 000 r/min冷冻离心5 min。上清液过无水硫酸钠（4.10）至一干净鸡心瓶，再用30 mL乙腈重复以上步骤，合并提取液于同一鸡心瓶。
7.1.2 提取液于30℃旋转蒸发至2 mL左右，将剩余溶液转移至一干净的15 mL离心管中，用1. 5mL甲醇-水（30+70，体积比）（4.3）洗涤鸡心瓶，洗涤液合并至上述离心管中，用甲醇-水（30+70，体积比）（4.3）定容到4 mL，过滤膜，所得样液直接供HPLC测定。
7.1.3将7.1.2所得溶液用0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，体积比）（4.8）稀释20倍，供HPLC-MS/MS测定。
7.2 测定
7.2.1液相色谱法测定方法
7.2.1.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：
a）色谱柱：Eclipse XDB-C18，250 mm×4.6 mm（内径），5μm，或相当者；
b）柱温：25℃；
c）流动相：甲醇-水（50+ 50，体积比）；
d）分析时间：15 min；
e）流速：1.0 mL/min；
f）检测波长：270nm；
g）进样量：50μL。
7.2.1.2液相色谱测定
根据试样中福美双的含量情况，选定响应值适宜的标准工作溶液进行色谱分析。标准工作溶液和待测样液中福美双的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。
在本方法条件下，福美双的参考保留时间为9.0 min。福美双的液相色谱图参见附录B中图B. 1。
7.2.2液相色谱-质谱/质谱法测定方法
7.2.2.1 色谱条件
色谱条件如下；
a）色谱柱：Eclipse XDB-C8，150 mm×2.1mm（内径），3.5μm，或相当者；
b）柱温：25℃；
c）流动相：5 mmol/L醋酸铵溶液（0.05%甲酸）（4. 9）-甲醇（50+ 50，体积比）；
d）分析时间：8 min；
e）流速0.3mL/min；
f）进样量：10μL。
7.2.2.2质谱条件
质谱条件如下：
a）离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+ ）；
b）质谱监测方式：多反应监测（MRM）。
c）其他参考质谱条件参见表A.1。
7.2.2.3 液相色谱质谱/质谱测定
本方法采用外标法定量，定量离子为m/z=119.9。为减少基质对定量的影响，需用空白样液来配制所使用的基质标准工作溶液。根据试样中福美双的含量情况，选定响应值适宜的标准工作溶液进行色谱分析。标准工作溶液和待测样液中福美双的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，福美双的保留时间约为5.1 min。福美双的多反应监测（MRM）离子色谱图参见图C. 1。
7.3定性确证
按照上述条件测定样品和标准品，样品中待测物色谱峰保留时间与标准品对应的保留时间偏差应一致，允许偏差小于±2.5%；并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
7.4空白实验
除不加待测组分外，按上述测定步骤进行。液相色谱-质谱/质谱测定所用空白基质溶液，是.上述空白溶液用0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，体积比）（4.8）稀释所得。
7.5回收率试验
阴性样品中添加标准溶液，按步骤7.1~7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。
8结果计算
按式（1）计算试样中福美双的含量，计算结果需扣除空白值。
式中：
X——试样中福美双含量，单位为微克每千克（μg/kg）；
A——样液中福美双的峰面积；
c——标准工作溶液中福美双的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
A——标准工作溶液中福美双的峰面积；
m——样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。
结果应保留三位有效数字。
9测定低限与回收率
9.1测定低限
液相色谱和液相色谱-质谱/质谱的测定低限：梨、芹菜、香蕉为0.5 mg/kg，苹果、白菜、西瓜、茄子为1. 0 mg/kg。
9.2 回收率
9.2.1福美双液相色谱回收率数据见表2。
9.2.2福美双液相色谱-质谱/质谱回收率数据见表3。
