中华人民共和国国家标准
GB 23200.108-2018
食品安全国家标准
植物源性食品中草铵膦残留量的测定
液相色谱-质谱联用法
National food safety standard-
Determination of glufosinate-ammonium residue in foods of plant–origin Liquid chromatography tandem mass spectrometry
1范围
本标准规定了植物源性食品中草铵膦残留量的液相色谱-质谱联用方法。
本标准适用于植物源性食品中草铵膦残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限（xian）量
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的草铵膦用水和甲醇提取，再经固相材料分散净化处理，净化液与氯甲酸-9-芴基甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate)反应后生成的衍生物草铵膦-FMOC(glufosinate-FMOC)经液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈(CH3CN，CAS 号：75-05-8)：色谱纯。
4.1.2甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)：色谱纯。
4.1.3 乙酸铵(CH3COONH4，CAS号：631-61-8)。
4.1.4硼酸钠(Na2B4O7·10H2O，CAS号：1303- 96 -4)。
4.1.5氯甲酸-9 -芴基甲酯(C15H11ClO2，CAS号：28920-43-6) ：纯度99.0% ，0℃~4℃保存。
4.2溶液配制
4.2.1硼酸盐缓冲溶液(50.0 g/L，pH=9)：称取5 g硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)，用水溶解并定容至100 mL。
4.2.2氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液(10.0g/L) ：称取1g氯甲酸-9-芴基甲酯，用乙腈溶解并定容至100 mL。
4.2.3乙酸铵水溶液(5 mmol/L)：称取0.385 g乙酸铵溶解于适量水中，用水定容至1 000 mL。
4.3标准品
草铵膦(C5H18N3O4P，CAS号：77182-82-2)标准品：纯度≥99.0%。
4.4标准溶液配制
4.4.1草铵膦标准储备溶液( 100 mg/L)：准确称取草铵膦标准品10.0 mg于50 mL烧杯中，用水溶解后转移到100 mL容量瓶中，并用水定容。放置于0℃~4℃冰箱，有效期6个月。
4.4.2草铵膦标准中间溶液(10 mg/L)：吸取5.0 mL草铵膦标准储备溶液于50 mL容量瓶中，用水定容。放置于0℃~4℃冰箱，有效期1个月。
4.5 材料
4.5.1中性氧化铝(Al2O3，CAS 号：1344-28-1)：0.075 mm~0.15 mm。
4.5.2多壁碳纳米管(MWCNTs)；粒径范围10nm~20nm；颗粒物长度5μm~15μm；比表面积
(225±25)m2/g。
4.5.3滤膜：0. 22μm，有机系。
5仪器和设备
5.1液相色谱 质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2 分析天平：感量0.0001g、感量0.01g。
5.3 组织捣碎仪。
5.4离心机：转速不低于 10 000 r/min。
5.5涡旋振荡器。
5.6 恒温水浴锅。
6试样制备
蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，样品取样部位按照GB 2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。
取谷类样品500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放人聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各500 g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油类搅拌均匀。
试样于-18℃以下温度保存。
7分析步骤
7.1 提取
7.1.1 蔬菜、水果、食用菌类
称取10g(精确至0.01 g)试样于50 mL离心管中，参见附录A补水，然后加入10 mL甲醇
(4.1.2)，涡旋振荡2min后，以3800r/min离心5min，待净化。
7.1.2 香辛料、茶叶类
称取2 g(精确至0.01 g)试样于50 mL离心管中，参见附录A补水，然后加入10 mL甲醇(4.1.2)，
涡旋振荡2min后，以3800r/min离心5min，待净化。
7.1.3谷物 、坚果、油料作物、植物油类
称取5g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，参见附录A补水，然后加入10mL甲醇(4.1.2)，
涡旋振荡2min后，以3800r/min离心5min，待净化。
7.2 净化
7.2.1蔬菜、水果、 坚果、食用菌类、香辛料、茶叶类、谷物类
准确吸取1mL提取液于称有5mg多壁碳纳米管(4.5.2)的2mL离心管中，涡旋1min后，以
10 000 r/min离心3 min，取上清液过0. 22μm有机系滤膜(4.5.3)于另一个2 mL离心管中，待衍生化。
7.2.2 油料作物类
用吸量管准确吸取4mL提取液于5mL离心管中，置于-20℃的冰箱中冷冻过夜，然后取1mL上清液于称有5mg多壁碳纳米管(4.5.2)和50 mg中性氧化铝(4.5.1)的2 mL离心管中，涡旋1min后，以10 000 r/ min离心3 min，取上清液过0.22 μm有机系滤膜(4.5.3)于另一个2 mL离心管中，待衍生化。
7.2.3植物油类
准确吸取 1 mL提取液直接过0.22μm有机系滤膜(4.5.3)于另一个2mL离心管中，待衍生化。
7.3 衍生化
准确吸取0. 5 mL净化后的提取液于2mL离心管中，加入0.5 mL硼酸盐缓冲溶液(4.2.1)，混匀后再加入0.5mL氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液(4.2.2)，涡旋1 min，于40℃水浴中衍生1 h，衍生后以10000r/min离心1min，取上清液过0.22μm有机系滤膜(4.5.3)，供检测。准确吸取草铵膦标准溶液(7.5)0.5mL按此方法同时进行衍生化。
7.4仪器参考条件
7.4.1液相色谱参考条件
a) 色谱柱：C18，50 mm×2.1mm，粒径1. 7μm，或相当者；
b) 流动相：A为5 mmol/L乙酸铵水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序见表1；
c) 流速：0.2 mL/ min；
d) 柱温：室温；
e) 进样体积：5μL。
7.4.2 质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 喷雾电压：3 500 V；
d) 毛细管温度：320℃；
e) 气化温度：300℃；
f) 鞘气(N2)：45 psi；
g) 辅助气(N2)：10 psi；
h) 碰撞气氩气：1.5 mTorr；
i) 检测方式：多反应监测(MRM)，多反应监测条件见表2。
7.5 标准工作曲线
将草铵膦标准中间溶液用空白提取液稀释成质量浓度为0.01 mg/ L、0. 05 mg/ L.0.1 mg/ L、
0.5mg/L和1mg/L的系列基质匹配标准溶液，经衍生化(7.3)后按参考色谱和质谱条件测定。以草铵膦质量浓度为横坐标.其衍生物的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。基质匹配标准溶液应现配现用。
7.6 定性及定量
7.6.1保留时间
被测试样中草铵膦衍生物glufosinate-FMOC色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。
7.6.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括1个母离子和2个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在草胺膦。
7.7 测定
将基质匹配标准溶液和待测溶液经衍生化后分别注入液相色谱-质谱联用仪中，以保留时间和定性离子定性，样品中草铵膦质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样，采用外标法定量。同时做空白试验。
7.8 空白试验
除不加试样外，按照7. 1~7.7的规定进行平行操作。
8结果计算
试样中草铵膦的残留量以质量分数ω计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算。
式中：
ω——试样中草铵膦残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
A——试样溶液中草铵膦衍生物的峰面积；
As——标准溶液中草铵膦衍生物的峰面积；
ρs——基质匹配标准工作溶液中草铵膦的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
m——试样的质量，单位为克(g)；
v——提取溶液总体积，单位为毫升(mL)，v= 20。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字。当结果大于1 mg/kg时，保留3位有效数字。
9精密度
9.1 在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限(r)，重复性限(r)的数据为：
a) 含量为0.05 mg/kg时，重复性限(r)为0.01；
b) 含量为0.1 mg/kg时，重复性限(r)为0.02；
c) 含量为0.5 mg/kg时，重复性限(r)为0.09；
d) 含量为1 mg/kg时，重复性限(r)为0.19。
9.2 在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限(R)，再现性限(R)的数据为：
a) 含量为0.05 mg/ kg时，再现性限(R)为0.02；
b) 含量为0.1 mg/ kg时，再现性限(R)为0.04；
c) 含量为0.5 mg/ kg时，再现性限(R)为0.16；
d) 含量为1 mg/ kg时，再现性限(R)为0.24。
10 其他
香辛料和茶叶的定量限为0.1mg/kg，其他样品的定量限为0.05mg/kg。
11图谱
11.1 5mg/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图见图1。
