中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 0500-2022
代替SN 0500-1995
出口水果中多果定残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of dodine residue in fruits for export
LC-MS/MS Method
前 言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1 部：标准化文件的结构和起草规则》和
SN/T 0001-2016给出的规定起草。
本文件代替SN 0500-1995《出口水果中多果定残留量检验方法》，与SN 0500-1995相比，主要修改如下：
——对原文件的结构进行了修改；
——采用液相色谱-质谱/质谱法代替原文件的分光光度法；
——修改了方法的定量限。
请注意本文件的某些内容可能涉及专（zhuan）利。本文件的发布机构不承担识别专（zhuan）利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国广州海关。
本文件主要起草人：张思群、丁博、曾广丰。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：
——1995年首（shou）次发布为SN 0500-1995；
——本次为第一次修订。
1 范围
本文件规定了出口水果中多果定残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于苹果、柑橘、香蕉、葡萄、梨、樱桃、油桃、草莓、牛油果等出口水果中多果定残留量的测定。
2 规范性文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可（ke）少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
试样中残留的多果定经甲醇提取，弱阳离子固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。
5 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682中规定的一级水。
5.1 甲醇：色谱纯。
5.2 乙腈：色谱纯。
5.3 甲酸：色谱纯。
5.4 无水硫酸钠。
5.5 1%甲酸-甲醇溶液：量取5.0 mL甲酸，用甲醇定容至500 mL。
5.6 多果定标准品(Dodine)，C15H33N3O2，CAS号：2439-10-3，纯度大于等于98%。
5.7 标准储备液：准确称取25 mg(精确到0.1 mg)多果定标准品，用甲醇溶解并转移至25 mL容量瓶中定容，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备溶液，-18℃避光保存，有效期为6个月。
5.8 标准中间液：准确移取0.25 mL的多果定标准储备液(5.7)于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成浓度为10.0 μg/mL的标准中间液，-18℃避光保存，有效期为1个月。
5.9 标准工作液：准确移取一定体积的标准中间液(5.8)，用1% 的甲酸-甲醇溶液分别稀释成
1.00 μg/L、2.00 μg/L、5.00 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L的系列浓度，现用现配。
5.10 弱阳离子固相萃取柱(WCX，硅胶键合醋酸基，60 mg，3 mL)。
5.11 微孔滤膜：有机相，0.22 μm。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。
6.2 分析天平：感量分别为0.01 g和0.1 mg。
6.3 涡旋混合器。
6.4 均质机。
6.5 高速离心机：10 000 r/min。
7 试样制备和保存
取代表性样品约500 g用均质机均质，装入洁净容器，密封并标记。试样置于-18 ℃冷冻保存。
在抽样及制样过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
7 分析步骤
7.1 样品处理
7.1.1 提取
称取5.0 g试样(精确到0.01 g)置于50 mL离心管中，加入4 g无水硫酸钠，加入20 mL甲醇在涡旋混合器上提取20 min，以10 000 r/min转速离心5 min，转移上清液至25 mL容量瓶中，用甲醇定容。
7.1.2 净化
弱阳离子交换柱先分别用2 mL甲醇、2 mL水活化，然后取1 mL提取液过柱，用3 mL水和3 mL甲醇淋洗后，用5 mL1%甲酸-甲醇洗脱并定容至5 mL，过0.22 μm 有机滤膜，待上机测定。
7.2 测定
7.2.1 液相色谱条件
液相色谱测定条件如下：
a) 色谱柱：C18 柱，3.0 mm(内径)×150 mm，粒径2.7 μm，或性能相当者；
b) 流动相：0.2%甲酸水溶液和乙腈(体积比30：70)，等度洗脱；
c) 流速：0.4 mL/min；
d) 进样量：5 μL；
e) 柱温：30℃。
7.2.2 质谱条件
质谱测定条件如下：
a) 离子化模式：电喷雾正离子模式(ESI+ )；
b) 检测方式：多反应监测 (MRM)；
c) 其他参考质谱条件参见附录A。
7.2.3 定性测定
在上述液相色谱-质谱/质谱条件下测定样品和标准工作溶液，如果样品中检测的质量色谱峰保留时间与多果定标准品相差在±5%以内，并且在扣除背景后所选择的两对离子对与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，其相对丰度允许偏差不超过表1的范围，则可判定样品中存在多果定。
7.2.4 定量测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，标准曲线法测定样液中多果定的含量。样品中被测物的量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。多果定标准溶液的提取离子流图参见附录B。
7.3 空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
8 结果计算和表述
采用外标法定量，用色谱数据处理软件或按式(1)计算样品中待测物残留量。计算结果需扣除空白值。
式中：
X ——试样中多果定残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
A ——样液中多果定的峰面积；
c ——标准工作溶液中多果定的浓度，单位为微克每升(μg/L)；
V ——样液最终定容体积，单位为升(L)；
AS ——标准工作溶液中多果定的峰面积；
m ——最终样液代表的试样量，单位为克(g)。
9 定量限和回收率
9.1 定量限
本方法的定量限为0.025 0 mg/kg。
9.2 回收率
本标准方法分别以苹果、柑橘、香蕉、葡萄、梨、樱桃、油桃、草莓、牛油果为空白样品基质，进行4个浓度水平的添加回收试验，每个浓度水平进行6次重复实验，测得各种基质多果定的回收率范围参见附录C。
