NY/T 3513-2019 生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法

更新时间:2023-08-30      点击次数:398

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中华人民共和国农业行业标准

NY/T 3513-2019

生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法

Determination of thiocyanate in raw milk-lon chromatography

 

1范围

  本标准规定了生乳中硫氰酸根测定的离子色谱法。

  本标准适用于牛、羊、水牛、牦牛等不同奶畜(chu)生乳中硫氰酸根的测定。

  本标准的检出限为0.25 mg/kg,定量限为0.75 mg/kg

 

2规范性引用文件

  下列文件对于本文件的应用是必不可(ke)少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。

  凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

  GB/T 6682分析实验室用水规格盒试验方法

 

3原理

  试样用乙腈沉淀蛋白,上清液加水调节并经反相固相萃取柱净化后,用离于色谱分离,电导检测器检测。以保留时间定性,外标法定量。

 

4试剂或材料

  除非另有规定,仅使用分析纯试剂。

4.1水,GB/T 6682,一级。

4.2乙腈(CH3CN)色谱纯。

4.3甲醇(CH3OH):色谱纯。

4.4丙酮(C3H6O):色谱纯。

4.5 50%氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯

4.6离子色谱淋洗液:根据仪器型号及色谱注选择和配制不同的淋洗液体系。

4.6. 1氢氧根系淋洗液由仪器自动在线生成或手工配制。

4.6.1. 1氢氧化钾淋洗液:由淋洗液自动电解发生器在线生成,浓度为45 mmol /I ~60 mmol/L

4.6.1.2氢氧化钠淋洗液(45 mmol/L):取2.34ml 50%氢氧化钠溶液(4.5),用水稀释至1 000 mL,可通入氮气保护,以减缓碱性淋洗液吸收空气中的CO2而失效,缓慢播匀,室温下可放置7 d

4.6.1.3氢氧化钠淋洗液(60 mmol/L) :取3.12 mL 50%氢氧化钠溶液(4.5) ,用水稀释至1000 mL,可通入氮气保护。以减缓碱性淋洗液吸收空气中的CO2而失效,缓慢摇习,室温下可放置7 d

4.6.2碳酸盐系淋洗液(Na2CO3浓度为5 mmol/LNaHCO3浓度为2 mmol/L,丙酮浓度为5%):准确称取0.5300g碳酸钠和0.1680g碳酸氢钠,分别溶于适量水中,转移至1000mL容量瓶,加入50mL丙酮,用水稀释定容,混匀。

4.7硫酸溶液(45 mmol/L) :移取2.45 mL浓硫酸,加入适量水中,并用水定容至1 000 mL,混匀。

4.8硫氰酸根标准储备溶液(1 000 mg/L) :将硫氰酸钠(NaSCN CAS号; 540-72-7 ,纯度≥99.99%)80℃烘箱内烘干2 h。准确称取干燥后的硫氰酸钠0.139 7 g,用水定容至100 mL,混匀。0~4℃保存,有效期为6个月。

4.9硫氰酸根标准中间溶液(10 mg/L):准确吸取1 mL硫氰酸根标准储备液(4.8),用水稀释至100mL,混匀。0~4℃保存,有效期为1个月。

4.10硫氰酸根标准系列溶液:分别准确移取硫氰酸根标准中间溶液(4.9)0 μL10μL20 μL50μL100μL500μL1 000μL用水定容至10 mL,混匀,得到浓度分别为0 mg/ L0.01 mg/L0.02 mg/L0.05mg/L0.10 mg/L0.50 mg/L1.00 mg/L的硫氰酸根标准工作液。0~4℃保存,有效期为1个月。

 

5仪器设备

5.1离子色谱仪:配抑制器电导检测器。

5.2高速冷冻离心机:8 000 r/ min4℃。

5.3天平:感量为0.1 mg0.01 g

5.4涡旋混匀器。

5.5移液器:100μL1 mL

5.6烘箱:(80±5)℃。

5.7过滤器:水系,0.22 μm

5.8反相净化小柱,如OnGuard II RP(1.0 mL),或性能相当者。

 

6样品

  采集的有代表性生乳样品可用硬质玻璃瓶成聚乙烯瓶盛放,样品采集后应尽快分析。著样品在0~6℃冷藏保存,冷藏时间不应超过48 h;若不能及时测定,应于-20℃冷冻保存,冷冻时间不应超过30 d,解冻温度不应超过60℃,解冻次数不应超过5次。冷藏、冷冻的样品需恢复至室温并摇匀,待测。

 

7试验步骤

7.1试样处理

  称取试样4 g(精确至0. 01 g),用乙腈定容至10 mL,混匀1 min,静置20 min,离心5 min。准确移取1.00 mL上清液用水定容至10 mL并混匀,备用。同时做空白试验。

7.2 提取液净化

  将反相净化小柱依次用5 mL甲醇和10 mL水活化,静置30 min,取上述溶液(7.1),过0.22μm滤膜并加载到活化好的净化反相柱上,弃去前3 mL流出液,收集滤液,待测。

7.3仪器参考条件

7.3.1仪器参考条件

7.3.1.1色谱柱:以OH-为流动相,并能使用梯度洗脱的、高容量的阴离子交换柱,如IonPac AS-16型色谱柱(4 mm×250 mm)IonPac AG-16型保护柱(4 mm×50 mm),或性能相当的离子色谱柱。

7.3.1.2抑制器:ASRS-300 4mm阴离子抑制器,或性能相当的抑制器;外加水抑制模式,抑制器电流为112 mA~ 149 mA,外加水流量1.2 mL/min

7.3.1.3淋洗液:氢氧根系淋洗液(4.6.1),流速为1.0 mL/ min,梯度淋洗。梯度淋洗条件参见表1

image.png

7.3.1.4进样体积:100 μL

7.3. 1.5 柱温: 30℃。

7.3.1.6电导池温度 35℃。

7.3.2仪器参考条件

7.3.2.1色谱柱:碳酸盐淋洗体系的高容量阴离子交换柱,如Metrosep Anion Supp5-150(4 mm×150 mm)阴离子交换色谱柱和Metrosep Anion Guard(4 mm×50 mm)专用保护柱) ,或性能相当的离子色谱柱。

7. 3.2.2抑制器:MSM II型抑制器,抑制器再生液为硫酸溶液(4.7)

7.3. 2.3淋洗液:碳酸盐系淋洗液(4.6. 2),流速为1.0 mL/min

7.3.2.4进样体积:100μL

7.3. 2.5 柱温: 30.0℃。

7.3.2.6 电导池温度:40.0℃。

7.4标准系列溶液和试样溶液分析

  按选定的仪器参考条件,对硫氰酸根标准系列溶液和试样溶液进行测定。不同淋洗液体系的标准溶液色谱图参见附录A

7.5 定性

  以硫氰酸根的保留时间定性,试样溶液中硫氰酸根的保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中硫氰酸根的保留时间一致,其相对偏差在±2.5%之内。

7.6 定量

  以硫氰酸根的浓度为横坐标、色谱峰面积(或峰高)为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于0.99。试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范围,应将试样溶液用水溶液稀释n倍后,重新测定。

 

8试验数据处理

  试样中硫氰酸根的含量以质量浓度ω计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。

image.png

式中:

c——待测溶液从标准曲线上查得硫氰酸根的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L) .

V1——样品用乙腈提取时定容体积,单位为毫升(mL)

V2——移取离心后 上清液的体积,单位为毫升(mL)

V3——上清液稀释定容的体积,单位为毫升(mL)

m——试样质量,单位为克(g)

n——上机测定的试样溶液超出规定的范围后,进一步稀释的倍数。

  计算结果保留至小数点后2位,用2次平行测定的算术平均值表示。

  注:试样中测得的硫氰酸根离子含量乘以换算系数1.40,即得硫氰酸钠含量。

 

9精密度

  在重复性条件下,2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%


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