中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4591-2016
出口水果蔬菜中脱落酸等60种农药残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of 60 pesticide residues including abscisic acid
in fruits and vegetables for export-LC-MS/MS method
1范围
本标准规定了水果蔬菜中脱落酸、对氯苯氧乙酸(4-CPA)、2-甲-4-氯苯氧乙酸(MCPA)、2-(4-氯苯氧基)丙酸(4-CPP)、2-萘氧乙酸、2-甲-4-氯苯氧基丙酸(MCPP)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、噻苯隆、6-苄氨基嘌呤、2-甲-4-氯苯氧基丁酸(MCPB)、2,4-滴丙酸、地乐酚、特乐酚、苯达松、氯吡脲、2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-T)、氟草烟、绿草定、五氯（lv）苯酚、噻酰菌胺、2,4,5-涕丙酸、环丙酸酰胺、溴苯腈、甲基咪草烟、咪草烟、抑草生、环酰菌胺、甲氧咪草烟、灭幼脲、除虫脲、灭草喹、麦草氟、氯甲酰草胺、嘧草硫醚、氟草灵、恶唑禾草灵、氟吡草腙、喹禾灵、氟幼脲、赤霉酸(GA3)、氨磺乐灵、杀铃脲、双氟磺草胺、三氟羧草醚、吡氟氯禾灵、碘苯腈、氟苯脲、磺菌胺、双草醚、氟虫腈、氟磺胺草醚、氟铃脲、氟啶胺、氟虫脲、氟酰脲、啶蜱脲、虱螨脲、噻呋菌胺、氟啶脲、氟虫双酰胺60种农药残留量的液相色谱质谱/质谱检测方法。
本标准适用于苹果、桃子、大葱、西红柿、西兰花、菠菜、芦笋、荷兰豆、胡萝卜、香菇、橙、葡萄、猕猴桃中上述60种农药残留量的筛选检测。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品中残留的农药采用含1%乙酸的乙腈溶液提取，经无水硫酸镁及乙酸钠盐析分层，提取液经无水硫酸镁、C18固相吸附剂分散固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，基质匹配标准曲线外标法定量。
4试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙腈：液相色谱纯。
4.2甲酸：液相色谱纯。
4.3乙酸：液相色谱纯。
4.4无水乙酸钠。
4.5无水硫酸镁：550℃灼烧4 h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。
4.6 C18固相吸附剂：粒径40 μm~60 μm。
4.7 1%乙酸-乙腈：10 mL乙酸(4.3)加990 mL乙腈(4.1)混匀。
4.8 0.1%甲酸水溶液：移取1.0 ml甲酸(4.2)加入1 000 mL水中，摇匀备用。
4.9 0.1%甲酸-乙腈：移取 1.0 mL甲酸(4.2)加入1 000 mL乙腈(4.1)中，摇匀备用。
4.10 60种农药标准品：纯度大于或等于97%，见表A.1。
4.11标准储备溶液：准确称取适量标准物质，分别以乙腈配制浓度为100μm/mL的各个农药标准溶液，-18℃ 避光保存。
4.12 混合标准溶液：以乙腈配制氟虫腈浓度为0.2 μg/mL、其他59种农药浓度为1.0 μg/mL的60种农药混合标准溶液，0℃~4℃避光保存。
4.13混合标准工作溶液：吸取适量的上述混合标准溶液，用空白样品基质配制成适当浓度的混合标准工作溶液，现配现用。
4.14微孔滤膜：0.2 μm，有机型。
5仪器和设备
5.1 高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。
5.2电子天平：感量(0.1 mg和0.01 g)。
5.3组织捣碎机。
5.4高速均质器：8000 r/ min。
5.5离心机：4 000 r/min。
5.6氮吹仪。
5.7涡旋混合器。
5.8离心管：50mL，聚丙烯材质(PP)。
6试样制备与保存
6.1试样制备
取代表性试样500g，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。
6.2试样保存
试样于-18℃以下冷冻保存。
在制样和保存的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
7分析步骤
7.1提取
称取10 g(精确到0.01 g)均质试样于50 mL具塞离心管中，加入20 mL含1%乙酸的乙睛溶液(4.7) .4.0 g无水硫酸镁(4.5)、1.0 g无水乙酸钠(4.4)，高速均质(8000 r/min)1 min，4 000 r/rain 离心5 min。
7.2净化
取上层溶液5 mL于预先加有250 mg C18(4.6)及750 mg无水硫酸镁(4.5)的离心管中，涡旋30 s，以4 0000 r/min离心5 min，静置30 min，取0.5 mL上清液至离心管中，加入0.5 mL 0.1%甲酸水溶液混匀，经0.2μm微孔膜过滤，供液相色谱串联质谱仪检测。
7.3测定
7.3.1 液相色谱条件
液相色谱条件如下：
a)色谱柱：C18，150 mm×2.1 mm(内径)，粒径3.5 μm或相当者；
b) 柱温：30℃；
c) 进样量：10 μL；
d) 流动相：0.1%甲酸水溶液(A相)和0.1%甲酸-乙腈(B相)，梯度洗脱参见表1；
e) 流速：0.2 mL/min。
7.3.2质谱条件
质谱条件如下：
a) 离子化模式：电喷雾电离负离子模式(ESI- )；
b) 质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；
c) 雾化气、气帘气辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录B；
d) 喷雾电压、去簇电压 、碰撞能量等参数应优化至最（zui）优灵敏度，参考条件参见附录B。
7.3.3液相色谱-质谱/质谱检测
7.3.3.1定性测定
在相同的实验条件下，样液中被测物的色谱峰保留时间与基质标准溶液一致；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。
7.3.3.2定量测定
根据试样中被测物的含量，选取响应值适宜的标准工作溶液进行分析。标准工作液和待测样液中农药的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应稀释到合适浓度后分析。
在上述仪器条件下，60种农药的保留时间参见表B.1，混合标准溶液的提取离子色谱图参见图C.1。
7.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
7.5 结果计算与表述
按式(1)或仪器数据处理系统计算所测农药的残留含量，计算结果需扣除空白值。
式中：
X——试样中待测组分的含量，单位为微克每千克(μg/kg)；
c——从基质标准曲线上得到的样液中分析物的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
V——样品定容体积，单位为毫升(mL)；
m——样品称样量，单位为克(g)。
计算结果保留整数位。
8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法中氟虫腈测定低限为2μg/kg、其他59种农药的测定低限均为10μg/kg。
8.2回收率
苹果、桃子、大葱、西红柿、西兰花、菠菜、芦笋、荷兰豆、胡萝卜、香菇、橙、葡萄、猕猴桃中60种农药的添加水平及回收率数据参见表D.1.表D.2。
