中华人民共和国国家标准
GB/T 42307-2023/ISO 18643：2016
肥料和土壤调理剂 尿素基肥料中缩二脲含量的测定 高效液相色谱法
Fertilizers and soil conditioners-Determination of biuret content
of urea-based fertilizers-HPLC method
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件等同采用ISO 18643：2016《肥料和土壤调理剂 尿素基肥料中缩二脲含量的测定 高效液相色谱法》。
本文件增加了“术语和定义"一章。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国石油和化学工业联合会提出。
本文件由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会(SAC/TC 105)归口。
本文件起草单位：上海化工院检测有限公司、上海化工研究院有限公司、贵州省产品质量检验检测院、广东拉多美化肥有限公司、鄂尔多斯市亿鼎生态农业开发有限公司、四川众康检测技术服务有限公司。
本文件主要起草人：章明洪、黄河清、颜坤、周大颖、王晓春、张静、李革伟、田烨玮、周煜。
1范围
本文件描述了高效液相色谱法测定液体和固体尿素基肥料中缩二脲含量的方法。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
ISO 3696分析实验室用水 规格和试验方法(Water for analytical laboratory use-Specification
and test methods)
注： GB/T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
肥料中的缩二脲含量采用乙腈水流动相提取，基于反相液相色谱法以氨基/氨丙基柱将缩二脲与其他组分分离，用紫外检测器进行检测。
5试剂或材料
警示：根据化学晶安全技术说明书，乙腈是易燃的有毒试剂，相关操作应在通风栅中进行。本文件未指出所有的安全隐患，操作人员有责任采取必要的安全和健康防护措施，并保证相关操作符合相关地区的法律法规。
只能使用确认为ISO 3696中三级水的水。
5.1乙腈：色谱纯。
5.2流动相：150 mL水+850 mL乙腈，使用前用0.22 μm滤膜过滤，并超声脱气10 min。
注：另一种使用无乙腈流动相的测试方法及其应用的局限性见附录B。
5.3缩二脲标准溶液(0.5 mg/mL)：称取0.500 0 g高纯度缩二脲，溶解于流动相(5.2)中，转移至1 L容量瓶中，用流动相(5.2)稀释至刻度，摇匀。
缩二脲纯度不低于97%，而且试剂标签上标明的纯度是根据缩二脲含量而非氮含量计算得到。AOAC 960.04A(c)、ISO 17322等标准中提供了纯化缩二脲的步骤。
6仪器设备
6.1实验室常用仪器设备。
6.2超声波清洗器。
6.3 高效液相色谱仪；带紫外检测器。
6.4微量注射器：5 μL~50 μL。
6.5 针头过滤器：带孔径0.22 μm有机相微孔滤膜。
6.6进样环：10 μL。
6.7试验筛：孔径为0.5 mm。
7试验步骤
7.1样品制备
对于尿素，取缩分后的500g样品作为试样；对于复混肥料，取缩分后的100g样品进行研磨，直至样品颗粒均小于0.50 mm，混匀，置于洁净、干燥的带盖瓶中；液体肥料经多次摇动后，迅速取出约100 mL，置于洁净、干燥的带盖瓶中。
7.2试样溶液的制备
做两份试料的平行测定。
称取试样0.1 g~0.5 g(精确至0.000 1 g，以含缩二脲1 mg~2 mg为宜)，置于25 mL烧杯中，加入10 mL流动相(5.2)，置于超声波清洗器中，超声10 min使其溶解。转移到25 mL容量瓶中，并用流动相(5.2)定容，摇匀，静置，用针头过滤器过滤，得到试样溶液。
7.3缩二脲工作标准溶液的配制
按表1所示，分别移取0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、3.00 mL、5.00 mL以及10.00 mL缩二脲标准溶液(5.3)，置于6个25 mL容量瓶中，用流动相(5.2)稀释至刻度线，摇匀。用0.22 μm有机滤膜过滤。
7.4 高效液相色谱条件
推荐的高效液相色谱操作条件见表2，其他能达到同等分离程度的高效液相色谱操作条件均可使用。
表2推荐的高效液相色谱操作条件
色谱柱 | |
流速 | 1.0 mL/min~1.3 mL/min |
进样量 | 10μL |
色谱柱温 | 35℃ |
检测波长 | 195 nm |
*如果色谱柱是新的或超过一周未使用，在室温下使用色谱纯异丙醇冲洗色谱柱4 h，流速通常为1 mL/min，冲洗过程中保持色谱柱背压在2×107Pa(200 bar)以上。用乙腈以1 mL/min的流速再次冲洗色谱柱4h，然后用流动相以1 mL/min的流速冲洗至达到稳定的基线。 | |
注1；根据不同的设备和情况，确定最佳的分离条件。
注2：根据尿素基肥料的种类，可使用其他条件。
注3；另一种使用无乙腈流动相的测试方法见附录B。
7.5标准曲线的绘制
将液相色谱仪调节至最佳测定状态。分别进样10 μL，测定缩二脲工作标准溶液系列(7.3)。每个工作标准溶液重复测定两次。以测得的峰面积均值与其对应的缩二脲质量绘制标准曲线，或建立线性回归方程。
7.6试样溶液中缩二脲含量的测定
用与测定工作标准溶液相同的方法测定试样溶液(7.2)，测得峰面积，然后根据标准曲线或线性回归方程求得每份试样溶液中的缩二脲质量。完成测定后，先用流动相(5.2)冲洗色谱柱30 min，再用乙腈(5.1)冲洗色谱柱30 min，最后根据操作程序关闭仪器。
7.7试验数据处理
试样中缩二脲含量ω，以质量分数计，数值用%表示，按式(1)计算：
式中：
m——与峰面积相对应的由标准曲线或线性回归方程计算出的试样溶液中缩二脲的质量的数值，单位为毫克(mg)；
m——试料质量的数值，单位为克(g)。
取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。
7.8 精密度
7.8.1实验室间比对试验
方法精密度的实验室间比对试验详见附录A。
7.8.2重复性
重复性限r为0.022，数值用%表示。
7.8.3再现性
再现性限R为0.102，数值用%表示。
8检测报告
检测报告应至少包含以下信息：
a)识别样品的完整信息；
b)使用的检测方法，提及本文件(如GB/T 42307-2023)；
c)检测结果；
d)采样日期和采样程序(如果已知)；
e)检测结束的日期；
f)重复性限是否满足要求；
g)本文件中未规定或视为可选的所有操作细节，以及测试时发生的可能影响测试结果的任何事件。
