SimplyLab桔青霉素免疫亲和柱

免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的桔青毒素，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析或处理后用荧光光度计检测。

SimplyLab桔青霉素免疫亲和柱测定的基础是抗原-抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的桔青霉素素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过桔青霉素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱桔青霉素，然后注入到分析仪器中用于检测。

样品处理：

方法一：适用于玉米、大米等粮食作物。

----10g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过1mm分样筛）加入50mL提取液（70%甲醇-水溶液）混匀；

----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液或者离心机（8,000r/min）离心10min，取上清液备用；

----取5mL上清液（或滤液）加入35mL磷酸溶液（6.3）稀释，摇匀作为上样液备用；

----取20mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：2

方法二：适用于红曲及其制品

----1g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过1mm分样筛）加入20mL提取液（70%甲醇-水溶液）混匀；

----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液或离心机（8,000r/min）离心10min，收集上清液；

----取1mL滤液或上清液0.1%PBST溶液39mL稀释，摇匀作为上样液；

----取10mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：80

SimplyLab桔青霉素免疫亲和柱的操作程序：

----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成注射器筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定；

----取适量步骤7中处理后的溶液，注入到注射器筒中；

----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出；

----待液体排干后，净化样品为粮食类时，加入5mL磷酸溶液（6.3）洗涤，流速1～2滴/秒；

----待液体排干后，净化样品为红曲及其制品时，加入10mL 0.1%PBST（6.4）洗涤，流速1～2滴/秒；

采用HPLC分析时，按以下步骤操作：

洗脱方法：

----待液体排干后，用2mL甲醇洗脱，流速1滴/秒，收集洗脱液；

----洗脱液用0.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。

*每次上样前都要将上次液体完全排干。